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60704ES10B-27無血清添加劑,，去除維生素,，50X
| 參考價(jià): | 面議 |
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)- 60704ES10 產(chǎn)品型號(hào)
- Yeasen/翌圣生物 品牌
- 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
- 上海市 所在地
訪問次數(shù)：920更新時(shí)間：2023-03-15 08:59:31
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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 10ml |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | 60704ES10 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè) |
產(chǎn)品介紹
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號(hào) | 規(guī)格 | 價(jià)格（元） |
B-27 supplement without Vitamin A,serum free,50X B-27無血清添加劑,，去除維生素，50X | 60704ES10 | 10mL | 1385 |
產(chǎn)品描述
B-27是一種最常被引用的神經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)添加劑,，是一種優(yōu)化的無血清添加劑,，用于支持胚胎、出生后和成年海馬神經(jīng)元和其他中樞神經(jīng)系統(tǒng)（CNS）神經(jīng)元的生長(zhǎng)和活性維持,。B-27無血清添加劑以50倍工作液提供,，旨在與神經(jīng)基底培養(yǎng)基一起使用，神經(jīng)基底培養(yǎng)基用于神經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)，無需星形膠質(zhì)細(xì)胞飼養(yǎng)層,。
在神經(jīng)元基礎(chǔ)培養(yǎng)基中使用B-27添加劑,，用于培養(yǎng)產(chǎn)前和胚胎神經(jīng)元，以獲得優(yōu)化的活性和長(zhǎng)期的存活率,。
在神經(jīng)元基礎(chǔ)培養(yǎng)基中使用B-27添加劑,，用于培養(yǎng)神經(jīng)來源的腫瘤細(xì)胞系，可有效地保證其活性,。
在DMEM/F12培養(yǎng)基中添加B-27添加劑,，已被證明可支持?jǐn)U增來自小鼠胚胎紋狀體和中腦的EGF響應(yīng)性的前體細(xì)胞。
本產(chǎn)品從標(biāo)準(zhǔn)配方中去除了維生素,，以防止神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)細(xì)胞分化,。
本產(chǎn)品供科學(xué)研究和生產(chǎn)使用，用于組織和細(xì)胞的體外培養(yǎng),。
產(chǎn)品性質(zhì)
中文名稱（Chinese Name） | B-27無血清添加劑,，去除維生素，50X |
英文名稱（English Name） | B-27 supplement without Vitamin A,serum free,50X |
外觀（Appearance） | 淡粉色澄清液體 |
運(yùn)輸和保存方法
干冰運(yùn)輸,。-30 ~ -5℃保存,，24個(gè)月有效。
使用方法
1.*培養(yǎng)基制備
置于4°C解凍本產(chǎn)品,。
在使用前無菌添加2%本產(chǎn)品和0.5 mM L-谷酰胺至神經(jīng)元基礎(chǔ)培養(yǎng)基,，配制成神經(jīng)元*培養(yǎng)基（注：下文中出現(xiàn)的“神經(jīng)元*培養(yǎng)基"即指此種添加了B-27添加劑和L-谷酰胺的神經(jīng)元基礎(chǔ)培養(yǎng)基）注意：剩余的本產(chǎn)品可以等分成工作體積，并儲(chǔ)存在-30 ~ -5℃,。在以后的試驗(yàn)中根據(jù)需要解凍相應(yīng)體積的本產(chǎn)品,。避免反復(fù)凍融。
對(duì)于原代海馬神經(jīng)元培養(yǎng),，神經(jīng)元*培養(yǎng)基（由前述步驟制備）需要額外補(bǔ)充25 μM的L-谷酸,，在培養(yǎng)的第4天以后的換液中應(yīng)不再添加谷酸。配置好的*培養(yǎng)基,，可于2-8℃的避光保存一周,。
2.細(xì)胞培養(yǎng)步驟
下列步驟已在大鼠胎兒原代海馬和皮層神經(jīng)元，以及神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系中測(cè)試,。
用無菌的冷的0.05 mg/mL多聚賴氨酸水溶液包被培養(yǎng)表面(玻璃或細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)塑料),，每平方厘米表面使用0.15 mL，在室溫下保溫1 h,。
去除多聚賴氨酸溶液，并用無菌蒸餾水沖洗兩次(須*清洗,，因?yàn)槎嗑圪嚢彼釋?duì)細(xì)胞有毒性),。在超凈工作臺(tái)中打開培養(yǎng)板的蓋子通風(fēng)，直到每個(gè)孔都*干燥。培養(yǎng)板干燥后可以立即使用或在4°C最多保存2周,。
根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室程序或隨細(xì)胞提供的說明書分離原代的大鼠神經(jīng)元或解凍凍存的原代大鼠神經(jīng)元,。
在預(yù)熱的(37°C)神經(jīng)元*培養(yǎng)基中（如前所述的方法制備)接種細(xì)胞，建議的細(xì)胞密度為160個(gè)細(xì)胞/mm2,，或必要時(shí)使用自行優(yōu)化的細(xì)胞密度,。注意：對(duì)于海馬神經(jīng)元，培養(yǎng)基中須添加25μM L-谷酸,，參見“*培養(yǎng)基的制備",。
在36°C至38°C，含5%二氧化碳的潮濕環(huán)境中培養(yǎng)（使用自然空氣也是可接受的,，但推薦含9%氧氣和5%二氧化碳的氣體環(huán)境）,。
培養(yǎng)4-24小時(shí)后，更換一半體積的新鮮培養(yǎng)基,，繼續(xù)在培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。
對(duì)海馬神經(jīng)元以外的細(xì)胞：在接種4天后，更換一半體積的新鮮的*培養(yǎng)基,，之后每三天重復(fù)一次,。對(duì)海馬神經(jīng)元：接種三天后，用不含L-谷酸的新鮮培養(yǎng)基更換一半體積的培養(yǎng)基,。之后每三天重復(fù)一次,。注意：在*培養(yǎng)基中添加25 µM 2-，可改善海馬神經(jīng)元的長(zhǎng)期存活率,。
3.分離原代大鼠胚胎神經(jīng)元
下列程序推薦用于培養(yǎng)受精18天的大鼠胚胎海馬神經(jīng)元和大腦皮層神經(jīng)元,。
從受精18天的大鼠胚胎中分離大腦皮層和雙側(cè)海馬
在預(yù)置了Hibernate-E*培養(yǎng)基的錐形管中收集所有的組織。放置,，直到所有的組織都已解體,。
使組織沉積在管的底部，然后小心地去除上清液,，只留下剛好可覆蓋組織的最少量的培養(yǎng)基,。
在不含鈣離子的Hibernate-E培養(yǎng)基中，使用2 mg/mL過濾滅菌的木瓜蛋白酶溶液,，在30°C酶解組織大約30 min,，其間每5 min輕搖錐形管以幫助降解。每對(duì)海馬組織使用2 mL酶溶液,。
加入兩倍體積的Hibernate-E*培養(yǎng)基以恢復(fù)二價(jià)陽離子的濃度,，停止酶解。
使未解離的組織沉降至管底（約2 min）,，然后把上清液轉(zhuǎn)移到15 mL離心管中,，以150×g離心5 min。
在1 mL神經(jīng)元*培養(yǎng)基中重懸沉淀物，取一小份(例如10 μL)進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù),。后續(xù)的操作按照“復(fù)蘇和培養(yǎng)凍存的神經(jīng)元"的第8-10步驟進(jìn)行,。
4.復(fù)蘇和培養(yǎng)凍存的神經(jīng)元
重要提示：原代神經(jīng)元細(xì)胞將會(huì)貼附在裸露的塑料或玻璃表面，建議事先用神經(jīng)元*培養(yǎng)基沖洗所有的塑料和玻璃器皿的內(nèi)表面,，以獲得最高的回收率和產(chǎn)量,。由于細(xì)胞從凍存狀態(tài)復(fù)蘇時(shí)極其脆弱，請(qǐng)?jiān)谡麄€(gè)操作過程中不要震蕩或離心細(xì)胞,。我們建議每次只解凍一管細(xì)胞,。務(wù)必減少?gòu)囊旱修D(zhuǎn)移凍存管到37°C水浴中的操作時(shí)間。細(xì)胞從液氮罐到水浴的運(yùn)輸過程中,，可在冰桶中放少量液氮,，將細(xì)胞置于這個(gè)冰桶中來進(jìn)行。
在解凍細(xì)胞之前,，用神經(jīng)元*培養(yǎng)基沖洗無菌的15 mL錐形管,，然后在超凈工作臺(tái)中通風(fēng)晾干。
從液氮中取出凍存管時(shí)可稍微擰松管帽以釋放壓力,，然后再擰緊,。
在37°C水浴中輕柔攪拌凍存管以快速解凍細(xì)胞（小于2 min）。當(dāng)觀察到凍存管中只有很少量的冰晶存在時(shí)（觸摸凍存管仍然感覺是冷的）從水浴中取出,。
在超凈工作臺(tái)中用70%的異丙醇消毒凍存管,。在工作臺(tái)臺(tái)面上輕敲凍存管以使管內(nèi)液體沉降到管底。
使用事先用神經(jīng)元*培養(yǎng)基沖洗并干燥過的1 mL吸頭極其輕柔地將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到事先沖洗并干燥的15 mL錐形管中,。
用1 mL預(yù)熱的神經(jīng)元*培養(yǎng)基沖洗沖洗凍存管,，以每秒一滴的速度極其緩慢地加入到15 mL錐形管中的細(xì)胞里。每加一滴都輕柔地轉(zhuǎn)動(dòng)錐形管一次,。不要一次即把全部培養(yǎng)基加到錐形管中,。
慢慢地逐滴加入另外2 mL預(yù)熱的*培養(yǎng)基，使管內(nèi)的液體體積為4 mL,。用1 mL吸頭輕柔地混合液體,，注意不要造成任何氣泡。
用一個(gè)事先沖洗干燥過的吸頭吸取10 μL細(xì)胞懸液加入到含有10 μL 0.4%臺(tái)盼藍(lán)的微量離心管中,，輕敲管壁以混勻溶液,。使用手動(dòng)的細(xì)胞計(jì)數(shù)方法測(cè)定活細(xì)胞密度。解凍的細(xì)胞的活率應(yīng)超過50%,。
在已經(jīng)事先用多聚賴氨酸包被（參見“細(xì)胞培養(yǎng)步驟"）的48孔板中每孔中接種大約1×10 5個(gè)細(xì)胞或按所需的細(xì)胞密度接種,。加入預(yù)熱的神經(jīng)元*培養(yǎng)基將細(xì)胞懸液稀釋到每孔500 μL。
按照“細(xì)胞培養(yǎng)步驟"中的5-6步驟進(jìn)行神經(jīng)元的培養(yǎng),。在36°C至38°C,，含5%二氧化碳的潮濕環(huán)境中培養(yǎng)（使用自然空氣也是可接受的,，但推薦含9%氧氣和5%二氧化碳的氣體環(huán)境）,。
HB211229
