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翌圣生物科技（上海）股份有限公司
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FastCut BglII快速限制性內(nèi)切酶
| 參考價: | 面議 |
具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)- 產(chǎn)品型號
- Yeasen/翌圣生物 品牌
- 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
- 上海市 所在地
訪問次數(shù)：453更新時間：2025-02-07 13:35:27
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- 網(wǎng)址：
- www.yeasen.com
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產(chǎn)品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 150T |
|---|---|---|---|
| 貨號 | 15049ES60 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè) |
產(chǎn)品介紹
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱
產(chǎn)品編號
規(guī)格
價格（元）
FastCut BglII快速限制性內(nèi)切酶
15049ES60
100 T
165.00
產(chǎn)品描述
FastCut BglII快速限制性內(nèi)切酶是通過基因工程重組技術(shù)，可在5~15 min內(nèi)精確完成DNA切割的快速限制性內(nèi)切酶，適用于快速切割質(zhì)粒DNA,、PCR產(chǎn)物、基因組DNA等,。FastCut™系列快速內(nèi)切酶共用一種酶切緩沖液,，從而簡化了酶切反應(yīng)體系，另外,，有良好的酶活冗余度,，可輕松處理底物過量或困難模板的酶切。
產(chǎn)品組分
運(yùn)輸與保存方法
冰袋運(yùn)輸,。-20°C保存,，有效期2年。
識別位置
5'-A↓GATCT-3'
3'-TCTAG↑A-5'
推薦反應(yīng)條件
1× FastCut™ 緩沖液,；
37°C孵育,。
失活條件
80°C孵育20 min。
注意事項(xiàng)
1）3 h孵育未表現(xiàn)星號活性,，延時酶切可能出現(xiàn)星號活性,；
2）受EcoBI甲基化影響,，序列可能重疊，剪切受阻,；
3）為了您的安全和健康,，請穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作；
4）本產(chǎn)品僅作科研用途,！
質(zhì)量控制
1. 功能活性檢測：最適反應(yīng)溫度下,，在20 μL反應(yīng)體系中，1 μL酶能夠在15 min內(nèi)*消化1 μg λDNA,。
2. 超長時間孵育檢測：最適反應(yīng)溫度下，將1 μL酶與1 μg λDNA共孵育3 h,，未檢測到其他核酸酶污染或星號活性引起的底物非特異性降解,，但延長孵育時間可能出現(xiàn)星號活性。
3. 酶切-連接-再酶切檢測：最適反應(yīng)溫度下,，使用1 μL酶消化底物,，回收酶切產(chǎn)物，在22°C下使用適量T4 DNA連接酶可以將酶切產(chǎn)物重新連接,，將連接產(chǎn)物再次回收后,，使用相同的內(nèi)切酶可以重新切開連接產(chǎn)物。
4. 非特異性內(nèi)切酶活性檢測：最適反應(yīng)溫度下,，將1 μL酶與1 μg超螺旋質(zhì)粒DNA共同孵育4 h后,，使用瓊脂糖凝膠電泳檢測，質(zhì)粒DNA仍然處于超螺旋狀態(tài),。
5. 藍(lán)白斑檢測：將含有單一lacZα基因的載體以1 μL酶消化,，重新連接后轉(zhuǎn)化入大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞，涂布在含有對應(yīng)抗生素,、IPTG和X-gal的LB培養(yǎng)基平板上,。連接正確的產(chǎn)物會生長出藍(lán)色菌落，而連接錯誤（即DNA末端切口不完整）的產(chǎn)物將得到白色菌落,。對于FastCut™系列限制酶而言,，白色菌落比例應(yīng)小于1%。
使用方法
1. DNA快速酶切流程
1）按如下建議的加樣順序配制體系反應(yīng)液（冰上操作）：
組分
質(zhì)粒DNA
PCR產(chǎn)物
基因組DNA
ddH2O
15 μL
16 μL
30 μL
10×FastCut™ Buffer或10×FastCut™ Color Buffer
2 μL
3 μL*
5 μL
底物DNA
2 μL（~1 μg）
10 μL (~0.2 μg)
10 μL (5 μg)
FastCut™ BglII
1 μL
1 μL
5 μL
Total
20 μL
30 μL
50 μL
*本體系指已純化后的PCR產(chǎn)物,。未純化的PCR產(chǎn)物具備一定的離子強(qiáng)度,，10×FastCut TM Buffer加入量可適當(dāng)減少至2 μL。若下一步進(jìn)行克隆等實(shí)驗(yàn),，酶切前需純化PCR產(chǎn)物,。
2）輕柔吸打或輕彈管壁以混勻（切勿渦旋），然后瞬時離心以收集掛壁液滴,。
3）37°C孵育15 min（質(zhì)粒）,，或15~30 min（PCR 產(chǎn)物）,，或30~60 min（基因組 DNA）。
4）80°C溫育 20 min 即可使酶失活,，停止反應(yīng)（可選）,。
2. 雙酶切或多酶切
1）每種內(nèi)切酶的用量為1 μL，并根據(jù)需要適當(dāng)擴(kuò)大反應(yīng)體系,。
2）所有內(nèi)切酶的體積總和不得超過總反應(yīng)體系的1/10,。
3）如果選用的幾種內(nèi)切酶的最適反應(yīng)溫度不同，應(yīng)先以最適溫度低的酶開始酶切,，再添加最適溫度較高的酶,，以較高的溫度進(jìn)行孵育。
3.質(zhì)粒的擴(kuò)大反應(yīng)體系
組分
體積（20 μL）
體積（20 μL）
體積（50 μL）
DNA
1 μg
2 μg
5 μg
FastCut™ BglII
1 μL
2 μL
5 μL
10×FastCut™ Buffer或10×FastCut™ Color Buffer
2 μL
2 μL
5 μL
Total
20 μL
20 μL
50 μL
【注】：如果總反應(yīng)體系大于20 μL,，可使用水浴,、金屬浴或沙浴，并增加孵育時間,。
不同DNA中的識別位點(diǎn)數(shù)
λDNA
ΦX174
pBR322
pUC57
pUC18/19
SV40
M13mp18/19
Adeno2
6
0
0
0
0
0
1
11
甲基化修飾影響
Dam
Dcm
CpG
EcoKI
EcoBI
無影響
無影響
無影響
無影響
序列可能重疊
剪切受阻
不同反應(yīng)緩沖液中的活性
反應(yīng)緩沖液
FastCut™
Buffer
Thermo Scientific
FastDigest Buffer
NEB
CutSmart® Buffer
Takara
QuickCut™ Buffer
活性
100%
100%
100%
50%
【注】：活性數(shù)據(jù)來自翌圣生物限制酶標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)體系下的檢測,。
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