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臺(tái)盼藍(lán)染色液 Typan Blue Solution

臺(tái)盼藍(lán)（Trypan Blue）,，一種偶氮、親水性酸性藍(lán)色染料,，可透過(guò)死亡細(xì)胞和垂死細(xì)胞的細(xì)胞膜,，將其染成藍(lán)色，而活細(xì)胞由于其細(xì)胞膜的完整性,，可將臺(tái)盼藍(lán)排斥在外，因此,，通過(guò)顏色的變化即可將活細(xì)胞（活細(xì)胞呈透明無(wú)色）和死細(xì)胞鑒別開(kāi)來(lái),，基于此原理，本品廣泛用于細(xì)胞活性水平的常規(guī)評(píng)估,。臺(tái)盼藍(lán)還可染色膠原和淀粉樣蛋白,。臺(tái)盼藍(lán)與蛋白結(jié)合形成的復(fù)合物可發(fā)出紅色熒光。另外,，臺(tái)盼藍(lán)（合適濃度）還常用來(lái)淬滅細(xì)胞表面的自熒光或者其他熒光信號(hào),。

本品為溶于生理鹽溶液的0.4%（w/v）臺(tái)盼藍(lán)染色液，以無(wú)菌形式提供,，細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)別,。

運(yùn)輸和保存方法

室溫運(yùn)輸和保存即可，二年有效,。

注意事項(xiàng)

1）細(xì)胞計(jì)數(shù)前,，需要用生理鹽緩沖液或者無(wú)血清培養(yǎng)基對(duì)細(xì)胞進(jìn)行充分的清洗，因?yàn)榧?xì)胞對(duì)血清蛋白具有非常高的親和力,，殘留的血清蛋白會(huì)導(dǎo)致較暗的染色背景,。

2）為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作,。

使用方法

1）對(duì)于懸浮細(xì)胞,，離心收集細(xì)胞，充分清洗后,，用適當(dāng)緩沖液如PBS,，HBSS重懸制成單細(xì)胞懸液；對(duì)于貼壁細(xì)胞,，先用胰|酶消化細(xì)胞,，再按照懸浮細(xì)胞的方法制備單細(xì)胞懸液,。

2）取0.5ml單細(xì)胞懸液，按照1:1比例與0.5ml 0.4%臺(tái)盼藍(lán)染色液充分混勻,，室溫染色3~10min,。

【注1】：因臺(tái)盼藍(lán)具有細(xì)胞毒性，染色時(shí)間過(guò)久會(huì)導(dǎo)致部分死細(xì)胞染色,，干擾計(jì)數(shù),。

【注2】：若細(xì)胞密度比較高，可取0.2ml單細(xì)胞懸液,，經(jīng)適當(dāng)緩沖液稀釋到0.5ml,，之后再用0.5ml 0.4%臺(tái)盼藍(lán)染色液染色。

3）取少量上述染色細(xì)胞加入血細(xì)胞|計(jì)數(shù)板,，于顯微鏡低倍鏡下計(jì)數(shù),，分別計(jì)算著色細(xì)胞（即損傷細(xì)胞和死細(xì)胞）和總細(xì)胞。

【注1】：用移液槍加染色細(xì)胞時(shí),，沿著蓋玻片的邊緣輕輕加液使其*覆蓋住整個(gè)小室,。不可過(guò)量加液或者不足量。

【注2】：1mm2方格內(nèi)細(xì)胞數(shù)通?？刂圃?0-50 cells,，當(dāng)細(xì)胞數(shù)超過(guò)200個(gè)，需重新調(diào)整稀釋倍數(shù),。

4）按照以下公式來(lái)計(jì)算細(xì)胞數(shù)目和活細(xì)胞百分比,，

a，計(jì)算每ml細(xì)胞數(shù)目：Cells/ml=1mm2大方格內(nèi)的平均細(xì)胞數(shù)×稀釋倍數(shù)×104,；【注】：此時(shí)的稀釋倍數(shù)為：步驟2所取的單細(xì)胞懸液與臺(tái)盼藍(lán)染色液混合后的稀釋倍數(shù)

b,，總細(xì)胞數(shù)目：Total cells=（Cells/ml）×zui初制備單細(xì)胞懸液的總體積

c，細(xì)胞活力值：Viability（%）=（總細(xì)胞數(shù)-總著色細(xì)胞數(shù)）/總細(xì)胞數(shù) ×100

【注】：通常情況,，健康的對(duì)數(shù)期培養(yǎng)細(xì)胞,，活細(xì)胞至少占到95%。

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