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- 47503ES03 產(chǎn)品型號
- Yeasen/翌圣生物 品牌
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- 上海市 所在地
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Streptavidin (SAV) MagBeads 鏈霉親和素(SAV)免疫磁珠
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號 | 規(guī)格 | 儲存 | 價格(元) |
Streptavidin (SAV) MagBeads 鏈霉親和素(SAV)免疫磁珠 | 47503ES03 | 1ml | 4℃ | 618.00 |
產(chǎn)品描述
鏈親和素(streptavidin)是一種來源于阿維丁鏈霉菌由四個相同亞基組成的結(jié)合蛋白質(zhì),每個亞基均有一個與有高親和力的結(jié)合位點,。生物學上常將鏈霉親和素包被在磁珠上,,借鏈霉親和素-高親和力結(jié)合特性,結(jié)合素化蛋白,,多肽,,及非蛋白質(zhì)(如各種 DNA、RNA 分子)等分子,,進而從混合體系中快速分離化成分,,進行如親和純化,細胞分離,,DNA 探針分析和 mRNA 分離等多方面應用,。
本品streptavidin 磁珠可配合實驗需要選擇標記的各種單抗去分離細胞,,應用范圍廣泛,使用靈活,。其原理是在實驗系統(tǒng)中加入標記的單抗,,磁珠通過 streptavidin 與標記的單抗結(jié)合后,單抗與細胞表面相應抗原特異性結(jié)合而使細胞被磁珠間接捕獲,,從而達到純化分離細胞的目的,。
產(chǎn)品性質(zhì)
磁珠含量(Beads Content) | 4mg/ml |
磁珠粒徑(Bead Size) | 1.0±5%μm |
結(jié)合能力(Binding Capacity) | 1300pmol biotin/mg 微珠 |
運輸和保存方法
冰袋運輸。4℃保存,。
注意事項
1)免疫磁珠易沉降聚集,,因此產(chǎn)品使用前要劇烈振蕩或超聲處理。
2)Fc 受體(FcR)封閉:在某些實驗中,,部分抗體會通過其Fc段與不同細胞表面的FcR 結(jié)合,,出現(xiàn)非特異性反應。此時可預先將細胞與IgG 或針對FcR的特異性抗體室溫孵育5-10min,,一般107細胞中可加入1-10μg IgG或FcR 的特異性抗體進行封閉,。
3)如果分選的細胞進一步用作細胞培養(yǎng)實驗,所有步驟都需在無菌環(huán)境及條件下進行,。
4)為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作,。
使用方法(細胞分選操作流程)
由于不同抗體的親和力,,欲分離細胞在混合體系中所占比例以及細胞表面靶抗原密度的差異,操作流程中所提供的相關(guān)參數(shù)不一定適用于所有的細胞分選實驗,。因此實驗前應對 化抗體使用濃度,,磁珠與細胞反應比例,及反應時間進行滴定,,優(yōu)化以達到*的細胞分選效果,。
1. 分離單細胞:使用淋巴細胞分離液從抗凝血中提取外周血單個核細胞(PBMC),或者從淋巴組織中制備單細胞懸液,。PBMC用含5%BSA,,0.09%NaN3的PBS,pH7.4 洗3次,,40-70μm尼龍網(wǎng)過濾去除細胞團塊和碎片后調(diào)整細胞數(shù)為2-3×107/ml,。
【注】:反應體系中加入5-10%蛋白可降低非特異性反應,但蛋白濃度太高會降低分選效率,。
2. 向PBMC 中加入適量化抗體,,一般1×107 PBMC 中加入0.5-10μg 抗體,室溫反應30min,。
3. 1000rpm離心5min,,棄上清中未結(jié)合的化抗體。加入1ml磁珠分選緩沖液重懸細胞,1000rpm 離心5min,,棄上清,,洗2次。
4. 1ml磁珠分選緩沖液重懸細胞,,將細胞與50μl 免疫磁珠混合,,室溫反應30min,間隔10min輕輕晃動反應管,,避免磁珠沉淀,,使磁珠與細胞充分反應,盡量防止出現(xiàn)氣泡,。之后進入后續(xù)細胞分選,。
5. 細胞分選 (Negative Selection)
5.1 陰性分選
① 磁分器分離5-8min,收集未被免疫磁珠結(jié)合的細胞懸液至另一干凈管中,。
② 加入1ml磁珠分選緩沖液重懸磁珠,,用玻璃滴管或移液槍槍頭反復吹打磁珠。
③ 重復步驟①,,合并兩次收集的細胞懸液,,可將細胞懸液再置磁分離器分離 5-8min,可明顯增加靶細胞純度,。
5.2 陽性分選 (Positive Selection)
① 磁分離器分離5-8min,,去除未與磁珠結(jié)合的細胞。
② 結(jié)合了靶細胞的免疫磁珠用1ml 磁珠分選緩沖液洗5次(5×1ml)后,,可直接進行流式檢測,,或者37℃培養(yǎng)48h可使細胞與磁珠分離。
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