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Protein A 4FF Chromatography Column, 5ML

蛋白A純化預(yù)裝柱,，5ML

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品描述

天然蛋白A（Protein A）是一種發(fā)現(xiàn)于金黃色葡萄球菌的細(xì)胞壁表面蛋白,，與分離自G型或C型鏈球菌屬的蛋白G類(lèi)似,，主要通過(guò)與免疫球蛋白（Ig）的Fc區(qū)相互作用，結(jié)合大多數(shù)哺乳動(dòng)物的IgG,，可用于多種抗體（單抗和多抗）的分離純化,。在與不用的免疫球蛋白亞類(lèi)的結(jié)合特性上,，Protein A 和Protein G結(jié)合性能不太一樣（詳見(jiàn)附錄1）。

本品使用的是基因改造后的蛋白A,，不僅維持其本身的Ig親和特性,，同時(shí)也去除了天然蛋白本身的非主要結(jié)合域以降低非特異性結(jié)合，Protein A Agarose Resin 4FF以高度交聯(lián)的瓊脂糖凝膠為基質(zhì),，重組Protein A為配基,，具有很高的物理化學(xué)穩(wěn)定性，可以在相對(duì)較高的流速下進(jìn)行抗體的純化,，適用于工業(yè)客戶,。利用本品經(jīng)過(guò)一步親和層析，即可從腹水,、血清和培養(yǎng)液等樣品中得到高純度的抗體,，使用方便，應(yīng)用廣泛,。

本品Protein A 4FF Chromatography Column, 5mL是一種裝填了Protein A Agarose Resin 4FF的中壓預(yù)裝柱,，規(guī)格5ml，預(yù)裝柱具有標(biāo)準(zhǔn)接口,，可以適配商品化的各類(lèi)中壓色譜系統(tǒng),，如ÄKTA 等，方便客戶操作,。

產(chǎn)品性質(zhì)

運(yùn)輸與保存方法

冰袋運(yùn)輸。4℃保存,，2年有效,。

需準(zhǔn)備試劑

【注】：建議以下緩沖液在使用前用0.22 μm或0.45 μm濾膜過(guò)濾。

結(jié)合/洗雜緩沖液：0.15 M NaCl,，20 mM Na₂HPO₄,，pH 7.0

洗脫緩沖液：0.1 M甘氨酸，pH 3.0

中和液：1 M Tris-HCl,，pH 8.5

使用方法

【注】：上柱之前要確保樣品溶液有合適的離子強(qiáng)度和pH值,，可以用結(jié)合/洗滌緩沖液對(duì)血清樣品、腹水或細(xì)胞培養(yǎng)液稀釋?zhuān)蛘邩悠酚媒Y(jié)合/洗滌緩沖液透析,。

1樣品純化（以AKTA系統(tǒng)為例）

1）準(zhǔn)備：將泵管道中注滿去離子水,。去掉上塞子，將層析柱連接至色譜系統(tǒng)中,。再折斷下口,，將預(yù)裝柱接到色譜系統(tǒng)中，并旋緊,。

2）清洗：3-5倍柱體積去離子水沖洗層析柱中儲(chǔ)存液,。

3）平衡：用5倍柱體積的結(jié)合Buffer平衡層析柱，使填料處于與目的蛋白相同的緩沖體系下,，起到保護(hù)蛋白的作用,。

4）上樣：將樣品加到平衡好的層析柱中，推薦流速1-5 mL/min,，保證目的蛋白與樹(shù)脂充分接觸,，提高目的蛋白的回收率，收集流出液,，待檢測(cè),。

【注】：樣品的粘度增加使得即使上樣體積很少，也會(huì)導(dǎo)致層析柱很大的反壓,。上樣量不要超過(guò)柱子的結(jié)合能力,。大量的樣品體積也可能造成很大的反壓，使得進(jìn)樣器更難使用,。

5）洗雜：用10-15倍柱體積的洗雜Buffer進(jìn)行清洗,，直到紫外吸收達(dá)到一個(gè)穩(wěn)定的基線，去除非特異性吸附的雜蛋白,，收集洗雜液,。

6）洗脫：用洗脫Buffer 采用一步法或線性梯度洗脫。一步洗脫中,，通常5倍柱體積洗脫液足夠?qū)⒛康牡鞍紫疵撓聛?lái),。也可以用一個(gè)小的梯度，例如20倍柱體積或更多,，來(lái)分離不同結(jié)合強(qiáng)度的蛋白質(zhì),。

7）清洗及保存：依次使用3倍柱體積的結(jié)合Buffer和5倍柱體積的去離子水平衡填料，后再用5倍柱體積的20%的乙醇平衡,，然后保存在等體積的20%的乙醇中,，置于4度保存，防止填料被細(xì)菌污染,。

2 SDS-PAGE檢測(cè)

將純化過(guò)程中得到的樣品（包括原始樣品,、流出組分、洗雜及洗脫組分等）利用SDS-PAGE進(jìn)行檢測(cè),，判定其純化效果,。

3 樹(shù)脂清洗

隨著一些變性物質(zhì)的沉淀和蛋白的聚集，往往造成流速和結(jié)合載量下降,，影響柱子的性能,，這時(shí)需對(duì)柱子進(jìn)行清洗：

1）去除沉淀或變性物質(zhì)

① 用2倍柱體積的6 M 鹽酸胍溶液進(jìn)行清洗；

② 用5倍柱體積的PBS,，pH 7.4 清洗,。

2）去除由于疏水性吸附造成的非特異吸附物質(zhì)

① 用3-4倍柱體積的70%乙醇或2倍柱體積的1% Triton™ X-100清洗,；

② 用5倍柱體積的PBS，pH 7.4 清洗,。

注意事項(xiàng)

1）請(qǐng)勿冷凍保存本產(chǎn)品,。

2）所有操作過(guò)程中，樣本需要在4℃或冰上操作,。

3）為了您的安全和健康,，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

附錄1. 蛋白A,，G對(duì)不同物種Ig的結(jié)合能力總表

附錄2 常見(jiàn)問(wèn)題與解答

HB190813