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36410ES08蛋白A純化預(yù)裝柱,,5ML
參考價(jià): 面議
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
  • 36410ES08 產(chǎn)品型號(hào)
  • Yeasen/翌圣生物 品牌
  • 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
  • 上海市 所在地

訪問(wèn)次數(shù):770更新時(shí)間:2022-02-10 14:17:04

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 5 mL
貨號(hào) 36410ES08 應(yīng)用領(lǐng)域 生物產(chǎn)業(yè)
本品Protein A 4FF Chromatography Column, 5mL是一種裝填了Protein A Agarose Resin 4FF的中壓預(yù)裝柱,規(guī)格5ml,預(yù)裝柱具有標(biāo)準(zhǔn)接口,,可以適配商品化的各類(lèi)中壓色譜系統(tǒng),,如ÄKTA 等,,方便客戶操作。
產(chǎn)品介紹

Protein A 4FF Chromatography Column, 5ML

蛋白A純化預(yù)裝柱,,5ML

 

產(chǎn)品信息

 

產(chǎn)品名稱

產(chǎn)品編號(hào)

規(guī)格

儲(chǔ)存

價(jià)格(元)

Protein A 4FF Chromatography Column, 5ML 蛋白A純化預(yù)裝柱,,5ML

36410ES08

5 mL

4℃

1848.00

Protein A 4FF Chromatography Column, 5ML 蛋白A純化預(yù)裝柱,5ML

36410ES25

5 mL×5

4℃

6838.00

 

產(chǎn)品描述

 

天然蛋白A(Protein A)是一種發(fā)現(xiàn)于金黃色葡萄球菌的細(xì)胞壁表面蛋白,,與分離自G型或C型鏈球菌屬的蛋白G類(lèi)似,,主要通過(guò)與免疫球蛋白(Ig)的Fc區(qū)相互作用,結(jié)合大多數(shù)哺乳動(dòng)物的IgG,,可用于多種抗體(單抗和多抗)的分離純化,。在與不用的免疫球蛋白亞類(lèi)的結(jié)合特性上,,Protein A 和Protein G結(jié)合性能不太一樣(詳見(jiàn)附錄1)。

本品使用的是基因改造后的蛋白A,,不僅維持其本身的Ig親和特性,,同時(shí)也去除了天然蛋白本身的非主要結(jié)合域以降低非特異性結(jié)合,Protein A Agarose Resin 4FF以高度交聯(lián)的瓊脂糖凝膠為基質(zhì),,重組Protein A為配基,,具有很高的物理化學(xué)穩(wěn)定性,可以在相對(duì)較高的流速下進(jìn)行抗體的純化,,適用于工業(yè)客戶,。利用本品經(jīng)過(guò)一步親和層析,即可從腹水,、血清和培養(yǎng)液等樣品中得到高純度的抗體,,使用方便,應(yīng)用廣泛,。

本品Protein A 4FF Chromatography Column, 5mL是一種裝填了Protein A Agarose Resin 4FF的中壓預(yù)裝柱,,規(guī)格5ml,預(yù)裝柱具有標(biāo)準(zhǔn)接口,,可以適配商品化的各類(lèi)中壓色譜系統(tǒng),,如ÄKTA 等,方便客戶操作,。

 

產(chǎn)品性質(zhì)

 

基質(zhì)(Matrix)

高度交聯(lián)的4%瓊脂糖微球

配體(Ligand)

重組蛋白A

孔徑(Bead size)

45-165 µm

大流速(Flowmax

0.3 MPa,,3 bar

儲(chǔ)存緩沖液(Buffer)

含20%乙醇的1×PBS

載量(Capacity)

>40 mg human IgG/mL基質(zhì)

pH范圍(pH range)

3-12

 

運(yùn)輸與保存方法

 

冰袋運(yùn)輸。4℃保存,,2年有效,。

 

需準(zhǔn)備試劑

 

【注】:建議以下緩沖液在使用前用0.22 μm或0.45 μm濾膜過(guò)濾。

結(jié)合/洗雜緩沖液:0.15 M NaCl,,20 mM Na2HPO4,,pH 7.0

洗脫緩沖液:0.1 M甘氨酸,pH 3.0

中和液:1 M Tris-HCl,,pH 8.5

 

使用方法

 

【注】:上柱之前要確保樣品溶液有合適的離子強(qiáng)度和pH值,,可以用結(jié)合/洗滌緩沖液對(duì)血清樣品、腹水或細(xì)胞培養(yǎng)液稀釋?zhuān)蛘邩悠酚媒Y(jié)合/洗滌緩沖液透析,。

1樣品純化(以AKTA系統(tǒng)為例)

1)準(zhǔn)備:將泵管道中注滿去離子水,。去掉上塞子,將層析柱連接至色譜系統(tǒng)中,。再折斷下口,,將預(yù)裝柱接到色譜系統(tǒng)中,并旋緊,。

2)清洗:3-5倍柱體積去離子水沖洗層析柱中儲(chǔ)存液,。

3)平衡:用5倍柱體積的結(jié)合Buffer平衡層析柱,使填料處于與目的蛋白相同的緩沖體系下,,起到保護(hù)蛋白的作用,。

4)上樣:將樣品加到平衡好的層析柱中,推薦流速1-5 mL/min,,保證目的蛋白與樹(shù)脂充分接觸,,提高目的蛋白的回收率,收集流出液,,待檢測(cè),。

【注】:樣品的粘度增加使得即使上樣體積很少,也會(huì)導(dǎo)致層析柱很大的反壓,。上樣量不要超過(guò)柱子的結(jié)合能力,。大量的樣品體積也可能造成很大的反壓,使得進(jìn)樣器更難使用,。

5)洗雜:用10-15倍柱體積的洗雜Buffer進(jìn)行清洗,,直到紫外吸收達(dá)到一個(gè)穩(wěn)定的基線,去除非特異性吸附的雜蛋白,,收集洗雜液,。

6)洗脫:用洗脫Buffer 采用一步法或線性梯度洗脫。一步洗脫中,,通常5倍柱體積洗脫液足夠?qū)⒛康牡鞍紫疵撓聛?lái),。也可以用一個(gè)小的梯度,例如20倍柱體積或更多,,來(lái)分離不同結(jié)合強(qiáng)度的蛋白質(zhì),。

7)清洗及保存:依次使用3倍柱體積的結(jié)合Buffer和5倍柱體積的去離子水平衡填料,后再用5倍柱體積的20%的乙醇平衡,,然后保存在等體積的20%的乙醇中,,置于4度保存,防止填料被細(xì)菌污染,。

2 SDS-PAGE檢測(cè)

將純化過(guò)程中得到的樣品(包括原始樣品,、流出組分、洗雜及洗脫組分等)利用SDS-PAGE進(jìn)行檢測(cè),,判定其純化效果,。

3 樹(shù)脂清洗

隨著一些變性物質(zhì)的沉淀和蛋白的聚集,往往造成流速和結(jié)合載量下降,,影響柱子的性能,,這時(shí)需對(duì)柱子進(jìn)行清洗:

1)去除沉淀或變性物質(zhì)

 用2倍柱體積的6 M 鹽酸胍溶液進(jìn)行清洗;

 用5倍柱體積的PBS,,pH 7.4 清洗,。

2)去除由于疏水性吸附造成的非特異吸附物質(zhì)

 用3-4倍柱體積的70%乙醇或2倍柱體積的1% Triton™ X-100清洗,;

 用5倍柱體積的PBSpH 7.4 清洗,。

 

注意事項(xiàng)

 

1)請(qǐng)勿冷凍保存本產(chǎn)品,。

2)所有操作過(guò)程中,樣本需要在4℃或冰上操作,。

3)為了您的安全和健康,,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

 

附錄1. 蛋白A,,G對(duì)不同物種Ig的結(jié)合能力總表

免疫球蛋白亞型

Protein A

Protein G  

免疫球蛋白亞型

Protein A

Protein G  

Human IgG

++++

++++

Mouse IgG

++++

++++

Human IgG1

++++

++++

Mouse IgG1

+

++++

Human IgG2

++++

++++

Mouse IgG2a

++++

++++

Human IgG3

+

++++

Mouse IgG2b

+++

+++

Human IgG4

++++

++++

Mouse IgG3

++

+++

Human IgM

Use anti-Human IgM

Mouse IgM

Use anti-Mouse IgM

Human IgE

NR

NR

Chicken IgG (IgY)

NR

NR

Human IgA

+

NR

Cow IgG

++

++++

Human IgA1

+

NR

Goat IgG

+

++++

Human IgA2

+

NR

Goat IgG1

+

++++

Human IgD

Use anti-Human IgD

Goat IgG2

++++

++++

Rat IgG

+

++

Goat IgM

NR

NR

Rat IgG1

NR

+

Guinea Pig IgG

++++

++

Rat IgG2a

NR

++++

Guinea Pig IgG1

++++

++

Rat IgG2b

NR

+

Guinea Pig IgG2

++++

++

Rat IgG3

+

++

Hamster IgG

+

++

Sheep IgG

+

++

Horse IgG

+

++++

Sheep IgG1

+

++

Rabbit IgG

++++

+++

Sheep IgG2

+

++

Rabbit IgM

NR

NR

Sheep IgM

NR

NR

Rabbit All isotypes

+++

++

Pig IgG

+++

+++

Monkey IgG

++++

++++

Cat IgG

++++

+

Donkey IgG

++

++++

Dog IgG

++++

+

 

 

 

+= weak binding,;(++= moderate binding;(++++= strong binding,;NR= not recommended; (-)= not tested,;

 

附錄2 常見(jiàn)問(wèn)題與解答

問(wèn)題

可能原因

推薦解決方法

柱子反壓過(guò)高

填料被堵塞

清洗填料

裂解液中含有微笑的固體顆粒,建議上柱前使用0.22 µm/0.45 µm濾膜過(guò)濾,。

樣品純化過(guò)程中曲線不穩(wěn)

樣品或buffer中有氣泡

趕出氣泡

樣品和buffer進(jìn)行脫氣

洗脫組分中沒(méi)有目的蛋白

樣品中抗體濃度太低

使用其抗原做配體的介質(zhì)

抗體被降解

適當(dāng)?shù)奶岣呦疵損H

樣品與Protein A結(jié)合力低

換用Protein G或Protein A/G樹(shù)脂純化

回收率逐漸減低

上樣量太多

減少上樣量

柱子太臟,,載量降低

清洗樹(shù)脂

 

HB190813



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