聯(lián)系電話(huà)
翌圣生物科技（上海）股份有限公司
初級(jí)會(huì)員·13年您現(xiàn)在的位置： 翌圣生物科技（上海）股份有限公司>>化學(xué)試劑>> 20510ES08GSTSep Glutathione 4FF Chromatography Column, 5ML
20510ES08GSTSep Glutathione 4FF Chromatography Column, 5ML
| 參考價(jià): | 面議 |
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)- 20510ES08 產(chǎn)品型號(hào)
- Yeasen/翌圣生物 品牌
- 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
- 上海市 所在地
訪(fǎng)問(wèn)次數(shù)：386更新時(shí)間：2022-02-10 11:56:15
聯(lián)系我們時(shí)請(qǐng)說(shuō)明是化工儀器網(wǎng)上看到的信息,，謝謝!
- 聯(lián)系人：
- 曹女士
- 電話(huà)：
- 400-6111-883
- 手機(jī)：
- 售后：
- 4006-111-883
- 傳真：
- 86-21-34615995
- 地址：
- 上海市浦東新區(qū)天雄路166弄1號(hào)3樓
- 網(wǎng)址：
- www.yeasen.com
掃一掃訪(fǎng)問(wèn)手機(jī)商鋪
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
產(chǎn)品介紹
GSTSep Glutathione 4FF Chromatography Column, 5ML
GST標(biāo)簽蛋白純化預(yù)裝柱,，5ML
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱(chēng) | 產(chǎn)品編號(hào) | 規(guī)格 | 儲(chǔ)存 | 價(jià)格（元） |
GSTSep Glutathione 4FF Chromatography Column, 5ML GST標(biāo)簽蛋白純化預(yù)裝柱,，5ML | 20510ES08 | 5ml | 4℃ | 938.00 |
20510ES25 | 5×5ml | 4℃ | 3928.00 |
產(chǎn)品描述
GSTSep Glutathione Agarose Resin 4FF是一種GST標(biāo)簽蛋白純化樹(shù)脂，可以一步純化各種表達(dá)系統(tǒng)中谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶,、谷胱甘肽依賴(lài)性蛋白和谷胱甘肽重組衍生物,。在結(jié)構(gòu)上，該樹(shù)脂是以高度交聯(lián)的4%瓊脂糖凝膠為基質(zhì),，通過(guò)12個(gè)原子的間隔臂,，用化學(xué)方法共價(jià)結(jié)合還原型谷胱甘肽制作而成，具有更高的物理化學(xué)特性,，可以耐受更高的壓力,，在相對(duì)較高的流速下，實(shí)現(xiàn)對(duì)目的蛋白的純化,，更適于工業(yè)大規(guī)模蛋白的純化,。
是裝填了GSTSep Glutathione Agarose Resin 4FF的一種中壓預(yù)裝柱，規(guī)格5ml,，預(yù)裝柱具有標(biāo)準(zhǔn)接口,，可以適配商品化的各類(lèi)中壓色譜系統(tǒng),，如?KTA 等，方便客戶(hù)操作,。
產(chǎn)品性質(zhì)
基質(zhì)（Matrix） | 高度交聯(lián)的4%瓊脂糖微球 |
配體（Ligand） | 通過(guò)12原子間隔臂偶聯(lián)的谷胱甘肽 |
孔徑（Bead size） | 45-165μm |
載量（Capacity） | ＞10mg GST protein/ml 基質(zhì)（40kDa） |
zui大壓力（PressureMax） | 0.3 MPa, 3bar |
pH穩(wěn)定范圍（pH range） | 3-12 |
儲(chǔ)存緩沖液（Buffer） | 20%乙醇 |
運(yùn)輸和保存方法
冰袋運(yùn)輸,。4℃保存，有效期2年,。
需準(zhǔn)備試劑
所用水和Buffer在使用前用0.22μm或0.45μm濾膜過(guò)濾除菌,。
結(jié)合/洗雜緩沖液：PBS，pH7.4(140mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10mM Na2HPO4, 1.8mM KH2PO4, pH7.4)
洗脫緩沖液：50mM Tris-HCl, 10mM 還原型谷胱甘肽,，pH 8.0
【注】：結(jié)合/洗雜緩沖液或者洗脫緩沖液中可加入1-10mM DTT,。
使用方法
【注】樣品在上樣前用0.22μm或0.45μm濾膜過(guò)濾，減少雜質(zhì)以防阻塞柱子,。
1樣品純化（以Akta為例）
1）準(zhǔn)備：將泵管道中注滿(mǎn)去離子水,。去掉上塞子，將層析柱連接至色譜系統(tǒng)中,。再折斷下口,，將預(yù)裝柱接到色譜系統(tǒng)中，并旋緊,。
2）清洗：3-5倍柱體積去離子水沖洗層析柱中儲(chǔ)存液,。
3）平衡：用5倍柱體積的結(jié)合Buffer平衡層析柱，使填料處于與目的蛋白相同的緩沖體系下,，起到保護(hù)蛋白的作用,。
4）上樣：將樣品加到平衡好的層析柱中，推薦流速1-5ml/min,，保證目的蛋白與樹(shù)脂充分接觸,，提高目的蛋白的回收率，收集流出液,，待檢測(cè),。
【注】：樣品的粘度增加使得即使上樣體積很少，也會(huì)導(dǎo)致層析柱很大的反壓,。上樣量不要超過(guò)柱子的結(jié)合能力,。大量的樣品體積也可能造成很大的反壓，使得進(jìn)樣器更難使用,。
5）洗雜：用10-15倍柱體積的洗雜Buffer進(jìn)行清洗,，直到紫外吸收達(dá)到一個(gè)穩(wěn)定的基線(xiàn)，去除非特異性吸附的雜蛋白,，收集洗雜液,，待檢測(cè)。
6）洗脫：用洗脫Buffer 采用一步法或線(xiàn)性梯度洗脫,。一步洗脫中,，通常5倍柱體積洗脫液足夠?qū)⒛康牡鞍紫疵撓聛?lái),。也可以用一個(gè)小的梯度，例如20倍柱體積或更多,，來(lái)分離不同結(jié)合強(qiáng)度的蛋白質(zhì),。
7）清洗及保存：依次使用3倍柱體積的結(jié)合Buffer和5倍柱體積的去離子水平衡填料，zui后再用5倍柱體積的20%的乙醇平衡,，然后保存在等體積的20%的乙醇中,，置于4度保存，防止填料被細(xì)菌污染,。
2 SDS-PAGE檢測(cè)
將純化過(guò)程中得到的樣品（包括原始樣品,、流出組分、洗雜及洗脫組分等）利用SDS-PAGE進(jìn)行檢測(cè),，判定其純化效果,。
3 填料清洗
GST標(biāo)簽蛋白純化產(chǎn)品可以重復(fù)使用而無(wú)需再生，但隨著非特異結(jié)合蛋白的增多和蛋白的聚集,，會(huì)造成流速和結(jié)合載量性能下降,，此時(shí)需對(duì)填料進(jìn)行清洗。
1）去除一些沉淀或變形物質(zhì)
用2倍柱體積的6M 鹽酸胍溶液進(jìn)行清洗,，然后立即用5倍柱體積的PBS,，pH7.4清洗。
2）去除一些疏水性吸附造成的非特異性吸附物質(zhì)
用3-4倍柱體積的70%乙醇或2倍柱體積1% Triton X-100清洗,，然后立即用5倍柱體積的PBS，pH7.4清洗,。
注意事項(xiàng)
1）請(qǐng)勿冷凍保存本產(chǎn)品,。
2）所有操作過(guò)程中，樣本需要在4℃或冰上操作,。
3）為了您的安全和健康,，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
附表 問(wèn)題及解決方案
問(wèn)題 | 可能原因 | 推薦解決方案 |
柱子反壓過(guò)高 | 填料被堵塞 | 清洗樹(shù)脂,。 |
裂解液中含有微小的固體顆粒,，建議上樣前用0.22μm或0.45μm濾膜過(guò)濾，或離心去除,。 | ||
樣品太黏稠 | 樣品中含高濃度的核酸,，延長(zhǎng)破碎時(shí)間直至粘度降低，或添加DNaseI （終濃度為5μg/ml）,，Mg2+(終濃度1mM),，冰上孵育10-15min | |
緩沖液太黏稠 | 有機(jī)試劑或蛋白穩(wěn)定試劑（如甘油等）可能會(huì)引起反壓增高，降低操作流速,。 | |
洗脫組分中無(wú)目的蛋白 | GST標(biāo)簽蛋白變性了 | 使用溫和的裂解條件,，實(shí)驗(yàn)條件以經(jīng)驗(yàn)為準(zhǔn),。 |
過(guò)度的裂解使目的蛋白變性 | ||
目的蛋白聚集產(chǎn)生沉淀 | 在細(xì)胞裂解前溶液中加入DTT，終濃度為1-10mM | |
融合蛋白改變了GST的構(gòu)象,，影響了目的蛋白的結(jié)合力 | 測(cè)定pGEX中GST的結(jié)合力,，對(duì)載體進(jìn)行超聲處理，檢測(cè)其結(jié)合力,。如果載體中GST有很高的親和力,，有可能是改變?nèi)诤系鞍椎臉?gòu)象從而降低了GST標(biāo)簽蛋白的親和力。 | |
降低結(jié)合溫度至4℃,，充分清洗,。 | ||
柱子平衡時(shí)間太短，目的蛋白不是在pH6.5-pH8.0范圍內(nèi)結(jié)合 | 用pH6.5-pH8.0的buffer進(jìn)行充分的平衡,，如PBS. | |
目的蛋白沒(méi)有*洗脫下來(lái) | 洗脫體積太少 | 增加洗脫液體積,，減小洗脫流速。 |
洗脫液中谷胱甘肽濃度太低 | 增加洗脫液中谷胱甘肽濃度,，可嘗試用50mM Tris-HCl, 20-40mM還原型谷胱甘肽pH8.0洗脫 | |
低pH影響洗脫 | 在不增加洗脫液中谷胱甘肽量時(shí),，提高洗脫液中pH至pH8-9會(huì)有改善 | |
增加洗脫液中離子強(qiáng)度，如0.1-0.2M NaCl | ||
洗脫液中谷胱甘肽被氧化 | 使用新鮮配制的洗脫液 | |
加入DTT | ||
非特異性疏水作用影響目的蛋白的溶解和洗脫 | 洗脫液中加入非離子型洗滌劑,，如0.1%的Triton X-100或者2%正辛基-β-D-吡喃葡糖苷Tween-20 | |
電泳或western blot檢測(cè)中發(fā)現(xiàn)多條帶 | Mr 70000蛋白與目的蛋白一起純化下來(lái) | Mr 70000蛋白可能是大腸桿菌基因DnaK的產(chǎn)物,，可以在目的蛋白中加入50mM Tris-HCl, 2mM ATP, 10mM MgSO4, pH 7.4在37℃加熱10min去除。 |
可通過(guò)ATP-瓊脂糖膠或離子交換來(lái)去除目的蛋白溶液中的dnaK蛋白 | ||
GST融合蛋白已經(jīng)發(fā)生降解 | 在裂解液中加入蛋白酶抑制劑,，如加入1 mM PMSF | |
可能是蛋白酶對(duì)目的蛋白部分降解造成的,，可使用蛋白酶缺陷型宿主菌（如lon-或ompT） | ||
細(xì)胞破碎過(guò)度 | 減少細(xì)胞破碎時(shí)間，超聲前加入溶菌酶（菌液體積的0.1倍10mg/ml溶菌酶,，25mM Tris-HCl,，pH8.0），避免發(fā)泡導(dǎo)致蛋白酶變性,，過(guò)度超聲破碎增加宿主內(nèi)源蛋白與GST融合目的蛋白的共純化,。 | |
共價(jià)共純化 | 包括促進(jìn)蛋白正確折疊的分子伴侶的共純化，如：DnaK(Mr～70000), DnaJ(Mr～37000), GrpE(Mr ～40000), GroEL(Mr～57000), GroES(Mr ～10000) | |
抗體與E. coli的各種蛋 白反應(yīng) | 抗體吸附E. coli蛋白：GST-抗體,；超聲處理去除GST抗體,，可以用Western Blot檢測(cè) |
相關(guān)產(chǎn)品
產(chǎn)品編號(hào) | 產(chǎn)品名稱(chēng) | 規(guī)格 | 價(jià)格 |
20507ES10 | GSTSep Glutathione Agarose Resin 谷胱甘肽瓊脂糖樹(shù)脂（用于GST標(biāo)簽蛋白純化） | 10ml | 928.00 |
20507ES50 | GSTSep Glutathione Agarose Resin 谷胱甘肽瓊脂糖樹(shù)脂（用于GST標(biāo)簽蛋白純化） | 50ml | 3848.00 |
20507ES60 | GSTSep Glutathione Agarose Resin 谷胱甘肽瓊脂糖樹(shù)脂（用于GST標(biāo)簽蛋白純化） | 100ml | 6898.00 |
20508ES10 | GSTSep Glutathione Agarose Resin 4FF 谷胱甘肽高速純化樹(shù)脂（用于GST標(biāo)簽蛋白純化） | 10ml | 1238.00 |
20508ES50 | GSTSep Glutathione Agarose Resin 4FF 谷胱甘肽高速純化樹(shù)脂（用于GST標(biāo)簽蛋白純化） | 50ml | 4568.00 |
20508ES60 | GSTSep Glutathione Agarose Resin 4FF 谷胱甘肽高速純化樹(shù)脂（用于GST標(biāo)簽蛋白純化） | 100ml | 7928.00 |
20509ES03 | GSTSep Glutathione 4FF Chromatography Column, 1ML（GST標(biāo)簽蛋白純化預(yù)裝柱，1ML） | 1ml | 328.00 |
20509ES08 | GSTSep Glutathione 4FF Chromatography Column, 1ML（GST標(biāo)簽蛋白純化預(yù)裝柱,，1ML） | 5×1ml | 1348.00 |
