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DiR Iodide (DiIC₁₈(7)) 細(xì)胞膜深紅色熒光探針

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品描述

DiI, DiO, DiD, DiR是一系列親脂性的熒光染料，可以用來染細(xì)胞膜和其它脂溶性生物結(jié)構(gòu),。這些環(huán)境敏感性熒光染料在進入細(xì)胞膜之前熒光非常弱,，當(dāng)與細(xì)胞膜結(jié)合后其熒光強度大大增強。且具有消光系數(shù)高,、極性依賴性,、激發(fā)態(tài)壽命短等特點。一旦進入細(xì)胞膜后，可在整個細(xì)胞膜上擴散,，*濃度時可以使整個細(xì)胞膜染色,。不同的熒光染色（DiI:橙色熒光; DiO:綠色熒光; DiD:紅色熒光; DiR: 深紅色熒光）為活細(xì)胞多標(biāo)、流式分析提供了便利：1）DiO和DiI可分別用標(biāo)準(zhǔn)的FITC濾光片和TRITC濾光片檢測,。2）DiD是DiI的衍生物,，具有明顯往紅光遷移的激發(fā)和發(fā)射光譜，這一特性使其特別適合標(biāo)記具顯著自熒光效應(yīng)的細(xì)胞或組織,。3）DiR具強效的近紅外光穿透細(xì)胞或組織,，并在近紅外區(qū)具較低的自熒光水平，這些特性使其特適用于體內(nèi)成像或示蹤實驗,。

產(chǎn)品性質(zhì)

運輸與保存方法

冰袋（wet ice）運輸,。產(chǎn)品-20 oC干燥避光保存,，有效期二年,。

注意事項

1）     熒光染料均存在淬滅問題,，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅,。

2）     為了您的安全和健康,，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用方法

1. 染色液制備

（1）配置DMSO或EtOH 儲存液：儲存液用 DMSO或EtOH配置濃度1～5 mM,。

【注】未使用的儲存液分裝儲存在-20℃,，避免反復(fù)凍融。

（2）工作液制備：用合適的緩沖液（如：無血清培養(yǎng)基,，HBSS或PBS）稀釋儲存液,，配制濃度為1～5 μM的工作液。

【注】工作液zui終濃度建議根據(jù)不同細(xì)胞系和實驗體系來優(yōu)化,。建議從推薦濃度的10倍范圍內(nèi)開始*濃度的摸索,。

2. 懸浮細(xì)胞染色

（1）加入適當(dāng)體積的染色工作液重懸細(xì)胞，使其密度為1×10⁶/mL,。

（2）37 ℃孵育細(xì)胞 2～20min,，不同的細(xì)胞*培養(yǎng)時間不同?？梢?/span>20min作為起始孵育時間,，之后優(yōu)化體系以得到均一的標(biāo)記結(jié)果。

（3）孵育結(jié)束,，按1000～1500 rpm離心5min,。

（4）傾倒上清液，再次緩慢加入37℃預(yù)熱的生長培養(yǎng)液重懸細(xì)胞。

（5）重復(fù)（3）,，（4）步驟兩次以上,。

3. 貼壁細(xì)胞的染色

（1）將貼壁細(xì)胞培養(yǎng)于無菌蓋玻片上。

（2）從培養(yǎng)基中移走蓋玻片,，吸走過量培養(yǎng)液,，將蓋玻片放在潮濕的環(huán)境中。

（3）在蓋玻片的一角加入100μL的染料工作液,，輕輕晃動使染料均勻覆蓋所有細(xì)胞,。

（4）37 ℃孵育細(xì)胞 2～20min，不同的細(xì)胞*培養(yǎng)時間不同,?？梢?/span>20min作為起始孵育時間，之后優(yōu)化體系以得到均一的標(biāo)記結(jié)果,。

（5）吸干染料工作液,，用培養(yǎng)液洗蓋玻片2～3次，每次用預(yù)溫的培養(yǎng)基覆蓋所有細(xì)胞,，孵育5～10min,，然后吸干培養(yǎng)基。

4. 顯微鏡檢測

（1）DiD,，DiO,，DiI，DiR和DiS濾光器的選擇參見表1,。

（2）多色染料的同時檢測,，濾光器按照以下設(shè)定：

a) DiI和DiO＝Omega XF52，Chroma 51004,；

b) DiI和DiD＝Omega XF92,，Chroma 51007；

c) DiI,，DiO和DiD＝Omega XF93,，Chroma 61005

5. 流式細(xì)胞儀檢測

經(jīng)DiO，DiI,，DiD和DiR染色的細(xì)胞可分別用流式細(xì)胞儀的FL1,，FL2，FL3或FL4通道檢測,。

表1 相關(guān)產(chǎn)品性質(zhì)