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60220ES03G418 Sulfate（Geneticin） 遺傳霉素
| 參考價: | 面議 |
具體成交價以合同協(xié)議為準- 60220ES03 產(chǎn)品型號
- Yeasen/翌圣生物 品牌
- 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
- 上海市 所在地
訪問次數(shù)：2014更新時間：2023-12-12 08:41:09
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產(chǎn)品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 1G |
|---|---|---|---|
| 貨號 | 60220ES03 | 應用領域 | 生物產(chǎn)業(yè) |
產(chǎn)品介紹
G418 Sulfate(Geneticin) 遺傳霉素
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號 | 規(guī)格 | 價格（元） |
G418 Sulfate (Geneticin) 遺傳霉素 | 60220ES03 | 1 g | 338.00 |
G418 Sulfate (Geneticin) 遺傳霉素 | 60220ES08 | 5 g | 1480.00 |
產(chǎn)品描述
G418 Sulfate（G418硫酸鹽）,，也稱作Geneticin（遺傳霉素），是一種結構類似于慶大//霉素B1（Gentamycin B1）的氨基糖苷類抗生素,，通過影響80S核糖體功能和阻斷延伸步驟來干擾蛋白合成,，對原核和真核等細胞都有毒性，包括細菌,、酵母,、高等植物和哺乳動物細胞 ，也包括原生動物和蠕蟲,。其抗性基因（主要為neo基因）位于轉(zhuǎn)座子Tn601（903）或Tn5（來源于細菌）,，但是可以在真核細胞中表達。通過基因重組技術將這些抗性基因?qū)爰毎?，使其獲得對G418的耐藥性,，從而用來篩選和維持培養(yǎng)攜帶抗性基因的原核或者真核細胞。
哺乳動物細胞中,，當抗性基因neo被整合進真核細胞基因組后 ,，使其編碼表達氨基糖苷磷酸轉(zhuǎn)移酶（amino-glycoside 3’-phosphotransferase，APH(3')II）,。此酶通過共價修飾G418的氨基或羥基功能,，抑制抗生素-核糖體間的相互作用，從而使得抗生素失活,。這一特性賦予細胞產(chǎn)生抗性,。穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株篩選實驗，需要建立殺滅曲線（劑量反應曲線）確定殺死無抗性細胞的低有效濃度,。
植物細胞中,，通過轉(zhuǎn)染攜帶nptII基因的抗性質(zhì)粒孵育其抗性。nptII基因也能編碼表達氨基糖苷磷酸轉(zhuǎn)移酶，這個酶使得多種抗生素喪失活性,，包括G418,，卡那//霉素和巴龍//霉素。
產(chǎn)品性質(zhì)
英文同義名（English synonym） 中文同義名（Chinese synonym） | Antibiotic G418; G418 Sulfate G418硫酸鹽,；遺傳霉素 |
CAS號（CAS No.） | 108321-42-2 |
分子式（Molecular formula） | C20H40N4O10·2 H2SO4 |
分子量（Molecular weight） | 692.7 g/mol |
外觀（Appearance） | 白色粉末 |
純度（Purity） | ~98% |
活力（Potency）（anhydrous） 溶解性（Solubility） | >700 μg/mg 溶于水 |
結構式（Structure） |
|
運輸與保存方法
常溫運輸,。-20℃避光保存，有效期3年,。避免受潮,，否則會降低抗生素活力。
使用方法
1. G418儲存液的配制（50 mg/mL,，活性濃度）
1）活力單位的換算
根據(jù)此公式進行換算：（1000/A0）×A1=A2,，其中A0是G418的活力值（Potency），因批次而異,?？梢娕螌馁|(zhì)檢報告，或者瓶子上的標簽,。A1是想配制的活性G418濃度,。A2是實際稱重的粉末與體積比濃度。
比如若所用批次的G418 活力值為：750 µg/mg,，要配制50 mg/mL的G418活性濃度,，則實際要配制的粉末濃度為1000/750×50 mg/mL=66.33 mg/mL。
如果配制10 mL的G418儲存液（活性濃度,，50 mg/mL）,，則需要稱取663.3 mg粉末。
2）除菌和保存
根據(jù)上述換算得到的實際粉末稱重量,，加入10 mL無菌去離子水內(nèi)使其*溶解,。
先用5 mL無菌去離子水預濕潤0.22 μm針頭式過濾器，除盡水,。之后使用此濾器過濾,，除菌后分裝成單次使用的小量（如1mL）放到-20℃凍存，1年穩(wěn)定,。
【注】 ①不要對混濁的溶液進行過濾,，因為混濁的溶液意味著未*溶解，過濾過程中會造成藥物損失,，降低終液的活性,。
②不建議使用液體培養(yǎng)基，NaCl,，磷酸鹽溶液或者有機溶劑來制備儲存液,。
2. 常用篩選濃度
一般來說,，剛開始篩選轉(zhuǎn)化子需要高濃度的G418，并用一個較低濃度的G418用于維持培養(yǎng),。生長條件,，細胞類型和其他的環(huán)境因素都可能影響G418的用量，因此第—次使用的實驗體系建議通過殺滅曲線（kill curve）,，即劑量反應性曲線,，來確定*篩選濃度。
通常情況,，哺乳動物細胞篩選范圍200-2000 μg/mL,；植物細胞：10-100 μg/mL；酵母細胞：500-1000 μg/mL,。
以下是一些細胞類型使用G418篩選使用的濃度,，可做參考,。
細胞類型 | 激活濃度 | 應用 | 引用文獻 |
網(wǎng)柄菌屬 | a) 10 μg/mL b) 30 μg/mL | a）培養(yǎng)在培養(yǎng)液中 b）培養(yǎng)在凍干細菌上 | Hirth,et. al., Proc. Natl. Acad. Sci., v. 79, 7356-7360 (1982). |
哺乳動物 | a) 400 -1000 μg/mL b) 200 μg/mL | a）用于篩選 b）用于維持生長 | Canaani and Berg, Proc. Natl. Acad. Sci., v. 79, 5166-5170 (1982). |
植物 | a) 25-50 μg/mL b) 10 μg/mL | a）用于篩選 b）用于維持生長 | Ursic, et. al., Biochem. Biophys. Res. Comm., v. 101:3, 1031-1037 (1981). |
酵母 | a) 500 μg/mL b) 125-200 μg/mL | a）用于篩選 b）用于維持生長 | Jimenez and Davies, Nature, v. 287, 869-871 (1980). |
細菌 | 16 μg/mL | 用于篩選 | Waitz, et. al., Antimicrob. Agents Chemother., v. 6:5, 579-581 (1974). |
3. 殺滅曲線的建立
【注意事項】
為了篩選得到穩(wěn)定表達目的蛋白的細胞株,，需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細胞的抗生素低濃度，可通過建立殺滅曲線來實現(xiàn),，至少選擇6個濃度,。處理分裂期的細胞時G418的活性zui強，因此在添加G418之前需要讓細胞培養(yǎng)一段時間,。
1) 第—天：未轉(zhuǎn)化的細胞按照20-25%的細胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上,，37℃，CO2培養(yǎng)過夜,。
【注】對于需要更高密度來檢測活力的細胞,，可增加接種量。
2) 根據(jù)細胞類型,，設定合適范圍內(nèi)的濃度梯度,。以哺乳動物細胞為例，可設定0,，50,，100，200,，400,，800，1000 μg/mL,。
3) 第二天：去除舊的培養(yǎng)基,，換用新鮮配制的含有相應濃度藥物的培養(yǎng)基。每個濃度做三個平行孔,。
4) 接下來每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基,。
5) 按照固定的周期（如每2天）進行活細胞計數(shù)來確定阻止未轉(zhuǎn)染細胞生長的恰當濃度,。選擇在理想的天數(shù)（通常是7-10天）內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細胞的低濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞篩選用的工作濃度。
4. 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞的篩選
1) 轉(zhuǎn)染48 h后,，用含有適當濃度的G418篩選培養(yǎng)基來傳代細胞（直接傳代或者稀釋后傳代）,。【注】細胞處于活躍分裂狀態(tài)時抗生素的殺傷效果。當細胞過于稠密,，其效率會降低,。為了得到較好的篩選效果，將細胞稀釋至豐度不超過25%,。
2) 每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液,。
3) 篩選7天后觀察并評估細胞克隆（集落）的形成情況,。集落的形成可能還需要一周或者更多的時間,，這取決于宿主細胞類型，轉(zhuǎn)染以及篩選效果,。
4) 挑取并轉(zhuǎn)移5-10個抗性克隆于35 mm細胞培養(yǎng)板,，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。
5) 之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可,。
注意事項
1) 本品不可高壓滅菌,；
2) G418不要和其他的抗生素/抗真菌劑（如青//霉素/鏈霉//素）共同使用，因為它們是G418的競爭性抑制劑,。其他的抗生素也會產(chǎn)生交叉活性,。
3) 配制G418溶液時，一定要根據(jù)G418批次不同的活力值（potency）來進行換算,，從而得到需要活性濃度的儲存液及工作液,。
4) G418加入培養(yǎng)體系中未轉(zhuǎn)染的細胞有可能不會被殺死，原因在于藥物濃度過低,，或者細胞密度過高,。另外，快速分裂的細胞相對于緩慢增殖細胞,，更容易被殺死,。對照細胞（未轉(zhuǎn)染）可能抗生素添加5-7天后才能殺死，轉(zhuǎn)染細胞（抗性克隆子）的克隆需要10-14天形成,。
5) 即使加入殺死劑量的G418,，細胞可能會繼續(xù)分裂2-3次。G418的藥效通常在2天后才變得明顯,。
6) 為了您的安全和健康,，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
