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5-BrdU 溴化去氧尿苷
參考價: 面議
具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)
  • 產(chǎn)品型號
  • Yeasen/翌圣生物 品牌
  • 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
  • 上海市 所在地

訪問次數(shù):959更新時間:2023-02-10 16:55:39

聯(lián)系我們時請說明是化工儀器網(wǎng)上看到的信息,謝謝!
產(chǎn)品簡介
供貨周期 現(xiàn)貨 應(yīng)用領(lǐng)域 化工,生物產(chǎn)業(yè)
5-BrdU 溴化去氧尿苷是胸腺嘧啶的衍生物,,常用于標(biāo)記活細(xì)胞中新合成的DNA,,可代替胸腺嘧啶選擇性整合到復(fù)制細(xì)胞中新合成的DNA中(細(xì)胞周期S期),。這種摻入可以穩(wěn)定存在,隨著DNA復(fù)制進入子細(xì)胞中。
產(chǎn)品介紹

產(chǎn)品描述

5-BrdU 溴化去氧尿苷目前常用的細(xì)胞增殖標(biāo)記物有4種,DNA聚合酶α(DNA polymerase α),,增殖細(xì)胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen,PCNA),,Ki-67和5-溴脫氧尿嘧|啶核苷(Brdu),。其中Brdu為組織細(xì)胞非內(nèi)源性表達(dá)存在,應(yīng)用相對較廣,。Brdu,,也稱為溴化去氧尿苷,一種合成的胸苷類似物,,在S期可替代胸腺嘧啶核苷選擇性結(jié)合到細(xì)胞DNA中,。從而檢測細(xì)胞DNA合成和標(biāo)記細(xì)胞分裂,凋亡等行為,。在遺傳研究中Brdu可通過活體注射或細(xì)胞培養(yǎng)加載,,然后使用抗Brdu的單克隆抗體進行特異性標(biāo)記,ICC或IHC法染色法顯示增殖細(xì)胞,。另外,,還能同時結(jié)合其它細(xì)胞標(biāo)記物,雙重染色,,來判斷增殖細(xì)胞的種類,,增殖速度等,對研究細(xì)胞動力學(xué)有著重要意義,。


產(chǎn)品性質(zhì)

中文別名(Chinese Synonym

5-溴-1-(2-脫氧-β-D-呋喃核糖)尿嘧|啶,;5-溴脫氧尿苷;溴化去氧尿苷,;

英文別名(English Synonym

Br-dU; BUdR;   5-BrdU; 5-Bromodeoxyuridine;

CAS號(CAS NO.

59-14-3

分子式(Formula

C9H11BrN2O5

分子量(Molecular Weight

307.10

外觀(Appearance

白色或類白色粉末

熔點(Melting Point

187-189℃

純度(Purity, HPLC

≥99%

溶解性(Solubility

溶于1M 氫氧化銨(50 mg/mL),,水(高達(dá)10 mg/mL);溶于DMF,,DMSO,,水(加熱)(50-100 mg/mL)

結(jié)構(gòu)式(Structure

image.png


運輸和保存方法

冰袋運輸。-20℃干燥保存,,2年有效,。


操作步驟

1.Brdu儲存液的準(zhǔn)備
1X DPBS充分溶解適量的Brdu配置10 mg/mL的母液,過濾除菌后,,按照0.5mL/管的量分裝放在-20°C或者-80°C長期保存,避免反復(fù)凍融。Brdu儲存液再融化后,,4°C可穩(wěn)定存放一周,。
2.體內(nèi)Brdu標(biāo)記

1)腹腔注射法(常用):無菌的10 mg/mL(溶于DPBS)適合用于體內(nèi)注射用。按照100-200 μL(1-2 mg) Brdu的量腹腔注射到小鼠體內(nèi),。注意:最短在注射后0.5 h后在小腸,,胸腺和骨髓瘤處就能檢測到Brdu。而一般在注射后24 h內(nèi)幾乎所有組織都能檢測到Brdu,。這個時間可能對于一些快速分化的組織如小腸來說有些久,。

2)根據(jù)自身的實驗體系,在合適的時間點處死動物,,摘除待研究的組織,。使用冰凍切片或者石蠟包埋的方法進行組織處理和切片制備。然后進入后續(xù)的IHC染色步驟,。

3.體外Brdu標(biāo)記(培養(yǎng)原代細(xì)胞或者細(xì)胞系)

注:總的來說,,10 μM Brdu(稀釋于培養(yǎng)液)是一個比較合適的方法用來標(biāo)記不同物種來源的原代細(xì)胞或細(xì)胞系。當(dāng)然,,建議針對具體的實驗體系優(yōu)化方法,。

1)在96孔板上按標(biāo)準(zhǔn)步驟進行細(xì)胞培養(yǎng),培養(yǎng)時間一般為1-72 h,;

2)Brdu工作液的準(zhǔn)備:用組織細(xì)胞培養(yǎng)液按照1:30的比例稀釋儲存液得到1mM Brdu工作液,。然后取10 μL 1 mM Brdu溶液直接加入1 mL組織培養(yǎng)液即得到最終工作液。37°C溫?zé)帷?/span>

3)按100 μL/孔Brdu工作液的量進行細(xì)胞標(biāo)記,,37°C孵育60 min~過夜,。同時設(shè)置非Brdu標(biāo)記的細(xì)胞作為陰性對照。注意:最佳的孵育時間取決于細(xì)胞增殖速度以及需要達(dá)到的實驗?zāi)康?。比如,,對于快速增殖?xì)胞(如HL-60)有效孵育時間為30-45 min;對于原代細(xì)胞(如未受外源刺激培養(yǎng)的外周血淋巴細(xì)胞)孵育時間可能需要24 h,。細(xì)胞密度最好不要超過2x106 cells/mL,。

4)制備單細(xì)胞層玻片,使用以下任何一種方法:

a.細(xì)胞離心涂片(cytospin)制備:使用細(xì)胞離|心涂片機,,將100 μL標(biāo)記好的細(xì)胞(濃度為:1-2 x106 cells/mL)直接離心到干凈,,無脂肪,poly-L-lysin包被的玻片上,,風(fēng)干,。

b.細(xì)胞涂片(cell-smear)制備:取一小滴標(biāo)記好的細(xì)胞懸液于干凈,無脂肪,,poly-L-lysin包被玻片的一端,,然后用第二個干凈玻片將其均勻涂布成一薄層。室溫風(fēng)干。

5)將玻片置于70%冰乙醇放在-20°C下定20-30 min,。

6)PBS清洗細(xì)胞3次,,每次5 min。

7)加入1.5M HCl中室溫孵育30 min,。注意:DNA的變性對于Brdu染色的成功至關(guān)重要,。

8)吸去HCl,PBS清洗2次,,每次5 min,。

9)進入后續(xù)ICC染色步驟。

4. 體外Brdu標(biāo)記(組織薄片)

1)Brdu工作液的準(zhǔn)備:用組織細(xì)胞培養(yǎng)液按照1:30的比例稀釋儲存液得到1 mM Brdu工作液,。然后取10 -20 μL 1 mM Brdu溶液直接加入1 mL組織培養(yǎng)液即得到最終工作液,。確保有足夠的工作液(37°C溫?zé)幔?span style="color: rgb(60, 80, 108); font-family: 思源雅黑, SimSun; background-color: rgb(255, 255, 255);">全部浸泡組織。

2)用手|術(shù)刀或者鋒利的刀片將組織切割成約1 mm厚,,2 mm2大小的薄片,。建議在溫?zé)岬呐囵B(yǎng)基內(nèi)進行切片,利于維持組織的活力,。

3)轉(zhuǎn)移組織薄片至預(yù)裝有10 mL Brdu標(biāo)記液的15 mL離心管內(nèi),。于37°,CO2 培養(yǎng)箱內(nèi)孵育需要的時間,。孵育時間可變,,取決于組織薄片類型以及需要達(dá)到的實驗?zāi)康模ǔS玫臑?-4 h)。直接丟棄未用完的標(biāo)記液,。

4)37°C PBS清洗組織薄片,,每次5 min。

5)使用標(biāo)準(zhǔn)的冰凍切片或者石蠟包埋切片的方法固定組織,。

HB210525





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