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Vaccinia Capping Enzyme牛痘病毒加帽酶
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號 | 規(guī)格 | 儲存 | 價格（元） |
Vaccinia Capping Enzyme牛痘病毒加帽酶 | 10615ES76 | 500 U | -20℃ | 1256.00 |
Vaccinia Capping Enzyme牛痘病毒加帽酶 | 10615ES84 | 2000 U | -20℃ | 3856.00 |
10615ES92 | 10000 U | -20℃ | 14856.00 |
產(chǎn)品描述
真核生物中mRNA經(jīng)轉錄后修飾在5端形成一個特殊結構,，即帽子結構，該結構對mRNA的穩(wěn)定,、轉運與翻譯過程均有較重要作用。牛痘病毒加帽酶是催化形成帽子結構的有效酶，其由D1和D12兩個亞基組成,，兼具RNA三磷酸酯酶活性,、鳥苷酰基轉移酶活性和鳥嘌呤甲基轉移酶活性,，可將7-甲基鳥嘌呤帽結構（m7Gppp）連接到RNA的5末端（m7Gppp5N）,。牛痘病毒加帽酶，在合適濃度的加帽緩沖液（Capping buffer）,，鳥苷三磷酸（GTP）,，S-腺苷甲硫氨酸（SAM）等存在條件下，能夠在一個小時之內(nèi)對RNA進行加帽,，效率可達到100%,，并且保證正確的方向。
本品以無菌液體形式提供,，可應用于體內(nèi)/體外翻譯前mRNA的加帽反應或mRNA的5末端標記反應,。
產(chǎn)品性質
來源（Source） | 攜帶牛痘病毒加帽酶基因的E. coli |
zui適溫度（Optimum Temperature） | 37℃ |
儲存緩沖液（Storage Buffer） | 20 mM Tris-HCl pH 8.0，100 mM NaCl,，1 mM DTT,，0.1 mM EDTA，0.1% Triton X-100,，50%甘油 |
活性單位定義（Unit Definition） | 37℃條件下,，1小時內(nèi)將10 pmol GTP（α- 32 P）摻入到一條含80個核苷酸（80 nt）轉錄產(chǎn)物上所需要的酶量,。 |
運輸和保存方法
冰袋運輸，-20℃保存,，有效期1年,。
注意事項
1）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作,；
2）所提取的RNA需經(jīng)過純化并使用無核酸酶的水重懸,；
3）在加入酶之前需要對RNA溶液進行加熱以去除5末端的二級結構；
4）對于已知5末端結構的RNA,，可以延長反應時間至60分鐘,，提高加帽效率；
5）5末端標記反應體系中,，GTP儲液應稀釋為反應體系中mRNA摩爾濃度的1-3倍,。
使用方法
1. 加帽反應
本步驟適用于10 μg RNA（≥ 100 nt）的加帽反應，且可根據(jù)實驗需要放大,。
1）取10 μg RNA至1.5 mL離心管,，使用無核酸酶的水稀釋至15 μL；
2）65℃加熱5分鐘,；
3）取出離心管置于冰上5分鐘,；
4）依次加入以下組分：
組分 | 體積 |
上述變性的RNA | 15 μL |
10×Capping Buffer | 2.0 μL |
GTP（10 mM） | 1.0 μL |
SAM（2 mM） | 1.0 μL |
Vaccinia Capping Enzyme（10 U/μL） | 1.0 μL |
【注】：10×Capping Buffer配方為：0.5 M Tris-HCl，pH 8.0,；50 mM KCl,，10 mM MgCl2，10 mM DTT,。
5）37°C孵育30分鐘,；
6）RNA加帽完成，可進行后續(xù)實驗,。
2. 5末端標記反應
本步驟適用于5末端帶有三磷酸的RNA標記,，且可根據(jù)實驗需要放大，其標記效率受反應體系中RNA與GTP摩爾濃度比以及RNA樣本中GTP含量影響,。
1）取適量RNA到1.5 mL離心管,，使用無核酸酶的水稀釋至14 μL；
2）65℃加熱5分鐘,；
3）取出離心管置于冰上5分鐘,；
4）依次加入以下組分：
組分 | 體積 |
上述變性的RNA | 14 μL |
10×Capping Buffer | 2.0 μL |
GTP mix | 2.0 μL |
SAM（2 mM） | 1.0 μL |
Vaccinia Capping Enzyme（10 U/μL） | 1.0 μL |
【注】：GTP mix為GTP和少量標記物，其中GTP使用濃度參照注意事項5）,。
5）37°C孵育30分鐘,；
6）RNA 5末端標記完成，可進行后續(xù)實驗,。
相關產(chǎn)品
產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 價格（元） |
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10603ES10 | Murine RNase inhibitor (40 U/μL) 鼠源RNase抑制劑 | 10 KU | 916.00 |
10603ES20 | Murine RNase inhibitor (40 U/μL) 鼠源RNase抑制劑 | 20 KU | 1695.00 |
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10132ES03 | GTP (100 mM) 鳥苷三磷酸溶液（100 mM） | 1 mL | 486.00 |
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20311ES60 | DTT 二硫蘇糖醇 | 100 g | 1688.00 |
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60102ES96 | Tris Base 三(羥甲基)氨基甲烷 | 1桶（25kg） | 3188.00 |
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