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關(guān)鍵詞：dsDNA,、雙鏈DNA、dsDNA定量,、熒光核酸染料,、A260、DNA殘留
Picogreen dsDNA雙鏈DNA（dsDNA）定量檢測
檢測原理
Picogreen是一種極為靈敏的熒光核酸染料,，常用于雙鏈DNA的定量檢測,。歷來DNA濃度的測定在cDNA文庫的構(gòu)建,，DNA亞克隆、PCR產(chǎn)物的估測等領(lǐng)域中具有重要意義,。疫苗等生物制品中殘留微量DNA的檢測更是直接關(guān)系到人類的健康,。
Picogreen僅在與DNA雙鏈結(jié)合后才發(fā)出熒光，且所產(chǎn)生的熒光與DNA濃度呈正比,，在存在ssDNA,、RNA和單體核苷酸的條件下，可以選擇性地檢測低至25pg/ml的dsDNA,。該分析在三個(gè)數(shù)量級(jí)范圍內(nèi)呈線性,，且?guī)缀鯚o序列依賴性，可以地測量多個(gè)來源的DNA,，包括基因組DNA,、病毒DNA、小量提取DNA或PCR擴(kuò)增產(chǎn)物,?？捎?/span>熒光分光光度計(jì)或熒光酶標(biāo)儀讀數(shù)，Ex/Em=480nm/520nm,。
產(chǎn)品優(yōu)勢
相比傳統(tǒng)的方法,，如紫外吸光法（A260）、探針雜交法,、Hoechst 33258染料法等,，Picogreen dsDNA Quantitation Reagent定量具有以下優(yōu)勢：
①靈敏度高：數(shù)量級(jí)較UV吸光讀數(shù)更敏感，可節(jié)省寶貴的樣品,；
②特異性強(qiáng)：在等摩爾的RNA存在的條件下,，對dsDNA具有特異性；
③耐受性好：耐受較高濃度的鹽,、尿素,、乙醇、氯仿,、去垢劑,、蛋白或瓊脂糖，可以直接定量PCR擴(kuò)增產(chǎn)物而無需從反應(yīng)混合物中純化DNA,。
④易于使用——只需在樣品中加入染料,，等待5分鐘，然后讀數(shù)即可,，且適用于96和384孔板,；與大多數(shù)基于熒光的酶標(biāo)儀和熒光計(jì)兼容。
⑤適用范圍廣：可適用于PCR的分析,、芯片樣品,、DNA損傷分析,、酶活性分析、基因組DNA定量以及復(fù)雜混合物中dsDNA的檢測和病毒DNA定量等多種領(lǐng)域,。
產(chǎn)品應(yīng)用
測定微量的DNA殘留（如疫苗生產(chǎn)）,；對DNA樣品進(jìn)行定量
運(yùn)輸和保存方法
室溫運(yùn)輸。4℃避光干燥保存,，有效期6個(gè)月,。
檢測步驟【以雙鏈DNA定量檢測試劑盒為例】
1、2μg/ml的Calf thymus DNA standard濃縮液的配制
用1×TE對Calf thymus DNA standard (100μg/ml)進(jìn)行50倍稀釋,，即向30μl Calf thymus DNA standard加入1.47ml 1×TE混勻即可,。
2、標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備
① 比色皿體系檢測（2ml）
a,、按照表1 向一次性微量比色皿中加入TE和2μg/ml Calf thymus DNA standard,，隨后加入1ml PicoGreen定量試劑，混勻后,，于室溫避光孵育2-5min，并以1×TE緩沖液為blank,?！咀ⅰ浚捍_信不要在樣品中引入氣泡，輕輕地彈微量檢測皿的外部,，可以驅(qū)散氣泡,。
表1 比色皿體系所需加入各組分量及標(biāo)準(zhǔn)品終濃度表
TE (μl) | 2μg/ml Calf thymus DNA standard (μl) | 稀釋的PicoGreen定量試劑 (μl) | Calf thymus DNA standard終濃度 |
0 | 1000 | 1000 | 1μg/ml |
900 | 100 | 1000 | 100ng/ml |
990 | 10 | 1000 | 10ng/ml |
999 | 1 | 1000 | 1ng/ml |
1000 | 0 | 1000 | blank |
b、于熒光儀中檢測各濃度熒光值,，Ex/Em=480nm/520nm,。
【注】：為了確保熒光讀數(shù)在熒光儀的檢測范圍內(nèi)，應(yīng)調(diào)節(jié)增益使含zui高DNA濃度的樣品熒光值與熒光儀的zui大值一致,；為了減少光漂白,，應(yīng)保持所有樣品的檢測時(shí)間一致。
c,、各濃度得到的熒光值減去空白對照熒光值,，對DNA濃度和熒光值做標(biāo)準(zhǔn)曲線。
② 微孔板體系檢測（200μl）
a,、按照表2 向96孔板中加入TE和2μg/ml Calf thymus DNA standard,，隨后加入100μl PicoGreen定量試劑，混勻后,，于室溫避光孵育2-5min,，并以1×TE緩沖液為blank?！咀ⅰ浚捍_信不要在樣品中引入氣泡,，輕輕地彈微量檢測皿的外部,，可以驅(qū)散氣泡。
表2酶標(biāo)板體系所需加入各組分量及標(biāo)準(zhǔn)品終濃度表
TE (μl) | 2μg/ml Calf thymus DNA standard (μl) | 稀釋的PicoGreen定量試劑 (μl) | Calf thymus DNA standard終濃度 |
0 | 100 | 100 | 1μg/ml |
90 | 10 | 100 | 100ng/ml |
99 | 1 | 100 | 10ng/ml |
99.9 | 0.1 | 100 | 1ng/ml |
100 | 0 | 100 | blank |
b,、于熒光酶標(biāo)儀中檢測各濃度熒光值,，Ex/Em=480nm/520nm。
【注】：為了確保熒光讀數(shù)在熒光儀的檢測范圍內(nèi),，應(yīng)調(diào)節(jié)增益使含zui高DNA濃度的樣品熒光值與熒光儀的zui大值一致,；為了減少光漂白，應(yīng)保持所有樣品的檢測時(shí)間一致,。
c,、各濃度得到的熒光值減去空白對照熒光值，對DNA濃度和熒光值做標(biāo)準(zhǔn)曲線,。
相關(guān)產(chǎn)品
產(chǎn)品編號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 價(jià)格（元） |
10224ES01 | Picogreen dsDNA Quantitation Reagent 雙鏈DNA（dsDNA）定量試劑 | 1Kit (100μl) | 518.00 |
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10225ES84 | Picogreen dsDNA Assay Kit 雙鏈DNA（dsDNA）定量檢測試劑盒 | 2000T | 4238.00 |
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