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關鍵詞：Lonza, 轉(zhuǎn)染,，電轉(zhuǎn),，Amaxa Nucleofector，細胞核,，神經(jīng)細胞,，糖尿病，胰島素

Amaxa Nucleofector 細胞核轉(zhuǎn)染系統(tǒng)

工作原理

Amaxa^?Nucleofector^?技術是 Lonza(原Amaxa)公司的創(chuàng)新技術,，它綜合應用傳統(tǒng)的電穿孔技術及細胞特異性細胞核轉(zhuǎn)染液,，通過調(diào)整優(yōu)化的電轉(zhuǎn)參數(shù)（內(nèi)存轉(zhuǎn)染程序），直接把外源基因?qū)朐毎凹毎档募毎麧{和細胞核中,。它不同于傳統(tǒng)的電穿孔儀,，因為它可以把外源基因直接導入核中，而且細胞存活率遠遠高于電穿孔儀,。

Nucleofector 技術是*的，因為它可以直接將DNA轉(zhuǎn)染到細胞核內(nèi),，因此實現(xiàn)了因受到細胞分裂限制而一直困擾人們的原代細胞的率轉(zhuǎn)染,。在 Nucleofector核酸轉(zhuǎn)染儀的幫助下，您可以在腫瘤研究,、免疫學,、組織工程學及心血管疾病研究領域中輕而易舉地獲得大于90％的率基因轉(zhuǎn)染率。Nucleofector 核酸轉(zhuǎn)染技術特別適用于轉(zhuǎn)染原代細胞和難以轉(zhuǎn)染的細胞系,，如T細胞及PC-12細胞系等,。

Nucleofector試劑盒包含兩個溶液：Nucleofector溶液和添加劑。兩者都是針對每個細胞類型來特異開發(fā)的,。它們在核轉(zhuǎn)染過程中提供了細胞友好的環(huán)境,，支持DNA直接到達細胞核。Nucleofector溶液只與Nucleofector裝置共同使用時,，才能發(fā)揮作用,。

產(chǎn)品優(yōu)勢

1.不依賴細胞的有絲分裂，適用于懸浮細胞,、原代細胞等難轉(zhuǎn)染細胞,。

2. 高轉(zhuǎn)染效率，直接將外源基因轉(zhuǎn)入核內(nèi),。

在某些細胞中Nucleofector的轉(zhuǎn)染效率可以達到90%,，與病毒感染同樣有效。Nucleofector直接將DNA運送到細胞核中,，因此,，基因表達就可以立即開始，數(shù)小時內(nèi)就可以完成轉(zhuǎn)染和分析的全過程,，對于細胞系來說2-6小時就可以分析,，對于原代細胞則需要4-16小時,。

3.可轉(zhuǎn)染DNA、RNA或siRNA,。

4.操作簡單方便,，Nucleofector轉(zhuǎn)染技術操作不到1小時就能完成。

5.zui廣泛細胞類型,，共享的細胞轉(zhuǎn)染數(shù)據(jù)庫不斷擴大,。目前已有1200余種細胞系轉(zhuǎn)染，130余種原代細胞成功轉(zhuǎn)染,。

6.維持細胞生理功能,。

Nucleofector 細胞核轉(zhuǎn)染技術操作步驟  
整個操作過程只需四步，非常簡單,、,。 
第1步：處理細胞，計數(shù) 
第2步：混合DNA,、轉(zhuǎn)染液,，重懸細胞，加入轉(zhuǎn)染杯 
第3步：將轉(zhuǎn)染杯放入轉(zhuǎn)染儀,，按鍵選擇相應程序,，按"start"鍵開始轉(zhuǎn)染，10秒鐘左右 
第4步：取出細胞繼續(xù)培養(yǎng)

外源基因直接導入核內(nèi),。Normal human dermal fibroblasts –neonatal were nucleofected with 2.5 μg TMR-labeled plasmid DNA encoding eGFP. Fixation of cells was performed after 2 hours with 3.5 % PFA. TMR label is shown in (A), GFP fluorescence in (B), DAPI nuclear staining in (C) and a merge of all three fluorescent labels in (D).

zui廣泛細胞類型的轉(zhuǎn)染

產(chǎn)品

延伸閱讀

（一）Lonza Nucleofector? Technology在神經(jīng)生物學中的應用

——Nucleofector?技術可以使您穩(wěn)定而的對不同種屬和來源的神經(jīng)細胞進行轉(zhuǎn)染

傳統(tǒng)的脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法和電穿孔轉(zhuǎn)染技術不能有效的對神經(jīng)元細胞進行轉(zhuǎn)染,。由于Lonza的Amaxa Nucleofector?電轉(zhuǎn)儀采用的是的Nucleofector?技術，能夠?qū)⑼庠椿蛑苯訉氲郊毎酥?，克服了脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染和普通電穿孔必須依賴細胞分裂時才有可能使外源基因入核表達的缺陷,。如果使用Nucleofector? 4D Y Unit電轉(zhuǎn)模塊，甚至可以對細胞進行原位貼壁電轉(zhuǎn),，即使是轉(zhuǎn)染凍存的原代神經(jīng)元細胞也能夠達到和新鮮提取的神經(jīng)元一樣的效果,。

（二）Lonza Nucleofector?技術在糖尿病研究中的應用

  現(xiàn)階段，糖尿病的研究模型主要有糖尿病鼠活體模型和細胞模型,。細胞模型主要是從分子層面研究糖尿病的形成,、發(fā)病、遺傳機制,，爭取能夠通過分子手段治療糖尿病,，尤其是治療具有家族遺傳性的糖尿病。在現(xiàn)代醫(yī)學和生物學研究中,，常用于糖尿病研究的細胞有THP-1,，鼠原代CD4+T細胞、原代主動脈內(nèi)皮細胞,、小鼠胰島瘤細胞系（MIN6）,、Hela細胞,、冠狀動脈平滑肌細胞（CASMCs）、HL60,、人視網(wǎng)膜色素上皮細胞系（ARPE-19）,、人PBMCs細胞、RBL-2H3等細胞,。在以細胞為模型的研究當中,，科研人員需要將感興趣的外源物質(zhì)（質(zhì)粒DNA、siRNA等）地轉(zhuǎn)入細胞中,，已達到對目的基因進行干擾的目的,；但上述提到的這些常用細胞都是非常難轉(zhuǎn)染的細胞，利用常規(guī)的轉(zhuǎn)染方法很難將外源基因地轉(zhuǎn)入細胞中,，所以選擇一個合適的細胞轉(zhuǎn)染方法對實驗的順利開展就顯得至關重要了,。在之前的糖尿病研究當中，為了能夠?qū)毎M行率的轉(zhuǎn)染,，很多科學家都選擇了Lonza核轉(zhuǎn)染技術作為細胞轉(zhuǎn)染的方法和手段,，實現(xiàn)了細胞的轉(zhuǎn)染，并取得了滿意的實驗結(jié)果,。

參考文獻

1.Marina Cardellini等以冠狀動脈平滑肌細胞（CASMCs）為模型，利用Lonza核轉(zhuǎn)染等技術,，研究了Ⅱ型糖尿病患者的動脈粥樣硬化斑塊忠SirT1對TIMP3的表達調(diào)控作用,。實驗結(jié)果顯示在CASMCs中，抑制SirT1的活性會下調(diào)TIMP3的表達,，同時SirT1的過表達會上調(diào)TIMP3的表達,。

2.Serve Olieslagers以人單核細胞為模型，利用siRNA基因敲除技術（Lonza核轉(zhuǎn)染系統(tǒng)）,，對SMAD2和SMAD3進行敲除,，電轉(zhuǎn)染后細胞成活率>90%。實驗結(jié)果顯示,，SMAD2和SMAD3不會對TGF-β1介導的單核細胞遷移能力產(chǎn)生影響,。

3.Suseela Srinivasan等以小鼠原代CD4+T細胞為模型，利用Lonza核轉(zhuǎn)染（siRNA）等技術,，研究S1P能否通過調(diào)節(jié)HIF1α I.1和CD69的表達從而降低I型糖尿病人CD4+T細胞的活性,，進而發(fā)掘S1P降低I糖尿病人并發(fā)炎癥的治療潛能。實驗結(jié)果顯示S1P能夠顯著性的上調(diào)HIF1αI.1,，從而使IFN-和CD69的表達下調(diào),，進行降低I型糖尿病人CD4+T細胞的活性，具有一定的潛在治療能力,。

4.Tian等以小鼠原代主動脈內(nèi)皮細胞為模型,，利用Lonza核轉(zhuǎn)染（轉(zhuǎn)染效率70%）等技術,，研究Akt信號通路與GW1516的相互作用關系。實驗結(jié)果顯示Akt活性的受抑制會降低GW1516在小鼠原代主動脈內(nèi)皮細胞的活化作用,。

5.Intza Garin等以Hela細胞為模型,，利用Lonza核轉(zhuǎn)染技術，將2個重要的INF隱性突變基因轉(zhuǎn)入Hela細胞,，研究突變基因?qū)σ葝u素的合成是否產(chǎn)生影響,。實驗結(jié)果顯示，和轉(zhuǎn)入正常INF基因的細胞相比,，轉(zhuǎn)入隱性突變基因的細胞中的胰島素含量分別減少了86%和79%,。所以Intza Garin等認為具有隱性突變的INF基因的個體會減少胰島素的合成，從而誘發(fā)新生兒短暫性糖尿病,。

6.Niels Engberding[6]等以斯普拉格-杜勒鼠原代血管平滑肌細胞（VSMCs）為模型,，利用腺病毒感染和Lonza核轉(zhuǎn)染技術（RNAi）分別對IGF1Rs進行過表達和下調(diào)表達，研究IGF1Rs表達量變化對VSMCs的胰島素敏感性產(chǎn)生的影響,。實驗結(jié)果顯示IGF1Rs的過表達會降低胰島素介導的Akt磷酸化的水平,；IGF1Rs的下調(diào)表達會增強胰島素介導的IRβ的磷酸化水平，會增強細胞對葡萄糖的攝取能力,。

7.Jamie Cantrell Stanford等以MIN6細胞系為模型,，利用siRNA技術（Lonza核轉(zhuǎn)染系統(tǒng)）分別對神經(jīng)鞘氨醇激酶2（SphK2）和Sgpp1（S1P磷酸酶）進行基因敲除，以此研究鞘氨醇激酶（S1P）對葡萄糖刺激的胰島素分泌過程的調(diào)控作用,。實驗結(jié)果表明S1P在葡萄糖刺激的胰島素分泌過程起到非常關鍵的調(diào)控作用,。