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Amaxa Nucleofector 細(xì)胞核轉(zhuǎn)染系統(tǒng)

工作原理

Amaxa^?Nucleofector^?技術(shù)是 Lonza(原Amaxa)公司的創(chuàng)新技術(shù),，它綜合應(yīng)用傳統(tǒng)的電穿孔技術(shù)及細(xì)胞特異性細(xì)胞核轉(zhuǎn)染液，通過調(diào)整優(yōu)化的電轉(zhuǎn)參數(shù)（內(nèi)存轉(zhuǎn)染程序）,，直接把外源基因?qū)朐?xì)胞及細(xì)胞系的細(xì)胞漿和細(xì)胞核中。它不同于傳統(tǒng)的電穿孔儀,，因為它可以把外源基因直接導(dǎo)入核中,，而且細(xì)胞存活率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于電穿孔儀。

Nucleofector 技術(shù)是*的,，因為它可以直接將DNA轉(zhuǎn)染到細(xì)胞核內(nèi),，因此實現(xiàn)了因受到細(xì)胞分裂限制而一直困擾人們的原代細(xì)胞的率轉(zhuǎn)染。在 Nucleofector核酸轉(zhuǎn)染儀的幫助下,，您可以在腫瘤研究,、免疫學(xué)、組織工程學(xué)及心血管疾病研究領(lǐng)域中輕而易舉地獲得大于90％的率基因轉(zhuǎn)染率,。Nucleofector 核酸轉(zhuǎn)染技術(shù)特別適用于轉(zhuǎn)染原代細(xì)胞和難以轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系,，如T細(xì)胞及PC-12細(xì)胞系等。

Nucleofector試劑盒包含兩個溶液：Nucleofector溶液和添加劑,。兩者都是針對每個細(xì)胞類型來特異開發(fā)的,。它們在核轉(zhuǎn)染過程中提供了細(xì)胞友好的環(huán)境，支持DNA直接到達(dá)細(xì)胞核,。Nucleofector溶液只與Nucleofector裝置共同使用時,，才能發(fā)揮作用。

產(chǎn)品優(yōu)勢

1.不依賴細(xì)胞的有絲分裂,，適用于懸浮細(xì)胞,、原代細(xì)胞等難轉(zhuǎn)染細(xì)胞。

2. 高轉(zhuǎn)染效率,，直接將外源基因轉(zhuǎn)入核內(nèi),。

在某些細(xì)胞中Nucleofector的轉(zhuǎn)染效率可以達(dá)到90%,，與病毒感染同樣有效。Nucleofector直接將DNA運送到細(xì)胞核中,，因此,，基因表達(dá)就可以立即開始，數(shù)小時內(nèi)就可以完成轉(zhuǎn)染和分析的全過程,，對于細(xì)胞系來說2-6小時就可以分析,，對于原代細(xì)胞則需要4-16小時。

3.可轉(zhuǎn)染DNA,、RNA或siRNA,。

4.操作簡單方便，Nucleofector轉(zhuǎn)染技術(shù)操作不到1小時就能完成,。

5.zui廣泛細(xì)胞類型,，共享的細(xì)胞轉(zhuǎn)染數(shù)據(jù)庫不斷擴大。目前已有1200余種細(xì)胞系轉(zhuǎn)染,，130余種原代細(xì)胞成功轉(zhuǎn)染,。

6.維持細(xì)胞生理功能。

Nucleofector 細(xì)胞核轉(zhuǎn)染技術(shù)操作步驟  
整個操作過程只需四步,，非常簡單,、。 
第1步：處理細(xì)胞,，計數(shù) 
第2步：混合DNA,、轉(zhuǎn)染液，重懸細(xì)胞,，加入轉(zhuǎn)染杯 
第3步：將轉(zhuǎn)染杯放入轉(zhuǎn)染儀,，按鍵選擇相應(yīng)程序，按"start"鍵開始轉(zhuǎn)染,，10秒鐘左右 
第4步：取出細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)

外源基因直接導(dǎo)入核內(nèi),。Normal human dermal fibroblasts –neonatal were nucleofected with 2.5 μg TMR-labeled plasmid DNA encoding eGFP. Fixation of cells was performed after 2 hours with 3.5 % PFA. TMR label is shown in (A), GFP fluorescence in (B), DAPI nuclear staining in (C) and a merge of all three fluorescent labels in (D).

zui廣泛細(xì)胞類型的轉(zhuǎn)染

產(chǎn)品

延伸閱讀

（一）Lonza Nucleofector? Technology在神經(jīng)生物學(xué)中的應(yīng)用

——Nucleofector?技術(shù)可以使您穩(wěn)定而的對不同種屬和來源的神經(jīng)細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染

傳統(tǒng)的脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法和電穿孔轉(zhuǎn)染技術(shù)不能有效的對神經(jīng)元細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染。由于Lonza的Amaxa Nucleofector?電轉(zhuǎn)儀采用的是的Nucleofector?技術(shù),，能夠?qū)⑼庠椿蛑苯訉?dǎo)入到細(xì)胞核中,，克服了脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染和普通電穿孔必須依賴細(xì)胞分裂時才有可能使外源基因入核表達(dá)的缺陷。如果使用Nucleofector? 4D Y Unit電轉(zhuǎn)模塊,，甚至可以對細(xì)胞進(jìn)行原位貼壁電轉(zhuǎn),，即使是轉(zhuǎn)染凍存的原代神經(jīng)元細(xì)胞也能夠達(dá)到和新鮮提取的神經(jīng)元一樣的效果。

（二）Lonza Nucleofector?技術(shù)在糖尿病研究中的應(yīng)用

  現(xiàn)階段,，糖尿病的研究模型主要有糖尿病鼠活體模型和細(xì)胞模型,。細(xì)胞模型主要是從分子層面研究糖尿病的形成、發(fā)病、遺傳機制,，爭取能夠通過分子手段治療糖尿病,，尤其是治療具有家族遺傳性的糖尿病。在現(xiàn)代醫(yī)學(xué)和生物學(xué)研究中,，常用于糖尿病研究的細(xì)胞有THP-1,，鼠原代CD4+T細(xì)胞、原代主動脈內(nèi)皮細(xì)胞,、小鼠胰島瘤細(xì)胞系（MIN6）,、Hela細(xì)胞、冠狀動脈平滑肌細(xì)胞（CASMCs）,、HL60,、人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞系（ARPE-19）、人PBMCs細(xì)胞,、RBL-2H3等細(xì)胞,。在以細(xì)胞為模型的研究當(dāng)中，科研人員需要將感興趣的外源物質(zhì)（質(zhì)粒DNA,、siRNA等）地轉(zhuǎn)入細(xì)胞中,，已達(dá)到對目的基因進(jìn)行干擾的目的；但上述提到的這些常用細(xì)胞都是非常難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞,，利用常規(guī)的轉(zhuǎn)染方法很難將外源基因地轉(zhuǎn)入細(xì)胞中,，所以選擇一個合適的細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法對實驗的順利開展就顯得至關(guān)重要了。在之前的糖尿病研究當(dāng)中,，為了能夠?qū)?xì)胞進(jìn)行率的轉(zhuǎn)染，很多科學(xué)家都選擇了Lonza核轉(zhuǎn)染技術(shù)作為細(xì)胞轉(zhuǎn)染的方法和手段,，實現(xiàn)了細(xì)胞的轉(zhuǎn)染,，并取得了滿意的實驗結(jié)果。

參考文獻(xiàn)

1.Marina Cardellini等以冠狀動脈平滑肌細(xì)胞（CASMCs）為模型,，利用Lonza核轉(zhuǎn)染等技術(shù),，研究了Ⅱ型糖尿病患者的動脈粥樣硬化斑塊忠SirT1對TIMP3的表達(dá)調(diào)控作用。實驗結(jié)果顯示在CASMCs中,，抑制SirT1的活性會下調(diào)TIMP3的表達(dá),，同時SirT1的過表達(dá)會上調(diào)TIMP3的表達(dá)。

2.Serve Olieslagers以人單核細(xì)胞為模型,，利用siRNA基因敲除技術(shù)（Lonza核轉(zhuǎn)染系統(tǒng)）,，對SMAD2和SMAD3進(jìn)行敲除，電轉(zhuǎn)染后細(xì)胞成活率>90%,。實驗結(jié)果顯示,，SMAD2和SMAD3不會對TGF-β1介導(dǎo)的單核細(xì)胞遷移能力產(chǎn)生影響。

3.Suseela Srinivasan等以小鼠原代CD4+T細(xì)胞為模型,，利用Lonza核轉(zhuǎn)染（siRNA）等技術(shù),，研究S1P能否通過調(diào)節(jié)HIF1α I.1和CD69的表達(dá)從而降低I型糖尿病人CD4+T細(xì)胞的活性,，進(jìn)而發(fā)掘S1P降低I糖尿病人并發(fā)炎癥的治療潛能。實驗結(jié)果顯示S1P能夠顯著性的上調(diào)HIF1αI.1,，從而使IFN-和CD69的表達(dá)下調(diào),，進(jìn)行降低I型糖尿病人CD4+T細(xì)胞的活性，具有一定的潛在治療能力,。

4.Tian等以小鼠原代主動脈內(nèi)皮細(xì)胞為模型,，利用Lonza核轉(zhuǎn)染（轉(zhuǎn)染效率70%）等技術(shù)，研究Akt信號通路與GW1516的相互作用關(guān)系,。實驗結(jié)果顯示Akt活性的受抑制會降低GW1516在小鼠原代主動脈內(nèi)皮細(xì)胞的活化作用,。

5.Intza Garin等以Hela細(xì)胞為模型，利用Lonza核轉(zhuǎn)染技術(shù),，將2個重要的INF隱性突變基因轉(zhuǎn)入Hela細(xì)胞,，研究突變基因?qū)σ葝u素的合成是否產(chǎn)生影響。實驗結(jié)果顯示,，和轉(zhuǎn)入正常INF基因的細(xì)胞相比,，轉(zhuǎn)入隱性突變基因的細(xì)胞中的胰島素含量分別減少了86%和79%。所以Intza Garin等認(rèn)為具有隱性突變的INF基因的個體會減少胰島素的合成,，從而誘發(fā)新生兒短暫性糖尿病,。

6.Niels Engberding[6]等以斯普拉格-杜勒鼠原代血管平滑肌細(xì)胞（VSMCs）為模型，利用腺病毒感染和Lonza核轉(zhuǎn)染技術(shù)（RNAi）分別對IGF1Rs進(jìn)行過表達(dá)和下調(diào)表達(dá),，研究IGF1Rs表達(dá)量變化對VSMCs的胰島素敏感性產(chǎn)生的影響,。實驗結(jié)果顯示IGF1Rs的過表達(dá)會降低胰島素介導(dǎo)的Akt磷酸化的水平；IGF1Rs的下調(diào)表達(dá)會增強胰島素介導(dǎo)的IRβ的磷酸化水平,，會增強細(xì)胞對葡萄糖的攝取能力,。

7.Jamie Cantrell Stanford等以MIN6細(xì)胞系為模型，利用siRNA技術(shù)（Lonza核轉(zhuǎn)染系統(tǒng)）分別對神經(jīng)鞘氨醇激酶2（SphK2）和Sgpp1（S1P磷酸酶）進(jìn)行基因敲除,，以此研究鞘氨醇激酶（S1P）對葡萄糖刺激的胰島素分泌過程的調(diào)控作用,。實驗結(jié)果表明S1P在葡萄糖刺激的胰島素分泌過程起到非常關(guān)鍵的調(diào)控作用。