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翌圣生物科技（上海）股份有限公司
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GMyc-PCR Mycoplasma Test Kit
GMyc-PCR支原體檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號(hào) | 規(guī)格 | 儲(chǔ)存 | 價(jià)格（元） | *（元） |
GMyc-PCR Mycoplasma Test Kit GMyc-PCR支原體檢測(cè)試劑盒 | 40601ES10 | 10 assays | -20℃ | 1120.00 | 889.00 |
40601ES20 | 20 assays | -20℃ | 1764.00 | 1409.00 |
產(chǎn)品描述
細(xì)胞培養(yǎng)是生命科學(xué)研究中常用的實(shí)驗(yàn)手段,。不像其它常用的實(shí)驗(yàn)方法,，細(xì)胞培養(yǎng)是一個(gè)動(dòng)態(tài)的連續(xù)過程,，細(xì)胞通常會(huì)對(duì)操作失誤或污染物有所反應(yīng),，這些反應(yīng)往往表現(xiàn)出不正常的細(xì)胞狀態(tài)或培養(yǎng)基外觀。如果受到支原體污染時(shí)，細(xì)胞形態(tài)較之無明顯變化，極易被忽視，往往直到污染非常嚴(yán)重時(shí)才能發(fā)現(xiàn),。受污染的細(xì)胞膜上可能有幾百個(gè)支原體，這些支原體競(jìng)爭(zhēng)營(yíng)養(yǎng)并釋放有毒的代謝產(chǎn)物,，嚴(yán)重影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,。
研究表明，至少二十多種支原體能污染細(xì)胞,，其中zui常見的有：口腔支原體（M.orale）,、精氨酸支原體（M.arginini）、豬鼻支原體（M.hyorhinis）,、發(fā)酵支原體（M. fermentans）,、人型支原體（M. hominis）、唾液支原體（M.salivarium）,、肺支原體（M.pulmonis）和梨支原體（M.pirum）等,。培養(yǎng)細(xì)胞的支原體污染率在4%-92%不等，其污染來源包括工作環(huán)境,、操作者本身（一些支原體是人體的正常菌群）,、培養(yǎng)基、血清,、細(xì)胞交叉污染,、實(shí)驗(yàn)器材和用來制備細(xì)胞的原始組織或器官的污染。
確認(rèn)細(xì)胞培養(yǎng)過程中出現(xiàn)問題的潛在原因是一項(xiàng)困難且耗時(shí)的任務(wù),，在細(xì)胞培養(yǎng)中,，任何突然的變化都應(yīng)該被懷疑，同時(shí)良好的試驗(yàn)規(guī)范和定期檢測(cè)支原體污染也十分必要,。支原體檢測(cè)的方法有很多種,，如直接培養(yǎng),、DNA熒光染色、ELISA和PCR法等,。
GMyc-PCR支原體檢測(cè)試劑盒主要采用PCR方法對(duì)各種生物材料（如細(xì)胞培養(yǎng)物,、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分泌物、動(dòng)物血清等）支原體感染的檢測(cè),。它綜合了幾個(gè)優(yōu)勢(shì)：靈敏、特異,、快速并且可以用直接用細(xì)胞培養(yǎng)上清液檢測(cè),。本制品通過PCR方法檢測(cè)培養(yǎng)細(xì)胞等生物材料中的支原體，所用引物為根據(jù)支原體16S-23S rRNA序列保守區(qū)域設(shè)計(jì),，只特異性擴(kuò)增支原體DNA,，檢出靈敏度與特異性均較高。PCR擴(kuò)增及電泳分析只需數(shù)個(gè)小時(shí),，操作方便簡(jiǎn)單,。
產(chǎn)品組分
編號(hào) | 組分 | 產(chǎn)品編號(hào)/規(guī)格 | |
40601ES10 | 40601ES20 | ||
40601-A | GMyc-1st PCR Mix | 250µl | 2×250µl |
40601-B | GMyc-2nd PCR Mix | 250µl | 2×250µl |
40601-C | Positive Control Template注1，2 | 20µl | 20µl |
注1：長(zhǎng)期不用時(shí),，可-80℃冷凍保存,。
注2：PCR反應(yīng)極其靈敏，為防止假陽性,，加樣時(shí),，zui后加陽性對(duì)照。
運(yùn)輸與保存方法
冰袋運(yùn)輸,。-20℃保存。
實(shí)驗(yàn)流程
此PCR反應(yīng)為巢式PCR,，*輪PCR結(jié)束后,，取其反應(yīng)產(chǎn)物為第二輪PCR模板。根據(jù)兩輪PCR產(chǎn)物電泳條帶之有無及片
段大小來分析結(jié)果,。貼壁細(xì)胞培養(yǎng)3-6天后,，直接取其上清液進(jìn)行PCR反應(yīng)。為排除細(xì)胞培養(yǎng)基抑制PCR反應(yīng),，陽性對(duì)照中需加入等量的細(xì)胞上清液,。懸浮細(xì)胞不能作為樣品直接檢測(cè)，會(huì)干擾PCR反應(yīng),，需提取DNA并進(jìn)行PCR,。
*輪PCR：
- 充分融解GMyc-1st PCR Mix，按下列表格配制反應(yīng)液：
試劑 | 實(shí)驗(yàn)組 | 陽性對(duì)照 | 陰性對(duì)照 |
GMyc-1st PCR Mix | 25µl | 25µl | 25µl |
樣品 | 4µl | 4µl |
|
ddH2O | 21µl | 20µl | 25µl |
Positive Control Template注1 |
| 1µl |
|
注1：為防止Positive Control Template污染,，請(qǐng)將實(shí)驗(yàn)組和陰性對(duì)照組加完以后,，zui后再將Positive Control Template加入陽性對(duì)照組,。
2. 按下列條件進(jìn)行PCR反應(yīng)：
94℃ 5 min
94℃ 30 s
55℃ 1 min 30~35 cycles
72℃ 1 min
72℃ 7 min
第二輪PCR：
- 充分融解PCR Mix，按下列表格配制反應(yīng)液：
試劑 | 實(shí)驗(yàn)組 | 陽性對(duì)照 | 陰性對(duì)照 |
GMyc-2nd PCR Mix | 25µl | 25µl | 25µl |
ddH2O | 24µl | 24µl | 24µl |
1st PCR反應(yīng)液 | 1µl | 1µl | 1µl |
2. 按下列條件進(jìn)行PCR反應(yīng)：
94℃ 5 min
94℃ 30 s
55℃ 1 min 30~35 cycles
72℃ 1 min
72℃ 7 min
反應(yīng)結(jié)束后,，取10 μl 的PCR反應(yīng)液（不需要加loading buffer）直接進(jìn)行1.5%瓊脂糖凝膠電泳,，確認(rèn)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物。
推薦使用頻率
新細(xì)胞進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室 | 必檢 |
液氮保存前 | 必檢 |
定期常規(guī) | 每月檢測(cè)一次 |
發(fā)現(xiàn)污染后 | 每周檢測(cè)一次 |
發(fā)現(xiàn)細(xì)胞異常 | 隨時(shí)檢測(cè) |
注意事項(xiàng)
1）使用本試劑前請(qǐng)仔細(xì)閱讀本說明書全文,。
2）操作時(shí)應(yīng)盡量少說話,，因口腔中也含有支原體，可能引起樣品污染,，而造成假陽性,；整個(gè)檢測(cè)過程中，反應(yīng)體系的配制,、樣本處理及加樣,、PCR擴(kuò)增應(yīng)分區(qū)域進(jìn)行，以避免交叉污染,。
3）實(shí)驗(yàn)時(shí),，試劑盒組分中的試劑使用前應(yīng)充分融化并混勻（混勻時(shí)禁止激烈振蕩，只需要進(jìn)行上下倒置多次進(jìn)行混勻）,。
4）反應(yīng)管中加好所有的試劑后,，應(yīng)盡快上PCR儀進(jìn)行擴(kuò)增，以免形成過多的二聚體,。
5）細(xì)胞培養(yǎng)物中含有青霉素和鏈霉素等抗生物素不會(huì)影響本品的檢測(cè)結(jié)果,。如果用戶需要進(jìn)一步提高檢測(cè)靈敏度，建議細(xì)胞在不含青霉素和鏈霉鏈等抗生素中進(jìn)行培養(yǎng)2-3天后送樣檢測(cè),。
6）為了您的健康,，實(shí)驗(yàn)操作時(shí)請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服和帶一次性手套。
附錄
各種支原體擴(kuò)增片段大小
Species | *輪PCR | 第二輪PCR |
M. hyopneumoniae | 681 | 237 |
M. neurolyticum | 501 | 196 |
M. fermentans | 491 | 195 |
M. pulmonis | 477 | 189 |
M. hyorhinis | 448 | 211 |
M. orale | 423 | 179 |
M. capricolum | 415 | 179 |
M. arthritidis | 408 | 157 |
M. salivarium | 403 | 151 |
M. hominis | 370,369 | 147,148 |
M. arginini | 369 | 145 |
U. urealyticum | 482,481 | 154 |
相關(guān)產(chǎn)品
產(chǎn)品編號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 價(jià)格（元） | *（元） |
40601ES10 | GMyc-PCR Mycoplasma Test Kit | 10 assays | 1120.00 | 889.00 |
40601ES20 | GMyc-PCR Mycoplasma Test Kit | 20 assays | 1764.00 | 1409.00 |
40602ES09 | GMyc-1 Antibiotic Solution (100×) | 4×1.5ml | 249.00 | 199.00 |
40602ES12 | GMyc-1 Antibiotic Solution (100×) | 8×1.5ml | 439.00 | 349.00 |
40602ES56 | GMyc-1 Antibiotic Solution (100×) | 40×1.5ml | 1706.00 | 1369.00 |
40603ES09 | GMyc-2 Antibiotic Solution (100×) | 4×1.5ml | 169.00 | 139.00 |
40603ES12 | GMyc-2 Antibiotic Solution (100×) | 8×1.5ml | 289.00 | 239.00 |
40603ES56 | GMyc-2 Antibiotic Solution (100×) | 40×1.5ml | 1149.00 | 919.00 |
40604ES09 | GMyc-3 Antibiotic Solution (100×) | 4×1.5ml | 269.00 | 209.00 |
40604ES12 | GMyc-3 Antibiotic Solution (100×) | 8×1.5ml | 479.00 | 389.00 |
40604ES56 | GMyc-3 Antibiotic Solution (100×) | 40×1.5ml | 1959.00 | 1569.00 |
40605ES02 | GMycSpray 支原體噴霧劑（即用型） | 500ml | 549.00 | 449.00 |
40605ES03 | GMycSpray 支原體噴霧劑（即用型） | 2×500ml | 979.00 | 789.00 |
40605ES08 | GMycSpray 支原體噴霧劑（即用型） | 10×500ml | 4169.00 | 3349.00 |
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