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Hieff MutTM 系列試劑盒是基于Hieff CloneTM快速克隆技術(shù)的定點(diǎn)突變系統(tǒng)，目標(biāo)質(zhì)粒擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)DpnI消化,、Hieff CloneTM重組環(huán)化后直接進(jìn)行轉(zhuǎn)化即可完成定點(diǎn)突變,。本試劑盒由兩個(gè)模塊組成：
HieffTM Pfu DNA Polymerase擴(kuò)增模塊：提供zui高保真度的擴(kuò)增，可擴(kuò)增20 kb以內(nèi)的質(zhì)粒,；擴(kuò)增以指數(shù)方式進(jìn)行,，極大減少了模板使用量，有利于原始甲基化模板的*降解,。
Hieff CloneTM快速克隆模塊：可環(huán)化PCR產(chǎn)物,。
Hieff MutTM Site-Directed Mutagenesis Kit單點(diǎn)突變?cè)噭┖?/span>適用于長(zhǎng)度小于20 kb的任何質(zhì)粒擴(kuò)增，可針對(duì)單堿基,、連續(xù)多堿基,、不連續(xù)雙堿基（相距超過(guò)50 bp）定點(diǎn)突變。
Hieff MutTM Multi Site-Directed Mutagenesis Ki多點(diǎn)突變?cè)噭┖衪可一次性向目標(biāo)質(zhì)粒上3至5個(gè)不連續(xù)位點(diǎn)（相距超過(guò)50bp）同時(shí)引入定點(diǎn)突變,。
使用Hieff MutTM Site-Directed Mutagenesis Kit進(jìn)行單堿基（或連續(xù)多堿基）定點(diǎn)突變
使用Hieff MutTM Site-Directed Mutagenesis Kit進(jìn)行不連續(xù)雙堿基定點(diǎn)突變實(shí)驗(yàn)方案 (兩突變位點(diǎn)相距超過(guò)50 bp）
使用Hieff MutTM Muti Site-Directed Mutagenesis Kit進(jìn)行不連續(xù)雙堿基定點(diǎn)突變實(shí)驗(yàn)方案 (兩突變位點(diǎn)相距超過(guò)50 bp)
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產(chǎn)品名稱(chēng) | 貨號(hào) | 規(guī)格 | 引物對(duì)數(shù) | *（元） |
Hieff MutTM Site-Directed Mutagenesis Kit | 11003ES10 | 10 rxn | 1對(duì) | 720 |
2對(duì) | ||||
Hieff MutTM Multi Site-Directed Mutagenesis Kit | 11004ES10 | 10 rxn | n≤5對(duì) | 1228 |
FAQ
Q1. 請(qǐng)問(wèn)單點(diǎn)突變/多點(diǎn)突變是否都是每個(gè)位點(diǎn)設(shè)計(jì)一對(duì)引物,？是否都包括堿基/氨基酸突變，堿基插入和缺失,？堿基插入/缺失的zui大長(zhǎng)度是多少?是否可以進(jìn)行連續(xù)氨基酸的突變,，氨基酸的數(shù)量限制是多少？
A1：?jiǎn)吸c(diǎn)突變/多點(diǎn)突變是每個(gè)位點(diǎn)設(shè)計(jì)一對(duì)引物,；正反向引物可以包括堿基/氨基酸突變,，堿基插入和缺失，也可以將這些堿基/氨基酸突變/堿基插入和缺失放在一條引物上,；堿基插入/缺失的zui大長(zhǎng)度沒(méi)有限制,，可為任何長(zhǎng)度；可以進(jìn)行連續(xù)氨基酸的突變,，無(wú)特別數(shù)量限制,。
Q2. 引物設(shè)計(jì)的原則是什么？有無(wú)的引物設(shè)計(jì)軟件,，若沒(méi)有,，推薦幾個(gè)好用的引物設(shè)計(jì)軟件。
A2：引物設(shè)計(jì)基本原則是使擴(kuò)增產(chǎn)物末端有同源序列即可,。無(wú)官設(shè)計(jì)軟件,，推薦軟件Primer5，Vector NTI,。
Q3. 本試劑盒可以進(jìn)行多點(diǎn)突變,，能夠同時(shí)進(jìn)行幾個(gè)位點(diǎn)的突變? 突變效率如何?進(jìn)行單點(diǎn)突變的突變效率是多少,？
A3：zui高同時(shí)突變6個(gè)獨(dú)立位點(diǎn)（每個(gè)位點(diǎn)之間相距超過(guò)100bp）。突變效率非常高（單次反應(yīng)500多個(gè)克隆,，陽(yáng)性率超過(guò)95%）
Q4. 該kit不含有感受態(tài)細(xì)胞，推薦的感受態(tài)細(xì)胞是哪些,？
A4：*0,，DH，XL10,。常規(guī)克隆菌都可以,。
Q5. 該試劑盒總共的工作時(shí)間一般多久？
A5：實(shí)驗(yàn)操作時(shí)間3小時(shí)左右,。
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翌圣生物科技（上海）股份有限公司 - 主營(yíng)產(chǎn)品： 抗體,小分子抑制劑,熒光染料,干細(xì)胞培養(yǎng),血清
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