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產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號 | 規(guī)格 | 外觀 | 儲存 | 價格（元） |
TRITC Phalloidin 羅丹明標記鬼筆環(huán)肽 | 40734ES75 | 300T | 液體 | -20℃避光保存 | 489.00 |
TRITC Phalloidin 羅丹明標記鬼筆環(huán)肽 | 40734ES80 | 1mg | 凍干粉 | -20℃避光保存 | 5980.00 |
背景描述
鬼筆環(huán)肽（Phalloidin）是一種來源于毒蕈類鬼筆鵝膏（Amanita phalloides）的環(huán)狀七肽毒素，以高親和力（Kd= 20 nM）選擇性結合于絲狀肌動蛋白F-actin,，而不會與單體肌動蛋白G-actin結合,，通常用來標記組織切片，細胞培養(yǎng)物或無細胞體系中的F-actin,，從而對F-actin進行定性和定量分析,。另外，鬼筆環(huán)肽衍生物也以相近的親和力結合于大小纖維,，無論是動植物來源的肌肉細胞或非肌肉細胞,，按照每一個肌動蛋白亞基約與一個鬼筆環(huán)肽分子的計量比結合。且非特異性結合幾乎可忽略,，染色區(qū)域和非染色區(qū)域辨識度非常明顯,。因此，鬼筆環(huán)肽衍生物特別適合替代肌動蛋白（Actin）抗體進行相關研究,。另外鬼筆環(huán)肽衍生物很小,，直徑約12-15Å,，分子量＜2000 Daltons，未標記肌動蛋白（Actin）的許多生理特性都得以維持,，比如,，同肌動蛋白結合蛋白如肌球蛋白，原肌球蛋白,，DNase I等仍能發(fā)生反應,；鬼筆環(huán)肽標記的纖維絲仍可穿透固相肌球蛋白基質；以及甘油抽提的肌纖維標記后仍可收縮等,。
鬼筆環(huán)肽（Phalloidin）的結合阻止絲狀肌動蛋白（微絲）的解離,，穩(wěn)定微絲結構，從而破壞微絲的聚合-去聚合的動態(tài)平衡,。此特性使得肌動蛋白聚合發(fā)生的臨界濃度（CC）降至＜1µg/mL,，因此，可用作一種聚合促進劑,。此外,，鬼筆環(huán)肽還可抑制F-actin的ATP水解活性。
本品為TRITC（四甲基異硫氰酸羅丹明）標記的鬼筆環(huán)肽,，染色反應特異性強,，對比性高，具有比Actin抗體更好的染色效果,，適合用作F-actin的定性和定量檢測,。另外，經(jīng)本品結合后的F-actin仍能維持actin自身具有的許多生物學特性,。且本品的結合沒有物種差異性,，適用性廣泛。
我司分別提供凍干粉形式（貨號：40734ES80）和儲存液形式（貨號：40734ES75,，濃度為20µM）的TRITC標記鬼筆環(huán)肽,，用戶根據(jù)自身需求選擇,。建議使用濃度為80~200nM,。
產(chǎn)品性質
分子式（Molecular Formula） | C60H70N12O13S2 |
分子量（Molecular Weight） | 1231.4 |
zui大激發(fā)/發(fā)射波長（Ex/Em） | 540～546/565～575nm |
多肽序列（Sequence） | TRITC-bicyclic(Ala-DThr-Cys-cis-4-hydroxy-Pro-Ala-2-mercapto-Trp-4-hydroxy-5-amino-Leu)(S-3 to 6) |
外觀（Appearance） | 紫色粉末（凍干粉） |
溶解性（Solubility） | 溶于DMSO、DMF,、甲醇或者乙腈水溶液（20%） |
運輸與保存方法
冰袋運輸,。-20℃避光干燥保存， 1年有效,。
注意事項
{C}1） {C}鬼筆環(huán)肽具有毒性,，需小心操作（對人的半數(shù)致死劑量LD50約2mg/kg）。
{C}2） {C}為了您的安全和健康,，請穿實驗服并戴一次性手套操作,。
需要自備材料
{C}1） {C}（可選）甲醇
{C}2） {C}1×PBS緩沖液, pH 7.4, 細胞培養(yǎng)級別（貨號：60145ES76）
{C}3） {C}固定液4%多聚甲醛（溶于PBS緩沖液）（貨號：36314ES60）
{C}4） {C}丙酮或透化液0.5% Triton X-100（溶于PBS緩沖液）
{C}5） {C}Fluoromount-GTM 水溶性封片劑（不含DAPI）（貨號：36307ES08），DAPI（貨號：40727ES10）
{C}6） {C}（可選）DAPI Fluoromount-GTM 水溶性封片劑（含DAPI）（貨號：36307ES08）
{C}7） {C}（可選）BSA，標準級別（貨號：36101ES25）
{C}8） {C}載玻片和蓋玻片
{C}9） {C}蓋玻片周圍密封液（如透明指甲油）
{C}10） {C}組裝有TRITC激發(fā)/發(fā)射濾片,，以及DAPI激發(fā)/發(fā)射濾片的熒光顯微鏡或共聚焦顯微鏡
操作步驟
{C}1. {C}工作液準備
{C}1） {C}對于TRITC標記鬼筆環(huán)肽（貨號：40734ES75,，300T）
本品以溶于甲醇的20µM儲存液形式提供，總量為300µl,。按照100 nM的工作液濃度來換算,，可制備總量為60 ml的工作液。建議收到產(chǎn)品后,，根據(jù)單次使用量,，對母液進行小量分裝，-20℃避光凍存,，一年穩(wěn)定,。
開始實驗前，使用1×PBS緩沖液稀釋儲存液到需要的工作濃度,。推薦工作濃度為：80~200nM,。工作液現(xiàn)配現(xiàn)用。
{C}2） {C}對于TRITC標記鬼筆環(huán)肽（貨號：40735ES80,，1mg）
本品以凍干粉形式提供,，分子量為1231.4，總量為1mg,?？上扔眉状蓟蛘?/span>DMSO充分溶解配制成20~100µM的儲存液。如,，加入8.1208ml甲醇到1mg鬼筆環(huán)肽即得到100µM等量的儲存液,，根據(jù)單次使用量，進行小量分裝,，-20℃避光凍存,，一年穩(wěn)定。
開始實驗前,，使用1×PBS緩沖液稀釋儲存液到需要的工作濃度,。推薦工作濃度為：80~200nM。工作液現(xiàn)配現(xiàn)用,。
{C}2. {C}染色步驟
{C}1） {C}細胞爬片生長24h,，使其密度達到50%匯合度。
{C}2） {C}吸掉培養(yǎng)液,，37℃預熱的1×PBS（pH 7.4）清洗細胞2次,。
{C}3） {C}使用溶于PBS的4%甲醛溶液進行細胞固定，室溫固定10min,。
注意：避免固定劑中含有甲醇成分,，因為甲醇在固定過程中可能破壞肌動蛋白,。
{C}4） {C}室溫條件下，用PBS清洗細胞2~3次,，每次10min,。
{C}5） {C}室溫條件下，用丙酮（≤-20℃）脫水或者用0.5% Triton X-100溶液透化處理5min,。
{C}6） {C}室溫條件下,，用PBS清洗細胞2~3次，每次10min,。
{C}7） {C}取200µl配制好的TRITC標記鬼筆環(huán)肽工作液,，覆蓋住蓋玻片上的細胞，室溫避光孵育30min（通常情況下,，4℃~37℃孵育皆可）,。
注意：為了降低背景，可于TRITC標記的鬼筆環(huán)肽工作液內加入1% BSA,；另外,，孵育過程中為了避免溶液揮發(fā)，可將蓋玻片轉移到一個密封的容器內,。
{C}8） {C}用PBS清洗蓋玻片3次,，每次5min。
{C}9） {C}使用200µl DAPI溶液（濃度：100 nM）對細胞核進行復染,，約30s,。
{C}10） {C}用PBS清洗蓋玻片，然后倒置在已經(jīng)滴有一滴Fluoromount-GTM 水溶性封片劑的載玻片上,。使用紙巾輕輕檫掉多余封片劑,，然后用指甲油*封片。此法制備的標本玻片可置于4℃避光保存,，通常6個月內可繼續(xù)做F-actin染色分析,。
注意：也可以直接使用含有DAPI的抗熒光淬滅封片劑（貨號：36308ES11）合并步驟9）10），簡化步驟,。
{C}11） {C}熒光顯微鏡或者共聚焦顯微鏡下進行熒光觀察,，選擇TRITC激發(fā)/發(fā)射濾片（Ex/Em=545/570nm）和DAPI激發(fā)/發(fā)射濾片（Ex/Em=364/454nm）。
相關產(chǎn)品
產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 價格（元） |
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40737ES75 | iFluor™ 555 phalloidin iFluor™ 555標記鬼筆環(huán)肽（橘色） | 300T | 1689.00 |
40762ES75 | iFluor™ 647 phalloidin iFluor™ 647標記鬼筆環(huán)肽（遠紅） | 300T | 1689.00 |
