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上新 | 熱穩(wěn)定,、低宿主殘留的RNase HII來咯！
圖1. RNase HII反應(yīng)原理示意圖
RNase HII應(yīng)用
依賴于Rnase HII的PCR (rhPCR)
rhPCR引物是在高度保守的目標(biāo)寡核苷酸序列區(qū)域內(nèi)插入1段RNA堿基序列，形成DNA-RNA-DNA的堿基序列,，并且該引物的3'-末端被化學(xué)基團(tuán)封阻,，該引物未切割時(shí)無法正常延伸。Rnase HII可以特異性地水解DNA-rN-DNA/DNA雜合鏈中的RNA,，但不能水解單鏈或雙鏈DNA或RNA中的磷酸二酯鍵,。因此只有當(dāng)封閉引物與靶DNA互補(bǔ)時(shí)，Rnase HII才能使DNA-rN-DNA/DNA雜合鏈在RNA堿基的5'-側(cè)發(fā)生裂解,，留下具有3'-羥基的DNA寡核苷酸,，該3'-羥基DNA寡核苷酸能夠起到引物的作用,，從而允許引物延伸。rhPCR利用Rnase HII的特異性作用,，實(shí)現(xiàn)了對DNA-rN-DNA/DNA雜合鏈的特異水解,，從而實(shí)現(xiàn)引物的準(zhǔn)確延伸，提升了反應(yīng)的特異性,。
圖2. rhPCR原理圖[1]
環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)(LAMP)
將RNase HII應(yīng)用于LAMP擴(kuò)增體系后,，能有效解決LAMP技術(shù)的假陽性問題,，為LAMP技術(shù)更加廣泛的應(yīng)用于臨床診斷,。如圖3所示，利用Rnase HII引物激活的LAMP方法(PA-LAMP),，當(dāng)引物與靶ssDNA配對時(shí),，Rnase HII酶特異性切割引物上的RNA，激活引物,，從而允許引物延伸,，實(shí)現(xiàn)特異性擴(kuò)增，有效減少體系中的假陽性,。
圖3. PA-LAMP原理示意圖[2]
翌圣RNase HⅡ
部分?jǐn)?shù)據(jù)展示
E. coli基因組DNA殘留< 0.01copies/1 U
圖4. E. coli基因組DNA殘留檢測
95℃耐熱性測試
對RNase H II (Cat#14539ES)進(jìn)行95℃加熱0~45 min后，測試RNase HII的酶活結(jié)果,，結(jié)果表明翌圣RNase HII加熱45 min后,，酶活幾乎沒有損失。
圖5. 95℃耐熱測試
無核酸外切酶,、切口酶,、RNase殘留
圖6. 核酸外切酶,、切口酶、RNase殘留檢測結(jié)果
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