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在生物醫(yī)藥和基因工程領(lǐng)域,,質(zhì)粒作為重要的工具載體,,扮演著不可替代的角色。從基因克隆到表達(dá)載體構(gòu)建,,再到基因治療和疫苗開(kāi)發(fā),,質(zhì)粒的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性直接決定了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的成功與否。為了確保這些關(guān)鍵環(huán)節(jié) ,,質(zhì)粒測(cè)序的重要性不言而喻,。
質(zhì)粒測(cè)序技術(shù)大比拼
當(dāng)前主流的質(zhì)粒測(cè)序技術(shù)各有千秋,,不同的質(zhì)粒測(cè)序方法各有優(yōu)缺點(diǎn),適用于不同的實(shí)驗(yàn)需求和場(chǎng)景,。
質(zhì)粒測(cè)序(一代測(cè)序)是指對(duì)多克隆位點(diǎn)及插入片段這個(gè)區(qū)域進(jìn)行測(cè)序,,而默認(rèn)質(zhì)粒的骨架區(qū)都是符合預(yù)期的序列。
全質(zhì)粒測(cè)序是指對(duì)質(zhì)粒全部序列進(jìn)行測(cè)序,,覆蓋質(zhì)粒骨架(如復(fù)制起點(diǎn),、抗性基因,、多克隆位點(diǎn))和插入片段,,確保質(zhì)粒構(gòu)建的準(zhǔn)確性與完整性,及實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的嚴(yán)謹(jǐn)和完整,?;跍y(cè)序平臺(tái)的不同,主要有二代高通量測(cè)序和三代單分子測(cè)序,,兩者在技術(shù)原理,、應(yīng)用場(chǎng)景及成本效率上存在顯著差異。
不同測(cè)序技術(shù)如何選擇
選擇合適的質(zhì)粒全測(cè)序解決方案需要根據(jù)具體需求(精度vs.結(jié)構(gòu)解析)和實(shí)驗(yàn)條件(預(yù)算,、設(shè)備)來(lái)決定,,根據(jù)測(cè)序目的、預(yù)算和樣本特性選擇合適的技術(shù)平臺(tái),,必要時(shí)可結(jié)合兩者(如用三代測(cè)序組裝骨架,,二代測(cè)序校正突變)。隨著技術(shù)成本下降和便攜化發(fā)展,,實(shí)時(shí),、長(zhǎng)讀長(zhǎng)測(cè)序?qū)⒊蔀橘|(zhì)粒分析的主流選擇,。
常規(guī)驗(yàn)證: 一代或二代測(cè)序。
復(fù)雜質(zhì)粒:必須使用三代測(cè)序,。
科研深度分析:聯(lián)用二代和三代提升準(zhǔn)確性。
質(zhì)粒全測(cè)序產(chǎn)品解決方案
Hieff NGS® PreMix Fast Tagment DNA Library Prep Kit for Illumina® (for1 ng)(Cat#17214)
建庫(kù)流程:質(zhì)粒-轉(zhuǎn)座酶片段化-文庫(kù)擴(kuò)增-純化(約1.2 h)
產(chǎn)品特色:
組分精簡(jiǎn),,擴(kuò)增酶和index預(yù)混,,減少手工操作時(shí)間;
板式包裝,,兼容手工建庫(kù)和自動(dòng)化,;
嚴(yán)格的批次性能與穩(wěn)定性質(zhì)控。
Hieff® DNA Library Prep Kit for ONT(Cat#13301)
建庫(kù)流程:質(zhì)粒-線性化-末修加A-barcode連接-純化-接頭連接-純化(約2 h)
產(chǎn)品特色:
操作簡(jiǎn)便:末端修復(fù),、加A尾一步完成,,產(chǎn)物無(wú)需純化,可直接進(jìn)行Barcode接頭連接
兼容廣泛:可兼容動(dòng)物,、植物,、微生物等多種樣本,;兼容gDNA和擴(kuò)增子樣本
數(shù)據(jù)表現(xiàn)優(yōu)異:文庫(kù)產(chǎn)出高、測(cè)序數(shù)據(jù)質(zhì)量好
翌圣生物匠心研發(fā)多款適配質(zhì)粒測(cè)序的產(chǎn)品滿足眾多客戶的不同需求,,助力科學(xué)研究,、臨床檢測(cè)更精準(zhǔn)、更快捷,!
質(zhì)粒測(cè)序文庫(kù)構(gòu)建產(chǎn)品選擇指南
類型 | 貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 備注 |
質(zhì)粒提取 | 18542ES | MolPure® Magnetic Endo-free Plasmid Mini Kit 磁珠法去內(nèi)毒素質(zhì)粒小量提取試劑盒 | 1-5 mL菌液提取 |
18543ES | MolPure® Magnetic Endo-free Plasmid med Kit 磁珠法質(zhì)粒去內(nèi)毒素中量提取試劑盒 | 5~20 mL細(xì)菌培養(yǎng)液中提取高達(dá)90 µg的去內(nèi)毒素質(zhì)粒DNA | |
二代文庫(kù)構(gòu)建 | 17214ES | Hieff NGS® PreMix Fast Tagment DNA Library Prep Kit for Illumina® (for1 ng) | 轉(zhuǎn)座酶法建庫(kù) |
線性化 | 15003ES | BamH I | EcoR I,、BamHI 、Xho I 等,,這些酶可以在特定序列處切割DNA,。Sma I或XbaI,如果需要在多克隆位點(diǎn)(MCS)外切割,。 |
15033ES | Xba I | ||
15012ES | Hind III | ||
三代文庫(kù)構(gòu)建 | 13301 ES | Hieff® DNA Library Prep Kit for ONT(Cat#13301) | ONT平臺(tái)DNA建庫(kù),,標(biāo)簽連接法 |
配套產(chǎn)品 | 12601ES | Hieff NGS® DNA Selection Beads分選磁珠(替代AMPure XP Beads) | 磁珠 |
12643ES | dsDNA BR Assay Kit | 質(zhì)粒定量 | |
12642ES | 1×dsDNA HS Assay Kit | 文庫(kù)定量 | |
12416ES | Hieff NGS® Tagment Index Kit for Illumina® | 接頭引物,Illumina平臺(tái) |