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E. coli RNase H（E. coli 核糖核酸酶 H）是一種能夠特異性降解RNA-DNA雜交鏈中RNA部分的酶，在DNA復制,、修復和轉錄等過程中發(fā)揮重要作用,。它通過切割RNA鏈，確保DNA模板的完整性和穩(wěn)定性,，因此在分子生物學實驗中被廣泛應用,，例如cDNA合成、rRNA去除和RNA干擾研究,。然而,，RNase H 在使用過程中也存在一些缺陷：1）它可能對單鏈RNA或DNA產生非特異性切割，影響實驗結果的準確性,；2）其熱穩(wěn)定性較差,，難以在高溫條件下保持活性，因此不適用于高溫逆轉錄,、PCR等需要高溫環(huán)境的實驗,。這些局限性促使研究人員開發(fā)熱穩(wěn)定RNase H，以拓展其應用范圍并提高實驗效率,。
圖1.RNase H作用機理
源自Thermus thermophilus的Thermostable RNase H（熱穩(wěn)定核糖核酸酶H）是E. coli RNase H的同源物,，在功能上表現(xiàn)出相似的核糖核酸內切酶特性。它能夠精準識別并高效切割 RNA:DNA雜交體中的RNA鏈磷酸二酯鍵,，同時確保DNA鏈的完整性,。通過對蛋白結構的深入分析發(fā)現(xiàn)，盡管T. thermophilus RNase H的整體穩(wěn)定性分布與E. coli RNase H具有一定相似性,，但前者在整體穩(wěn)定性以及殘基局部穩(wěn)定性方面均表現(xiàn)出顯著提升,。Thermostable RNase H的最佳活性溫度在65℃以上，更高的反應溫度能夠顯著提升反應的特異性和效率,，減少非特異性切割,。這一特性使其在分子生物學實驗中展現(xiàn)出廣泛的應用潛力，例如：
rRNA去除,；
mRNA加帽率檢測,；
去除雜交到poly(dT)上的mRNA poly(A)；
cDNA第二鏈合成中去除mRNA,；
提升高溫逆轉錄,、等溫擴增、PCR實驗的擴增效率,。
圖2.Thermostable RNase H和E. coli RNase H三維結構圖[1]
Thermostable RNase H常用于病原菌檢測實驗中,，如在宏基因組測序（mNGS）和病原靶向測序（tNGS）中常用于rRNA去除實驗，若分子酶中存在宿主或其他背景菌核酸殘留,，可能會嚴重影響檢測結果的準確性,。為此,，翌圣生物基于UCF.ME®超潔凈工藝技術推出UCF.ME® Thermostable RNase H (Cat#14545)，該產品由UCF.ME®超潔凈分子酶生產基地生產,，從物料篩選到環(huán)境控制,，從工藝優(yōu)化到質量檢測，每一環(huán)節(jié)均經過嚴格把控,，確保極低的背景菌gDNA殘留和核酸酶殘留,，為實驗結果的準確性、可靠性和重復性提供了強有力的保障,。
產品優(yōu)勢
活性強,、批間一致性好；
極低宿主 gDNA 殘留：＜0.02 Copies/U,；
無核酸外切酶,、切口酶、RNase 酶殘留,；
優(yōu)異的穩(wěn)定性：在4℃處理32天、25℃處理16天和37℃處理7天后,，酶活性無明顯下降,。
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產品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 | 目錄價 | 活動價 |
UCF.ME® Thermostable RNase H | 14545ES72 | 250 U | 759元 | 0元 |
活動細則：
1,、活動時間：2025年3月5日-2025年3月31日,；
2、活動名額有限,，每位客戶限一套,。
性能展示
翌圣UCF.ME® Thermostable RNase H (Cat#14545)
活性強、批間一致性好
使用3批次UCF.ME® Thermostable RNase H分別與RNA:DNA 底物進行孵育,，并通過瓊脂糖凝膠電泳分析譜帶變化,。實驗結果表明，翌圣0.05 U的UCF.ME® Thermostable RNase H能有效切割20 pmol RNA:DNA底物中的RNA,，且批間一致性優(yōu)異,，展現(xiàn)了產品的高穩(wěn)定性和可靠性,。
圖3.UCF.ME® Thermostable RNase H活性檢測結果
注：反應條件：50℃ 20min；RNA:DNA底物-20 pmol
宿主gDNA殘留低：＜0.02 Copies/U
通過對不同批次的UCF.ME® Thermostable RNase H進行宿主（E.coli）gDNA殘留檢測,，結果顯示,，3批次產品的宿主gDNA殘留量均遠低于0.02 copies/U，確保了產品的高純度和實驗的可靠性,。
圖4.UCF.ME® Thermostable RNase H宿主gDNA殘留結果
無核酸外切酶,、切口酶、RNase酶殘留
將25 U UCF.ME® Thermostable RNase H分別與核酸底物孵育,，并通過瓊脂糖凝膠電泳分析譜帶變化,。實驗結果表明，翌圣的3個批次UCF.ME® Thermostable RNase H均未檢測到核酸外切酶,、切口酶或RNase殘留,，為實驗結果的準確性和可靠性提供了有力保障。
圖5.UCF.ME® Thermostable RNase H核酸外切酶,、切口酶,、RNase殘留檢測結果
穩(wěn)定性好
將UCF.ME® Thermostable RNase H分別置于4℃處理32天、25℃處理16天和37℃處理7天后,，測定其酶活,。結果顯示，酶活均無明顯下降,，充分證明了翌圣UCF.ME® Thermostable RNase H在寬溫度范圍內具有優(yōu)異的穩(wěn)定性,，能夠滿足不同實驗條件的長期存儲和使用需求。
圖6.UCF.ME® Thermostable RNase H加速穩(wěn)定性結果
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來源 | 產品名稱 | 貨號 |
T. thermophilus | UCF.ME® Thermostable RNase H | 14545ES |
E. coli | RNase H | 12906ES |
參考文獻：
[1] Hollien J, Marqusee S. Structural distribution of stability in a thermophilic enzyme[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 1999, 96(24): 13674-13678.
[2] Wolf E J , Dai N , Chan S H .Selective Characterization of mRNA 5′End-Capping by DNA Probe-Directed Enrichment with Site-Specific Endoribonucleases[J].[2025-03-03].
[3] Gu H , Sun Y H , Li X Z .Novel rRNA-depletion methods for total RNA sequencing and ribosome profiling developed for avian species[J].Poultry Science, 2021, 100(7):101321. DOI:10.1016/j.psj.2021.101321.
