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RNase A
RNaseA,，即核糖核酸酶A，是一種內(nèi)切核酸酶,，能夠特異性地降解RNA分子,。它能夠在嘧啶殘基的3’末端切割單鏈RNA，形成具有3’-末端嘧啶-3’-磷酸酯的寡核糖核苷酸,。通過(guò)RNaseA的切割作用,，相鄰的嘧啶核苷酸會(huì)被釋放，從而實(shí)現(xiàn)RNA分子的降解,。
在DNA和質(zhì)粒提取過(guò)程中,，RNAseA起到了至關(guān)重要的作用。由于一些實(shí)驗(yàn)和應(yīng)用中需要獲得純凈的DNA樣本或質(zhì)粒樣本,，而RNA的存在可能會(huì)干擾后續(xù)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果,，因此，在提取DNA時(shí),，通常會(huì)添加RNaseA來(lái)降解樣品中的RNA分子,。
RNaseA對(duì)DNA分子并不具有降解作用。DNA分子具有穩(wěn)定的雙鏈結(jié)構(gòu),，不容易被酶降解,。因此，在使用RNaseA時(shí),，可以確保DNA分子的完整性和濃度不受影響,。這一特性使得RNaseA成為DNA提取過(guò)程中的工具。
在使用RNaseA時(shí),，也需要注意酶的濃度和反應(yīng)時(shí)間,。過(guò)高的酶濃度或過(guò)長(zhǎng)的反應(yīng)時(shí)間可能會(huì)導(dǎo)致DNA分子也被部分降解，從而影響提取得到的DNA的完整性和濃度,。因此,，在使用RNaseA時(shí),，需要根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮蜆悠诽匦赃M(jìn)行優(yōu)化,，以確保得到高質(zhì)量的純凈DNA樣本,。
在使用RNaseA時(shí),，需要注意對(duì)RNA相關(guān)實(shí)驗(yàn)的污染，做RNA相關(guān)實(shí)驗(yàn)時(shí),，需要使用Surface RNase Remover (with Spray Bottle) 固相RNase清除劑（含噴霧瓶）（10609ES）清除RNase,，從而創(chuàng)造潔凈的RNA工作環(huán)境。
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號(hào) | 規(guī)格 | 產(chǎn)品特點(diǎn) |
RNase A(10 mg/mL) | 10405ES | 1mL | 來(lái)源于牛胰,，溶液形式提供,，濃度為10 mg/mL，活性≥60 Kunitz U/mg |
RNase A(100 mg/mL) | 10406ES | 1 mL | 來(lái)源于牛胰,，溶液形式提供,，濃度為10 mg/mL，活性≥60 Kunitz U/mg |
Ribonuclease A(RNase A),from bovine pancreas | 10407ES | 100mg/1g | 來(lái)源于牛胰,，粉末形式提供,，濃度為10 mg/mL，活性≥60 Kunitz U/mg |
DNase I
DNase I,，即Deoxyribonuclease I，中文名稱為脫氧核糖核酸酶I,，是一種可以消化單鏈或雙鏈DNA產(chǎn)生單脫氧核苷酸或單鏈或雙鏈的寡脫氧核苷酸的核酸內(nèi)切酶,。DNase I水解單鏈或雙鏈DNA后的產(chǎn)物，5'端為磷酸基團(tuán),，3'端為羥基,。雖然DNase I裂解通常被認(rèn)為是非特異性裂解，但DNase I更有可能作用于某些序列片段,，如小溝區(qū),，并且更容易發(fā)生嘌呤-嘧啶序列的裂解。然而,，當(dāng)DNase I作用于異質(zhì)dsDNA時(shí),，所有四個(gè)堿基都將被切開，對(duì)特定堿基的影響不會(huì)超過(guò)其他堿基的3倍,。
不含RNase：DNase I不含有RNase活性,，因此可以用于各種RNA樣品的處理，而不會(huì)降解RNA,。
鈣離子依賴性：DNase I的活性依賴于鈣離子,，同時(shí)它也能被鎂離子或二價(jià)錳離子激活。在不同的金屬離子存在下,，DNase I的剪切特性也會(huì)有所不同,。
失活條件：DNase I可以通過(guò)加入EDTA至終濃度為2.5mM后，在65℃加熱10分鐘使其失活,。此外,，酚氯仿抽提也可以使DNase I失活。
1,、核酸提取中制備不含DNA的RNA樣品：
在RNA提取過(guò)程中,，DNase I可用于消化掉提取核酸中所殘留的DNA成分，從而得到高純度的RNA產(chǎn)物,。這對(duì)于后續(xù)如mRNA表達(dá)量分析,、轉(zhuǎn)錄組分析等實(shí)驗(yàn)至關(guān)重要。
2,、RT-PCR反應(yīng)前去除DNA污染：
在進(jìn)行RT-PCR反應(yīng)前,，RNA樣品中可能存在的基因組DNA等DNA污染會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。DNase I可以有效地去除這些DNA污染,，確保RT-PCR反應(yīng)的準(zhǔn)確性,。
3、體外轉(zhuǎn)錄后去除DNA模板：
在體外轉(zhuǎn)錄實(shí)驗(yàn)中,，如使用T7,、T3、SP6等RNA聚合酶進(jìn)行RNA合成時(shí),，合成后的RNA可能會(huì)有DNA殘留,。DNase I可用于去除這些模板DNA殘留，特別是在mRNA疫苗生產(chǎn)制作等需要高純度RNA的場(chǎng)合,。
4,、DNase I足跡實(shí)驗(yàn)：
DNase I足跡實(shí)驗(yàn)（DNase I footprinting）是一種研究DNA-蛋白質(zhì)相互作用的方法。通過(guò)DNase I對(duì)DNA的切割作用,，可以揭示出與蛋白質(zhì)結(jié)合的DNA區(qū)域,，從而了解DNA與蛋白質(zhì)之間的相互作用關(guān)系。
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號(hào) | 規(guī)格 | 產(chǎn)品特點(diǎn) |
Deoxyribonuclease I(DNase I) from bovine pancreas | 10607ES | 15 KU/10×15KU | 含氯化鈣的凍干粉形式,，酶活力≥2000 Kunitz Units/mg蛋白,。 |
Deoxyribonuclease I(DNase I) from bovine pancreas | 10608ES | 25 mg/100mg/1g | 粉末形式，酶活力≥2000 Kunitz Units/mg蛋白 |
