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Polybrene，也稱為Hexadimethrine Bromide,，是一種多聚陽離子聚合物,，廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域。它主要用作基因轉(zhuǎn)染增強(qiáng)劑,，尤其是在逆轉(zhuǎn)錄病毒和慢病毒介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)染中,。Polybrene的作用機(jī)理可能是通過中和細(xì)胞表面唾液酸與病毒顆粒之間的靜電排斥,，從而促進(jìn)病毒顆粒與細(xì)胞的吸附作用,。
圖1.聚凝胺(Polybrene)結(jié)構(gòu)式
在病毒介導(dǎo)的細(xì)胞轉(zhuǎn)染中，它能顯著提高慢病毒和腺病毒等對(duì)哺乳動(dòng)物細(xì)胞的感染效率,。此外,，Polybrene在DNA轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)中也能增強(qiáng)脂質(zhì)體的轉(zhuǎn)染效率，為基因功能研究和基因治療提供支持,。它還作為一種抗肝素劑,，用于中和紅細(xì)胞表面的負(fù)電荷，制備非特異性凝集的紅細(xì)胞,。在蛋白測序領(lǐng)域,，Polybrene通過增加多肽的降解和提高PVDF膜的親水性，有助于降低測序過程中多肽的機(jī)械損傷,，從而改善測序結(jié)果,。這些多樣化的應(yīng)用使Polybrene成為實(shí)驗(yàn)室中的工具。
Polybrene的使用濃度需根據(jù)細(xì)胞類型優(yōu)化,，一般建議在2至10μg/mL,，常用濃度為5至8μg/mL。使用前,，應(yīng)查閱文獻(xiàn)或進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)以確定濃度,。鑒于Polybrene對(duì)某些細(xì)胞株可能有毒,，尤其是分化的神經(jīng)元和樹突狀細(xì)胞，使用前應(yīng)進(jìn)行毒性測試,。此外,，由于Polybrene可能對(duì)人體有害，操作時(shí)須穿戴適當(dāng)?shù)姆雷o(hù)服和手套,，避免直接接觸和吸入,。關(guān)于儲(chǔ)存,，Polybrene在-20℃下建議分裝保存,，以保持活性長達(dá)兩年以上，避免多次凍融。
產(chǎn)品應(yīng)用介紹
Polybrene在慢病毒感染中的應(yīng)用
細(xì)胞接種
病毒準(zhǔn)備
第二天,，從-80℃冰箱取出慢病毒,，置于冰浴中融化。根據(jù)文獻(xiàn)或預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果,，使用新鮮培養(yǎng)基將病毒稀釋至適當(dāng)?shù)腗OI濃度,。切記輕柔混勻,，避免使用振蕩器以免破壞病毒粒子,。
注：MOI值=病毒滴度（TU/mL）×病毒體積（mL）/細(xì)胞個(gè)數(shù)
感染過程
將細(xì)胞原有的培養(yǎng)基吸去，加入預(yù)先稀釋好的病毒液,、培養(yǎng)基和Polybrene輕輕搖勻，并在37℃下培養(yǎng)過夜,。制備混合液時(shí),，請(qǐng)按以下順序：首先加入預(yù)熱至37°C的培養(yǎng)基,，接著加入病毒液混勻,，最后加入Polybrene至所需終濃度（通常為2-10μg/ml,，具體濃度可能因細(xì)胞類型而異，請(qǐng)查閱相關(guān)文獻(xiàn)）,。
注：對(duì)于某些細(xì)胞如Jurkat,、kasumi,、NB4,、H929、GBC-SD、MCF-7等,，以及大部分原代細(xì)胞,，通常不建議添加Polybrene,。
換液培養(yǎng)
感染48小時(shí)后，將含病毒的培養(yǎng)基吸除,，并替換為新鮮培養(yǎng)基,。若感染后24h觀察細(xì)胞生長受到抑制，也可在24h更換新的培養(yǎng)基,。
檢測分析
繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞24至48小時(shí),，然后根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求收集細(xì)胞，以檢測目的蛋白的表達(dá)情況,。
穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株篩選（可選）
確定目的蛋白成功表達(dá)后,，可根據(jù)載體抗性（puro、neo,、Hygromycin B）,，加入對(duì)應(yīng)的篩選藥物；初次構(gòu)建,，需要先對(duì)目的細(xì)胞進(jìn)行最佳篩選藥物濃度測試,，確定篩選藥物添加量；可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求,，進(jìn)行pool或minipool篩選,。
翌圣生物的聚凝胺（Polybrene）以其品質(zhì)，已經(jīng)成為科研領(lǐng)域中的工具,。自推出以來,，它已經(jīng)助力科研人員發(fā)表了68篇科研論文，這些論文的總影響因子累計(jì)達(dá)到545.607,。這些成果發(fā)表在包括《Cell Discovery》,、《Cell Metabolism》和《Journal of Extracellular Vesicles》等期刊上。這一數(shù)據(jù)不僅證明了聚凝胺在科研中的重要地位,，也反映了其在提升實(shí)驗(yàn)效率和成功率方面的顯著作用,。
部分參考文獻(xiàn)（使用翌圣Polybrene發(fā)表）
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產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 產(chǎn)品貨號(hào) |
Hieff Trans®Polybrene(hexadimethrine bromide) 聚凝胺(10 mg/mL) | 500 μL/5×500 μL | 40804ES76/40804ES86 |
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