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隨著蛋白質(zhì)科學(xué)的飛速發(fā)展，蛋白純化技術(shù)在生物研究領(lǐng)域和生物技術(shù)工業(yè)中的重要性日益凸顯,。這一核心技術(shù)涉及利用基因工程方法,，將目標(biāo)蛋白的編碼信息整合入宿主細(xì)胞，從而誘導(dǎo)它們高效地生產(chǎn)所需蛋白,。隨后，通過(guò)一系列精細(xì)的體外操作步驟實(shí)現(xiàn)對(duì)蛋白質(zhì)的高純度提取,。蛋白純化使得科學(xué)家能分離出單一類型的蛋白質(zhì),，這對(duì)于深入研究蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能,、開(kāi)發(fā)新藥,、進(jìn)行疾病診斷以及推動(dòng)生物技術(shù)的應(yīng)用至關(guān)重要,。該技術(shù)不僅確保了科學(xué)實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性,，還為生命科學(xué)領(lǐng)域的發(fā)展提供了持續(xù)的動(dòng)力,。
圖1.親和層析原理圖[1]
在蛋白質(zhì)工程領(lǐng)域,，融合標(biāo)簽作為一種強(qiáng)大的工具,，通過(guò)與目標(biāo)蛋白結(jié)合以促進(jìn)實(shí)現(xiàn)各種實(shí)驗(yàn)?zāi)康?，常?jiàn)融合標(biāo)簽的功能可參考下表。然而,，一旦這些標(biāo)簽在完成其初始輔助功能后繼續(xù)殘留在融合蛋白上,，可能會(huì)對(duì)后續(xù)實(shí)驗(yàn)造成不良影響,，如干擾動(dòng)物免疫實(shí)驗(yàn)或影響蛋白的生物學(xué)活性,。因此，去除這些不再需要的融合標(biāo)簽變得至關(guān)重要,，以確保蛋白質(zhì)的正常功能和實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性。
表1.常見(jiàn)融合標(biāo)簽功能及酶切手段介紹
融合標(biāo)簽 | 大小(KD) | 功能 | 常見(jiàn)酶切手段 |
His | 0.84 | 有利純化,，能純化可溶性/包涵體蛋白。 | TEV蛋白酶 |
Flag | 1.01 | 融合FLAG標(biāo)簽的目的蛋白，可以被抗FLAG的抗體識(shí)別,，從而通過(guò)Western Blot、ELISA等方法對(duì)含有FLAG標(biāo)簽的融合蛋白進(jìn)行檢測(cè),、鑒定,。 | 腸激酶 |
GST | 26 | 增強(qiáng)蛋白可溶性,，僅能純化可溶性蛋白，屏蔽毒性蛋白,。 | 凝血酶 |
MBP | 44.4 | 增強(qiáng)蛋白可溶性，屏蔽毒性蛋白,。 | TEV蛋白酶 |
NusA | 55 | 增強(qiáng)蛋白可溶性，屏蔽毒性蛋白,。 | 凝血酶 |
SUMO | 11.2 | 增強(qiáng)蛋白的可溶性,，促進(jìn)蛋白折疊,，保護(hù)蛋白免受蛋白酶水解,，提高蛋白的穩(wěn)定性,。 | SUMO酶 |
今天，我們隆重向您推介一款高效精準(zhǔn)去除融合標(biāo)簽的產(chǎn)品——UCF.ME® rTEV Protease,，憑借其簡(jiǎn)潔易操作的實(shí)驗(yàn)流程,，此款酶能夠便捷地從融合蛋白中切除無(wú)需的標(biāo)簽，進(jìn)而獲得高純度的目標(biāo)蛋白,。
UCF.ME® rTEV Protease
TEV Protease 是一種廣泛應(yīng)用于切除重組蛋白融合標(biāo)簽的蛋白酶,，以其高度的位點(diǎn)特異性而著稱。它嚴(yán)格識(shí)別七氨基酸序列EXXYXQ↓(G/S),，在谷氨酰胺和甘氨酸或絲氨酸之間進(jìn)行精確剪切,，其中最常見(jiàn)的七氨基酸序列為：Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln↓-Gly,。這種特異性確保了蛋白加工過(guò)程中的精確性和效率,。
圖2.TEV蛋白酶作用原理圖[2]
翌圣UCF.ME® rTEV Protease 是一款經(jīng)過(guò)基因工程改良和精細(xì)純化的重組蛋白酶,，它不僅保留了天然TEV酶的完整功能活性，而且在更廣泛的溫度范圍內(nèi)展現(xiàn)出的穩(wěn)定性和特異性,。該產(chǎn)品在rTEV Protease (Cat#20403)基礎(chǔ)上進(jìn)行了工藝優(yōu)化，其純度更高,、活性更強(qiáng)、宿主gDNA殘留更低,，確保在實(shí)際應(yīng)用中對(duì)蛋白融合標(biāo)簽的切割效率更高，且能有效降低引入外源物質(zhì)殘留的風(fēng)險(xiǎn),。UCF.ME® rTEV Protease在pH 7.0和30°C的條件下表現(xiàn)出最佳活性，但即使在pH 6.0-8.5,、溫度4-30°C的廣泛條件下也保持活性,，以適應(yīng)不同蛋白質(zhì)加工需求,。值得一提的是,，UCF.ME® rTEV Protease 的N端帶有6×His標(biāo)簽,，可通過(guò)Ni-NTA樹(shù)脂進(jìn)行高效去除,，從而實(shí)現(xiàn)目標(biāo)蛋白的精準(zhǔn)純化。
性能展示
剪切效率高：蛋白標(biāo)簽切除
以含有UCF.ME® rTEV Protease剪切位點(diǎn)的融合蛋白（3 μg）為底物,，分別投入U(xiǎn)CF.ME® rTEV Protease 10,、5,、3 U，在30℃條件下反應(yīng)1 h,，瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)剪切效果,。結(jié)果顯示翌圣的UCF.ME® rTEV Protease在投入量為3 U以上時(shí),，可高效剪切底物,，剪切效率＞90%,。
圖2.UCF.ME® rTEV Protease剪切活性驗(yàn)證
宿主gDNA殘留低：有效降低引入外源物質(zhì)殘留的風(fēng)險(xiǎn)
通過(guò)對(duì)不同批次的UCF.ME® rTEV Protease進(jìn)行宿主（大腸桿菌）gDNA殘留檢測(cè),，結(jié)果顯示UCF.ME® rTEV Protease宿主gDNA殘留遠(yuǎn)低于< 1copies/U。
圖3.UCF.ME® rTEV Protease宿主gDNA殘留結(jié)果
適用條件廣泛：可適應(yīng)不同蛋白質(zhì)加工需求
通過(guò)對(duì)UCF.ME® rTEV Protease不同條件下的剪切活性進(jìn)行驗(yàn)證,，結(jié)果顯示UCF.ME® rTEV Protease在4-30℃條件下均有較強(qiáng)的活性，可適配客戶不同應(yīng)用場(chǎng)景需求,。
反應(yīng)時(shí)間（h） | 不同溫度下剪切活性（%） | |||
4℃ | 16℃ | 21℃ | 30℃ | |
1 | 34 | 58 | 56 | 85 |
2 | 58 | 80 | 78 | 90 |
3 | 71 | 99 | 99 | 99 |
3.5 | 84 | 99 | 99 | 99 |
翌圣融合標(biāo)簽切割蛋白產(chǎn)品推薦
產(chǎn)品分類 | 產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品貨號(hào) |
TEV蛋白酶 | UCF.ME® rTEV Protease | 20427ES |
腸激酶 | Enterokinase, Recombinant | 20395ES |
SUMO蛋白酶 | SUMO Protease | 20410ES |
3C Protease | 3C Protease | 20409ES |
凝血酶 | Bovine Thrombin,High Specific Activity,>2000 IU/mg 牛凝血酶 | 20402ES |
參考文獻(xiàn)：
[1] Parikh I , Cuatrecasas P .Affinity Chromatography[J].Vox Sanguinis, 1972, 23(1-2):141-146.DOI:10.1159/000466530.
[2] Paththamperuma C, Page R C. Fluorescence dequenching assay for the activity of TEV protease[J]. Analytical biochemistry, 2022, 659: 114954.
