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2024年7月4日，成都生物制品研究所研制的四價(jià)HPV疫苗上市申請(qǐng)獲得NMPA受理,，這也是國內(nèi)自研 四價(jià)的預(yù)防因人乳頭瘤病毒所引起的宮頸癌疫苗。根據(jù)國家癌癥中心基于腫瘤登記及隨訪監(jiān)測最新數(shù)據(jù),，在JNCC上發(fā)布2022年中國惡性腫瘤疾病研究情況顯示【1】,，子宮頸癌位列女性癌癥發(fā)病人數(shù)的前五位，發(fā)病增長率僅次于甲狀腺癌,，因此防治需要同時(shí)進(jìn)行,，以減少病人發(fā)病率和延長存活期。
圖.信息源自CDE
宮頸癌類器官（organoids）是指利用宮頸腫瘤細(xì)胞等在體外培養(yǎng)出的3D細(xì)胞培養(yǎng)物并具有一定的空間結(jié)構(gòu)組織類似物,。宮頸癌類器官可以作為疾病模型,，相較于傳統(tǒng)2D疾病模型，其在闡明疾病的發(fā)展,、穩(wěn)態(tài)性和發(fā)病機(jī)理等與體內(nèi)環(huán)境更加接近,，能作為宮頸癌治療、診段和發(fā)病機(jī)制研究的理想試驗(yàn)?zāi)Ｐ汀?/span>
宮頸癌類器官構(gòu)建實(shí)驗(yàn)步驟
1,、取材：標(biāo)本離體后,，盡快取材,。采用無菌器械，保證無菌環(huán)境,，將腫瘤組織放入含有5 mL的原代組織保存液的 15 mL 離心管中,，4℃轉(zhuǎn)運(yùn)；
2,、清洗：在生物安全柜中取出樣品管,，去除組織保存液，加入適量冷的添加有雙抗的 PBS,，反復(fù)清洗后,，去除 PBS；
3,、重復(fù)清洗：重復(fù)第 2 步驟 3 次,；
4、組織處理：去除 PBS緩沖液后,，將組織塊移至10 cm含10 mL冷原代 組織保存液的無菌培養(yǎng)皿中,，用無菌眼科顯微剪將組織剪碎（直徑約 0.5mm~1mm）；
5,、重復(fù)清洗：使用常溫PBS,，重復(fù)第2步驟3次；
6,、收集組織碎片,，加入組織消化液消化20~30 min，過70 μm篩網(wǎng),，收集宮頸癌細(xì)胞,；
7、紅細(xì)胞裂解：加入10 mL紅細(xì)胞裂解緩沖液,，室溫下在翹板搖床上搖10 min,；
8、重復(fù)清洗：裂解完畢,，使用常溫 DMEM/F12,，重復(fù)第 2步驟3次；
9,、類器官種板：調(diào)整細(xì)胞密度為2~3×106,，與基質(zhì)膠1:1均勻混合，將細(xì)胞混懸液以40-60 uL每孔種在24孔板中,，37℃放置15~30 min,，加入預(yù)熱的類器官培養(yǎng)液，每個(gè)孔 750 uL,；
10,、類器官培養(yǎng)：將培養(yǎng)板放在 37℃ CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng),每2天更換培養(yǎng)液,。加入培養(yǎng)液時(shí)，吸頭朝向側(cè)壁,，緩慢加入,；
11、類器官觀察：每天觀察類器官并拍照,，了解初始類器官數(shù)量,、增殖速度、形態(tài),、微生物污染情況等,。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果
注：P為代次，d為培養(yǎng)天數(shù)
FAQ
基質(zhì)膠的操作要注意哪些事項(xiàng),？
所有操作需在無菌環(huán)境下進(jìn)行，應(yīng)使用預(yù)冷的移液器以保證基質(zhì)膠呈勻漿狀,。
獲取臨床樣本,，如何避免污染？
①取材時(shí)盡量保證無菌取材,；
②提取前可以用含雙抗的PBS浸泡幾分鐘：常見與外界環(huán)境有接觸可能的胃,、腸、膀胱等位置腫瘤建議用含3%~5%雙抗的PBS浸泡5-10 min,，其他常見腫瘤用含1%~2%雙抗的PBS浸泡5min左右,；
③提取細(xì)胞過程中所用試劑均加1%雙抗及合適濃度的原代抗生素。
腫瘤組織采集,、保存,、運(yùn)輸注意事項(xiàng)
盡可能多采集腫瘤細(xì)胞含量高的腫瘤組織，并縮短組織樣本在空氣中暴露的時(shí)間,，以減少污染概率,；采集的腫瘤組織樣本盡快置于裝有專用樣本保存液的無菌管中，低溫（4 ℃左右）下快速運(yùn)轉(zhuǎn)至檢測單位（盡量保證采樣后2~4 h內(nèi)送到）,。
病灶和癌旁培養(yǎng)出的類器官有區(qū)別嗎,？腫瘤組織的取材部位有什么要求？
有差別,，腫瘤本身具有異質(zhì)性,，不同來源的類器官之間存在差異是很常見的現(xiàn)象，從形態(tài)上看,，原發(fā)病灶來源的類器官比癌旁來源的類器官更具有侵襲性的結(jié)構(gòu),，一般病灶形態(tài)上更加不規(guī)則一些。如果希望在建?；蛩幬锖Y選方面盡量減小誤差,，可以在活性好的地方多位置取樣,。
產(chǎn)品選擇
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號(hào) | 規(guī)格 |
Cebrary®Tissue Digestion Solution 組織消化液 | 41423ES10/30 | 10/30 mL |
Cebrary®Cell recovery solution for Organoid類器官回收液 | 41421ES30/60 | 30/100 mL |
Cebrary®Cell freezing medium for Organoid 類器官凍存液 | 41422ES30/60 | 30/100 mL |
相關(guān)產(chǎn)品
產(chǎn)品類型 | 產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號(hào) | 規(guī)格 |
基本濃度 | Ceturegel® Matrix LDEV-Free基質(zhì)膠 | 40183ES08/10 | 5/10 mL |
Ceturegel® Matrix Phenol Red-Free，LDEV-Free 基質(zhì)膠 | 40184ES08/10 | 5/10 mL | |
低生長因子 | Ceturegel® Matrix GFR,，LDEV-Free 基質(zhì)膠 | 40185ES08/10 | 5/10 mL |
Ceturegel® Matrix GFR,， Phenol Red-Free，LDEV-Free 基質(zhì)膠 | 40186ES08/10 | 5/10 mL | |
高濃度 | Ceturegel® Matrix High Concentration,，LDEV-Free 基質(zhì)膠 | 40187ES08/10 | 5/10 mL |
Ceturegel® Matrix High Concentration,，Phenol Red-Free，LDEV-Free 基質(zhì)膠 | 40188ES08/10 | 5/10 mL | |
Ceturegel® Matrix High Concentration,，GFR,，LDEV-Free 基質(zhì)膠 | 40189ES08/10 | 5/10 mL | |
干細(xì)胞專用 | Ceturegel® Matrix hESC-Qualified，LDEV-Free 基質(zhì)膠 | 40190ES08/10 | 5/10 mL |
類器官專用 | Ceturegel® Matrix for Organoid culture,，Phenol Red-Free,，LDEV-Free 基質(zhì)膠 | 40191ES08/10 | 5/10 mL |
鼠尾膠原 | Collagen, Type I , from rat tail 鼠尾膠原蛋白I | 40125ES10/50 | 2/10 mL |
Cebrary® Collagen, Type I , from mouse tail鼠尾膠原蛋白I型 | 40136ES10/50 | 2/10 mL |
