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每年的5月8號是“世界卵巢癌日"，根據(jù)世界衛(wèi)生組織國際癌癥研究機構(gòu)（IARC）發(fā)布的2020年全球癌癥發(fā)病數(shù)據(jù)報告顯示：2020年中國新發(fā)癌癥病例457萬例,，其中男性248萬例,，女性209萬例,，2020年中國癌癥死亡病例為300萬例,，其中男性182萬例,，女性118萬例,，在婦科三大腫瘤中卵巢癌的死亡率,。
圖.2020年中國女性癌癥新發(fā)病例數(shù)類型
卵巢癌類器官（organoids）是指利用卵巢瘤細胞等在體外培養(yǎng)出的3D細胞培養(yǎng)物并具有一定的空間結(jié)構(gòu)組織類似物。卵巢癌類器官可以作為疾病模型,，相較于傳統(tǒng)2D疾病模型,，其在闡明疾病的發(fā)展,、穩(wěn)態(tài)性和發(fā)病機理等與體內(nèi)環(huán)境更加接近，能作為卵巢癌治療,、診斷和發(fā)病機制研究的理想試驗?zāi)Ｐ汀?/span>
卵巢癌類器官構(gòu)建
1,、取材：標本離體后，盡快取材,。采用無菌器械,，保證無菌環(huán)境，將腫瘤組織放入含有5 mL的原代組織保存液的 15 mL 離心管中,，4℃轉(zhuǎn)運,。
2、清洗：在生物安全柜中取出樣品管,，去除組織保存液,，加入適量冷的添加有雙抗的 PBS，反復(fù)清洗后,，去除 PBS,。
3、重復(fù)清洗：重復(fù)第 2 步驟 3 次,。
4,、組織處理：去除 PBS緩沖液后，將組織塊移至10 cm含10 mL冷原代 組織保存液的無菌培養(yǎng)皿中,，用無菌眼科顯微剪將組織剪碎（直徑約 0.5mm~1mm）,。
5、重復(fù)清洗：使用常溫PBS,，重復(fù)第2步驟3次,。
6、收集組織碎片,，加入組織消化液消化20~30 min,，過70 μm篩網(wǎng)，收集卵巢癌細胞,。
7,、紅細胞裂解：加入10 mL紅細胞裂解緩沖液，室溫下在翹板搖床上搖10 min,。
8,、重復(fù)清洗：裂解完畢，使用常溫 DMEM/F12,，重復(fù)第 2步驟3次。
9,、類器官種板：調(diào)整細胞密度為2~3×106,，與基質(zhì)膠1:1均勻混合,，將細胞混懸液以40-60 uL每孔種在24孔板中，37℃放置15~30 min,，加入預(yù)熱的類器官培養(yǎng)液,，每個孔 750 uL。
10,、類器官培養(yǎng)：將培養(yǎng)板放在 37℃ CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng),每2天更換培養(yǎng)液,。加入培養(yǎng)液時，吸頭朝向側(cè)壁,，緩慢加入,。
11、類器官觀察：每天觀察類器官并拍照,，了解初始類器官數(shù)量,、增殖速 度、形態(tài),、微生物污染情況等,。
實驗結(jié)果
圖.卵巢癌類器官不同周期培養(yǎng)結(jié)果（P為培養(yǎng)代次，d為培養(yǎng)時間）
FAQ
基質(zhì)膠的操作要注意哪些事項,？
所有操作需在無菌環(huán)境下進行,，應(yīng)使用預(yù)冷的移液器以保證基質(zhì)膠呈勻漿狀。
獲取臨床樣本,，如何避免污染,？
①取材時盡量保證無菌取材；
②提取前可以用含雙抗的PBS浸泡幾分鐘：常見與外界環(huán)境有接觸可能的胃,、腸,、膀胱等位置腫瘤建議用含3%~5%雙抗的PBS浸泡5-10 min，其他常見腫瘤用含1%~2%雙抗的PBS浸泡5min左右,；
③提取細胞過程中所用試劑均加1%雙抗及合適濃度的原代抗生素,。
腫瘤組織采集、保存,、運輸注意事項
盡可能多采集腫瘤細胞含量高的腫瘤組織,，并縮短組織樣本在空氣中暴露的時間，以減少污染概率,；采集的腫瘤組織樣本盡快置于裝有專用樣本保存液的無菌管中,，低溫（4 ℃左右）下快速運轉(zhuǎn)至檢測單位（盡量保證采樣后2~4 h內(nèi)送到）。
病灶和癌旁培養(yǎng)出的類器官有區(qū)別嗎,？腫瘤組織的取材部位有什么要求,？
有差別，腫瘤本身具有異質(zhì)性,，不同來源的類器官之間存在差異是很常見的現(xiàn)象,，從形態(tài)上看,，原發(fā)病灶來源的類器官比癌旁來源的類器官更具有侵襲性的結(jié)構(gòu)，一般病灶形態(tài)上更加不規(guī)則一些,。如果希望在建?；蛩幬锖Y選方面盡量減小誤差，可以在活性好的地方多位置取樣,。
產(chǎn)品選擇
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號 | 規(guī)格 |
Cebrary®Tissue Digestion Solution 組織消化液 | 41423ES10/30 | 10/30 mL |
Cebrary®Cell recovery solution for Organoid類器官回收液 | 41421ES30/60 | 30/100 mL |
Cebrary®Cell freezing medium for Organoid 類器官凍存液 | 41422ES30/60 | 30/100 mL |
Cebrary® Ovarian cancer Organoid Growth Medium (Human)卵巢癌類器官生長培養(yǎng)基 | 41433ES60/76 | 100/500 mL |
相關(guān)產(chǎn)品
產(chǎn)品類型 | 產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號 | 規(guī)格 |
基本濃度 | Ceturegel® Matrix LDEV-Free基質(zhì)膠 | 40183ES08/10 | 5/10 mL |
Ceturegel® Matrix Phenol Red-Free,，LDEV-Free 基質(zhì)膠 | 40184ES08/10 | 5/10 mL | |
低生長因子 | Ceturegel® Matrix GFR，LDEV-Free 基質(zhì)膠 | 40185ES08/10 | 5/10 mL |
Ceturegel® Matrix GFR,， Phenol Red-Free,，LDEV-Free 基質(zhì)膠 | 40186ES08/10 | 5/10 mL | |
高濃度 | Ceturegel® Matrix High Concentration，LDEV-Free 基質(zhì)膠 | 40187ES08/10 | 5/10 mL |
Ceturegel® Matrix High Concentration,，Phenol Red-Free,，LDEV-Free 基質(zhì)膠 | 40188ES08/10 | 5/10 mL | |
Ceturegel® Matrix High Concentration，GFR,，LDEV-Free 基質(zhì)膠 | 40189ES08/10 | 5/10 mL | |
干細胞專用 | Ceturegel® Matrix hESC-Qualified,，LDEV-Free 基質(zhì)膠 | 40190ES08/10 | 5/10 mL |
類器官專用 | Ceturegel® Matrix for Organoid culture，Phenol Red-Free,，LDEV-Free 基質(zhì)膠 | 40191ES08/10 | 5/10 mL |
Collagen, Type I , from rat tail 鼠尾膠原蛋白I | 40125ES10/50 | 2/10 mL | |
Cebrary® Collagen, Type I , from mouse tail鼠尾膠原蛋白I型 | 40136ES10/50 | 2/10 mL |
