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NGS，即下一代測序技術(shù),，是近年來基因測序領(lǐng)域的一次重大突破,。相較于傳統(tǒng)的測序方法，NGS具有高通量,、高準(zhǔn)確性,、低成本等諸多優(yōu)勢，使得基因測序變得更加高效和便捷,。通過NGS技術(shù),，科學(xué)家們能夠更深入地了解基因組的結(jié)構(gòu)和功能，為疾病診斷,、治療以及新藥研發(fā)等領(lǐng)域提供了強(qiáng)有力的支持,。
酶切法建庫：NGS的得力助手
在NGS的研究中，建庫是一個至關(guān)重要的環(huán)節(jié),。建庫的質(zhì)量直接影響到測序結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性,。而酶切法建庫,，避免了傳統(tǒng)的機(jī)械打斷,，無需打斷儀，流程簡便,，可同時處理多個樣,，更適合于自動化建庫，滿足大規(guī)?；蚪M研究的需求,，是目前應(yīng)用廣泛的建庫方法之一。
酶切法建庫有其優(yōu)勢,，但是也有其劣勢,，比如：酶切偏好性、引入假陽性,、起始量適用范圍窄等,，翌圣借助ZymeEditor（點(diǎn)擊了解更多）酶改造及發(fā)酵純化工藝平臺，對酶進(jìn)行進(jìn)化改造,，及不斷優(yōu)化的反應(yīng)體系,，克服了酶切法建庫方法學(xué)上的局限性，讓酶切法建庫更精準(zhǔn)更快速,！
Hieff NGS® OnePot Pro DNA Library Prep Kit V3（Cat#12194）
Hieff NGS® OnePot Pro DNA Library Prep Kit V3 是一款可用于Illumina®和MGI®高通量測序平臺的新一代酶切法建庫試劑盒,。本試劑盒將片段化模塊與末端修復(fù)模塊合二為一，極大的降低了建庫的時間和成本,、連接模塊的酶和buffer預(yù)混,，簡化了操作流程，更加適合于自動化建庫。
實(shí)驗(yàn)原理
圖1.酶切法建庫原理
產(chǎn)品優(yōu)勢
高效穩(wěn)定的片段化效果
以不同質(zhì)量等級的FFPE DNA樣本建庫,，樣本投入量100 ng,，采用同一酶切條件4℃ 1 min，37℃10 min,，72℃ 20 min,，4℃ hold，文庫主峰在300 bp左右,；數(shù)據(jù)顯示不同降解程度的FFPE樣本同一酶切條件下,，文庫主峰基本一致。
FFPE DNA質(zhì)量等級 | A | B | C | D |
文庫產(chǎn)量（ng） | 2550 | 2470 | 1760 | 1790 |
文庫主峰（bp） | 295bp | 301bp | 288bp | 278bp |
圖2.FFPE DNA的酶切文庫峰圖
高效穩(wěn)定的片段化效果
Human gDNA為模板,，以不同的樣本投入量,，12194與競品W試劑盒相比，12194的文庫產(chǎn)量與競品相當(dāng),。數(shù)據(jù)顯示不同投入量文庫產(chǎn)量對比,，12194有高效的文庫轉(zhuǎn)化效率。
極低的假陽性率
NGS建庫引入的假陽性問題主要包括嵌合序列和堿基錯摻等因素,，在酶切法片段化時將會引入一些假的嵌合序列,，12194對片段化酶全面升級，解決了酶切假陽性的痛點(diǎn),。
用12194酶法片段化建庫試劑盒對3種標(biāo)準(zhǔn)品樣本（FFPE標(biāo)準(zhǔn)品,、gDNA標(biāo)準(zhǔn)品、ctDNA標(biāo)準(zhǔn)品）建庫,，并和競品W進(jìn)行了頭對頭的比較,。數(shù)據(jù)顯示，無論是FFPE樣本,、gDNA,、還是ctDNA，12194的Soft Clip,、false chimeric都低于或近似于競品W,。
圖4.12194與競品W的數(shù)據(jù)質(zhì)量對比
優(yōu)異的位點(diǎn)檢出率
用12194和競品W建庫雜交捕獲測序?qū)Ρ龋０孱愋蜑槟[瘤SNV 5% gDNA標(biāo)準(zhǔn)品GW-OGTM006和腫瘤gDNA野生型標(biāo)準(zhǔn)品GW-OGTM005,，將突變位點(diǎn)稀釋為 0.5% 和0.1%,，模板投入量100ng，PCR擴(kuò)增循環(huán)數(shù)為7,，捕獲panel為何因Cancer SLC Panel,，平均測序深度為5000×，比較捕獲測序數(shù)據(jù),。數(shù)據(jù)顯示12194對突變位點(diǎn)檢出率與目標(biāo)檢出率一致,。
圖5.12194與競品W的低頻位點(diǎn)檢出率
產(chǎn)品訂購指南
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品貨號 | 產(chǎn)品規(guī)格 |
Hieff NGS® OnePot Pro DNA Library Prep Kit V3一步法DNA建庫試劑盒V3 | 12194ES08 | 8 T |
12194ES24 | 24 T | |
12194ES96 | 96 T |
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產(chǎn)品應(yīng)用 | 產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號 |
FFPE提取 | MolPure® Magnetic FFPE DNA Kit 磁珠法FFPE DNA提取試劑盒V2 | 18375ES |
機(jī)械法建庫 | Hieff NGS® DNA Library Prep Kit 全能型DNA建庫試劑盒 | 13577ES |
FFPE 修復(fù)試劑 | Hieff NGS® FFPE DNA Repair Reagent | 12606ES |
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