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普通胰島素是從豬牛等動物胰腺中提取，提取后經(jīng)一系列生產(chǎn)工藝純化后,，才應用于糖尿病患者的治療，雖能降血糖,，但其副作用極大。與動物胰島素相比,，人胰島素的副作用小,、療效更確切,。但糖尿病患者需借助于價格昂貴的進口人胰島素進行治療。因此國內對重組人胰島素及其類似物的生產(chǎn),，刻不容緩,。
重組人胰島素及其類似物的生產(chǎn)過程中，無動物源性原料的使用是防止人畜共患病,、提高安全性的重要手段,。2020年版《中國藥典》增加了重組胰蛋白酶標準，推動我國非動物源性生物藥物的研發(fā),。
小翌為大家準備好了性價比高的幾款無動物源性蛋白酶,，為胰島素生產(chǎn)等生物制藥領域提供助力：
重組胰蛋白酶
胰蛋白酶是一種絲氨酸蛋白酶，可特異切割賴氨酸及精氨酸C末端形成的肽鍵,。重組胰蛋白酶多用大腸桿菌或酵母系統(tǒng)重組表達并經(jīng)過多步層析純化獲得,，無糜蛋白酶等雜酶污染。重組胰蛋白酶與天然提取的胰蛋白酶相比具有相同的特性,，其氨基酸序列與豬源胰蛋白酶序列同源,。因其無動物源污染性和純度高，在醫(yī)藥開發(fā),、生化研究,、蛋白組學等領域中有著廣泛的應用。
翌圣目前可提供2款重組胰蛋白酶,，分別為藥典級（Cat#40512ES）,、質譜級（Cat#20416ES）
藥典級：大腸桿菌表達的重組胰蛋白酶，氨基酸序列與豬胰腺來源的胰蛋白酶全一致,，生產(chǎn)過程不使用任何動物源原料,，無外源性的病毒污染，可替代豬胰腺來源胰蛋白酶應用于各種生物技術過程中,，如：細胞培養(yǎng),、細胞發(fā)酵、蛋白質的酶解或各種組織的細胞分離等,。本產(chǎn)品純度高,、不含雜酶、宿主蛋白和 DNA 殘留量符合藥典標準,，避免了雜質對細胞生長的影響,，最適pH為7.0-9.0，穩(wěn)定pH為2±0.5,。
質譜級：畢赤酵母表達的重組豬胰蛋白酶,，在GMP法規(guī)下生產(chǎn)，不含任何動物源成分，無動物源性的病毒污染,，天然缺乏糜蛋白酶活性,，并已過濾除菌。胰蛋白酶活性以國際通用活性（USP）為準,，優(yōu)于進口同類產(chǎn)品,，其中β-Trypsin的HPLC含量可達80%以上，儲存穩(wěn)定性高,，蛋白質組學酶解漏切率比進口產(chǎn)品低50%,。可替代胰蛋白酶使用,，且有很多優(yōu)勢,，如無雜酶活性，高穩(wěn)定性,，高活性,；胰蛋白酶容易自切產(chǎn)生自身自切片段影響質譜分析結果，而重組胰蛋白酶（質譜級）通過甲基化修飾和突變保證其不自切,，尤其適用于蛋白組學領域,，如蛋白質質譜,、測序,、肽圖譜分析,。
賴氨酰內切酶（Lys-C）是來源于無色桿菌的一種絲氨酸蛋白酶，識別位點為蛋白質中的賴氨酸,，可高度特異性的水解賴氨酸羧基側的酰胺,、酯和肽鍵，酶切速率及特異性均高于胰蛋白酶,?？蓡为毷褂没蚺c胰蛋白酶聯(lián)合使用，確保酶切效率,，降低漏切率,。使用胰蛋白酶或賴氨酰內切酶酶切獲得去B鏈30位氨基酸殘基的胰島素前體(DesB30胰島素),，是重組胰島素的生產(chǎn)過程極其重要的一環(huán),。
翌圣重組賴氨酰內切酶（質譜級）是由大腸桿菌表達，不含有其他雜蛋白酶（如Lys-N,、Arg-C等絲氨酸類蛋白酶）,，具有與天然賴氨酰內切酶相同的特異性和活力。具有活性高,、穩(wěn)定性好,、純度高，無動物源性的特點。最適的反應pH為9.0-9.5,，最適反應溫度為30-37℃,，在4 M尿素或者0.1% SDS存在的情況下仍可保持較高的酶活性?？蓱糜诘鞍踪|分析,，如蛋白質質譜、測序,、肽圖譜分析及賴氨酸相關衍生物合成,。
羧肽酶B又稱肽酰-L-賴氨酸（L-賴氨酸）水解酶、精蛋白酶,，專一水解蛋白質C-末端堿性氨基酸（賴氨酸,、精氨酸、組氨酸）的氨基端,；分子量為33.8 kD,，等電點為6.0，最適pH為7.5-9.0,。羧肽酶B的活性受精氨酸,、賴氨酸的競爭性抑制，金屬離子螯合劑如EDTA等抑制酶活,。
翌圣重組羧肽酶B采用大腸桿菌表達,，在GMP法規(guī)下生產(chǎn)，不含任何動物源成分,，無動物源性的病毒污染,，氨基酸序列與大鼠胰腺羧肽酶B全一致，具有與動物源性羧肽酶B相同的酶學性質,，可替代動物源性羧肽酶 B用于各種生物技術過程中, 如重組胰島素及其類似物的生產(chǎn),、蛋白質C-末端氨基酸的測定、蛋白質C-末端組氨酸標簽的去除,、其他重組多肽類物質的生產(chǎn),、某些特殊化合物的酶促合成。
雙堿性內切酶又稱為Kex2蛋白酶,、YSCF蛋白酶,，在酵母體內Kex2蛋白酶負責加工killer toxin和α-factor的前體，是一種鈣離子依賴型的絲氨酸蛋白酶,，能特異性識別和切割Arg-Arg,、Lys-Arg等雙堿性氨基酸羧基端肽鍵。與胰蛋白酶（識別一個氨基酸殘基,，對于目的蛋白序列的限制性較強,，且可能產(chǎn)生錯切等問題）不同，Kex2不能識別和切割單一堿性氨基酸即精氨酸或賴氨酸的羧基端肽鍵，所以Kex2這類識別數(shù)個氨基酸殘基,、特異性較高的酶的生產(chǎn)制備對酶切的正確性尤為重要,。并且Kex2蛋白酶活性不受常規(guī)的絲氨酸蛋白酶抑制劑如抑肽酶、PMSF,、TPCK所抑制,。
翌圣重組Kex2蛋白酶是由畢赤酵母表達，在GMP法規(guī)下生產(chǎn),，不含任何動物源成分,，無動物源性的病毒污染，與天然的釀酒酵母Kex2酶具有相同的酶特異性,。最適作用pH為pH9.0,，穩(wěn)定儲存的pH為5.0-6.0。生物制藥領域常用Kex2蛋白酶聯(lián)合羧肽酶B用于重組胰島素及其類似物,、GLP-1,、重組多肽的生產(chǎn)制備，還可用于蛋白質的酶解和肽圖分析,、測序及融合標簽的切割等,。
選購指南
貨號 | 40512ES | 20416ES | 20420ES | 20417ES | 20418ES |
產(chǎn)品名稱 | 重組胰蛋白酶 （粉末） | 重組胰蛋白酶 （質譜級） | 重組賴氨酰內切酶（質譜級） | 重組羧肽酶B | 重組雙堿性內切酶 |
來源 | 大腸桿菌 | 畢赤酵母 | 大腸桿菌 | 大腸桿菌 | 畢赤酵母 |
性狀 | 白色或類白色結晶性粉末 | 無色至淡黃色，澄清液體 | 無色至淡黃色,，澄清液體 | 白色,、類白色、類黃色粉末 | 白色,、類白色粉末 |
純度 | β-trypsin≥70% α-trypsin≤20% | β-trypsin＞80% α-trypsin＜20% SUMO標簽蛋白 | 單一主條帶 | 單一主條帶 | 單一主條帶 |
比活性 | ≥3800 USP units/mg 蛋白 | >6800 USP Unit/mg 蛋白 | ≥3.0 AU/mg | ≥170 USP units/mg 蛋白 | ≥10.0 units/mg 蛋白 |
切割位點 | 特異切割賴氨酸或者精氨酸殘基中的羧基端肽鍵 | 特異切割賴氨酸或者精氨酸殘基中的羧基端肽鍵 | 特異性切割賴氨酸羧基側的酰胺,、酯和肽鍵 | 專一水解蛋白質C-末端堿性氨基酸（賴氨酸、精氨酸）的氨基端 | 特異性識別和切割Arg-Arg,、Lys-Arg等雙堿性氨基酸羧基端肽鍵 |
應用 | 可替代豬胰腺來源胰蛋白酶應用于各種生物技術過程中,，如：細胞培養(yǎng)、細胞發(fā)酵,、蛋白質的酶解或各種組織的細胞分離等,。 重組蛋白方面： 1. 重組胰島素生產(chǎn)； | 可替代重組胰蛋白酶使用,，且純度更高,、活性更好。其不自切的特性,，尤其適用于蛋白質分析,，如蛋白質質譜、測序,、肽圖譜分析。 | 1.重組胰島素及其類似物的生產(chǎn)。 2.蛋白質分析,，如蛋白質質譜,、測序、肽圖譜分析,。 3.賴氨酸相關衍生物合成,。 | 1. 重組胰島素及其類似物的生產(chǎn)。 2. 蛋白質C-末端氨基酸的測定,。 3. 蛋白質C-末端組氨酸標簽的去除,。 4. 其他重組多肽類物質的生產(chǎn)。 5. 某些特殊化合物的酶促合成 | 1. 重組胰島素及其類似物的前體加工 2. 多肽藥物生產(chǎn)中的的工藝酶切 3. 生物研究：蛋白質的酶解和肽圖分析,、測序等,。 4. 可用于融合標簽的切割 |
產(chǎn)品優(yōu)勢
質量高：純度高，比活高,，宿主蛋白殘留小于生物制品限度要求,；
無動物源性：重組生產(chǎn)，生產(chǎn)過程不使用任何動物源原料,，無外源性病毒污染,；
GMP生產(chǎn)：可提供GMP級別產(chǎn)品；
供應穩(wěn)定：批量生產(chǎn),，可保證穩(wěn)定連續(xù)的批次生產(chǎn),；產(chǎn)品批次間無差異，質量穩(wěn)定,；
多形式供貨：可供應液體和凍干粉2種形式,，液體裝方便使用，凍干粉方便運輸和儲存,。
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 | 目錄價/元 |
PerfCell™ Recombinant Trypsin（powder） 重組胰蛋白酶（粉末） | 40512ES10/60/80 | 10mg/100 mg /1 g | 328/2298/16188 |
Recombinant Trypsin（MS-SAFE） 重組胰蛋白酶（質譜級） | 20416ES60 | 100 µg | 595 |
Carboxypeptidase B, Recombinant, Expressed in E.coli 大腸桿菌表達重組羧肽酶B | 20417ES03/10 | 1 mg/10 mg | 735/2285 |
Paired-basic endopeptidase, Recombinant, Expressed in Yeast 酵母表達重組雙堿性內切酶 | 20418ES60 | 100 µg | 1945 |
Recombinant Lys-C（MS-SAFE） 重組賴氨酰內切酶（質譜級） | 20420ES20/60 | 20 µg/5×20 µg | 1295/4995 |
