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mRNA合成的關(guān)鍵步驟之一是將質(zhì)粒DNA進(jìn)行線性化，這一步需要使用限制性內(nèi)切酶,，IIs型內(nèi)切酶是質(zhì)粒線性化的內(nèi)切酶，因?yàn)樗鼈冊(cè)谧R(shí)別位點(diǎn)下游切割DNA,，可確保所設(shè)計(jì)的poly(A)尾的完整性,，線性化后的DNA模板上不會(huì)留下“疤痕"，IVT過程中也不會(huì)添加不需要的核苷酸,。BsaI是常見的IIs型內(nèi)切酶之一,，在mRNA合作中起著重要作用。
圖1. BsaI識(shí)別位點(diǎn)及切割序列
翌圣的BsaI由大腸桿菌重組表達(dá)，GMP標(biāo)準(zhǔn)生產(chǎn),，酶切效率高,、星號(hào)活性低、末端完整性良好,，可用于mRNA疫苗生產(chǎn)的質(zhì)粒線性化,、慢病毒/腺病毒包裝的載體構(gòu)建、質(zhì)粒制備的酶切驗(yàn)證,、Golden Gate組裝等,。
產(chǎn)品特點(diǎn)
嚴(yán)格按照GMP標(biāo)準(zhǔn)生產(chǎn),，確保無動(dòng)物源成分引入,。核酸酶，蛋白酶,、宿主DNA/蛋白殘留,、支原體、內(nèi)毒素等均嚴(yán)格質(zhì)控確保產(chǎn)品質(zhì)量,。
具有高酶切效率,，37℃反應(yīng)16 h無星號(hào)活性，經(jīng)酶切—連接—再酶切測試末端完整性良好,。
將20 U BsaI與底物DNA在37℃孵育 1 h和16 h,，瓊脂糖凝膠電泳比較DNA譜帶變化,。結(jié)果顯示翌圣BsaI無非特異性核酸酶殘留。
圖2. 非特異性核酸酶殘留檢測結(jié)果
通過“酶切—連接—再酶切"的功能實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證BsaI酶切的末端完整性,，結(jié)果顯示翌圣的BsaI末端完整性良好，與進(jìn)口品牌效果一致,。
圖3. BsaI末端完整性檢測結(jié)果
在37℃下，將BsaI及底物DNA在酶切反應(yīng)體系中共同孵育16h,，未檢測到星號(hào)活性引起的底物非特異性降解,，表明翌圣BsaI 16 h孵育無星號(hào)活性,。
圖4. BsaI星號(hào)活性檢測結(jié)果
