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常用報(bào)告基因有哪些種類,？一文讀懂！
報(bào)告基因( reporter gene) 是一種編碼在內(nèi)源蛋白背景下易被檢測(cè)出來的蛋白質(zhì)或酶的基因,。報(bào)告基因與目的基因或調(diào)控序列相連，通過間接或直接檢測(cè)報(bào)告基因編碼產(chǎn)物的信號(hào),，比如報(bào)告蛋白、mRNA,、酶等,，直觀反映細(xì)胞內(nèi)基因的轉(zhuǎn)錄活性或表達(dá)水平。一般報(bào)告基因的特點(diǎn)是無毒,、無免疫原性,、易于檢測(cè)、具有一定的特異性,。報(bào)告基因編碼產(chǎn)物的半衰期是比較關(guān)注的一個(gè)關(guān)鍵點(diǎn),。編碼產(chǎn)物半衰期和報(bào)告基因的應(yīng)用領(lǐng)域息息相關(guān)。[1]
那么報(bào)告基因該如何選擇呢,？在選擇報(bào)告基因時(shí)一般基于以下幾個(gè)原則,，對(duì)宿主的影響，內(nèi)源性活性影響以及方法是否成熟等,。目前報(bào)告基因大致分為四類[2][3],，不同的報(bào)告基因有著不同的優(yōu)缺點(diǎn)（表1）。下面就幾種不同的報(bào)告基因做出舉例介紹,。
表1.不同報(bào)告基因的優(yōu)勢(shì)和劣勢(shì)
圖1.GFP報(bào)告基因,。a展示的是GFP的蛋白結(jié)構(gòu)[1]。b展示經(jīng)過CMV-GFP改造過的腺病毒感染的VERO細(xì)胞鏡下圖.[3]
圖2.氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶報(bào)告基因,。由于的放射性分子是氯霉素,，X射線膠片上可見的分子是氯霉素及其所有乙?；问?/span>
1: promoter 1 construct; 2：promoter 2 construct;3：negative control; 4：positive control。
膜錨定受體或抗體,，膜錨定受體或抗體,，可以特異性地捕獲配體、抗原或半抗原,，這些配體或半抗原可以通過放射性,、磁性或熒光探針標(biāo)記進(jìn)行檢測(cè)。[2]例如,，野生型的熒光素酶一般都是分泌到細(xì)胞區(qū)域,，光信號(hào)都是從細(xì)胞培養(yǎng)基中獲得。膜錨定熒光素酶是表達(dá)于細(xì)胞膜上,?？梢怨潭ㄓ^察基因表達(dá)信號(hào)的強(qiáng)弱。海熒光素酶（Cypridina luciferase,，CLuc） 經(jīng)過改造可以錨定在細(xì)胞膜上,，又被稱為細(xì)胞膜錨定的海熒光素（membrane-anchored Cypridina luciferase,，maCLuc）酶圖4展示的是導(dǎo)入熒光素酶的C6 細(xì)胞(鼠膠質(zhì)瘤)被植入鼠大腿肩膀處。移植后7天進(jìn)行成像,。
圖4.左圖為野生型熒光素酶,，右圖為膜錨定熒光素酶。圖像是在給予CLuc特異性底物海熒光素后30 s進(jìn)行成像
綜上所述,，多種報(bào)告基因和可選擇的標(biāo)記基因廣泛用于診斷工具,。更簡單，更快速和更靈敏的報(bào)告基因會(huì)繼續(xù)被開發(fā)應(yīng)用于生命科學(xué)領(lǐng)域,，翌圣生物作為生命科學(xué)領(lǐng)域工具提供者,，將會(huì)陸續(xù)推出報(bào)告基因檢測(cè)系列產(chǎn)品，敬請(qǐng)期待,。
類型 | 品名 | 貨號(hào) |
閃光非均質(zhì)型 | 螢火蟲螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒 | 11401ES |
閃光非均質(zhì)型 | 雙螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒 | 11402ES |
輝光均質(zhì)型 | 輝光型螢火蟲熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒 | 11404ES |
輝光均質(zhì)型 | 輝光型雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒 | 11405ES |
參考文獻(xiàn)：
[1] Atar Mohammed et al.Reporter Gene Application in Diagnostic Assay:ReviewInternational Journal of Genetics 5(2): 39-47, 2015
[2] 劉荔楨,王燦,邵泓.報(bào)告基因法在生物技術(shù)藥物活性檢測(cè)中的應(yīng)用[J].中國藥師,2021,24(07):349-352. DOI:10.19962/j.ki.issn1008-049X.2021.07.029.
[3] Soboleski, Mark R et al. “Green fluorescent protein is a quantitative reporter of gene expression in individual eukaryotic cells." FASEB journal : official publication of the Federation of American Societies for Experimental Biology vol. 19,3 (2005): 440-2. doi:10.1096/fj.04-3180fje
[4] Moroz, Maxim A et al. “Introducing a new reporter gene, membrane-anchored Cypridina luciferase, for multiplex bioluminescence imaging." Molecular therapy oncolytics vol. 21 15-22. 17 Mar. 2021, doi:10.1016/j.omto.2021.03.004
[5] 牛安娜;蘇昕;張曉鵬;;報(bào)告基因法在生物技術(shù)藥物活性檢測(cè)中的應(yīng)用[J];生物技術(shù)通訊;2019年02期,。
