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建庫作為NGS測序的核心步驟,,直接影響測序質(zhì)量,,文庫轉化率是評估文庫質(zhì)量的重要指標,,高的文庫轉化率一定程度上意味著文庫豐富度,、測序數(shù)據(jù)均一性更好。常規(guī)T4 DNA Ligase催化DNA的 3’-OH 和接頭的5’-磷酸基團之間形成磷酸二酯鍵完成接頭連接,,但此過程中會出現(xiàn)片段自連,,從而減低文庫轉化率,影響文庫豐富度與測序質(zhì)量,。翌圣ZymeEditor™酶改造平臺對T4 DNA Ligase進行定向改造獲得Hieff® 5' App T4 DNA Ligase(Cat#14960ES),,該突變體只能以預苷化接頭為底物進行接頭連接,顯著減少片段自連,,提高文庫轉化率,。
圖1. NGS常規(guī)建庫流程
產(chǎn)品特點
1、極低片段自連:只能以預腺苷化的接頭為底物,,極大降低片段自連,。
2、超高接頭連接效率:連接效率達95%以上,。
3,、嚴格質(zhì)控:無切口酶、外切酶及RNase殘留,。
數(shù)據(jù)展示
圖2. 以170 bp模式片段為底物連接效率檢測
圖3. 以300 bp模式片段為底物連接效率檢測
圖4. RNase殘留檢測 C:陰性對照
3,、無切口酶及外切酶殘留
將200 U Hieff® 5' App T4 DNA ligase與底物DNA孵育,瓊脂糖凝膠電泳比較DNA譜帶變化,。結果顯示翌圣Hieff® 5' App T4 DNA ligase無切口酶殘留,。
圖5. 切口酶殘留檢測 C:陰性對照
將2000 U Hieff® 5' App T4 DNA ligase與底物DNA孵育,瓊脂糖凝膠電泳比較DNA譜帶變化,。結果顯示翌圣Hieff® 5' App T4 DNA ligase無外切酶殘留,。
圖6. 外切酶殘留檢測 C:陰性對照
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翌圣ZymeEditor™酶改造定制服務
翌圣ZymeEditor™是一個酶改造底層技術平臺,它基于翌圣生物多年在分子酶改造領域中的技術積累與知識拓展,,該平臺已具備對多種酶的多種需求進行定向改造的能力,。因此,ZymeEditor™平臺從2023年開始正式推出酶改造對外定制服務,,可為各種應用領域(如醫(yī)藥,、診斷、食品,、化工等)的客戶提供全套酶改造服務,,也可以單獨提供蛋白發(fā)酵及純化工藝開發(fā)優(yōu)化、規(guī)?;a(chǎn)服務,,以滿足不同客戶的需求,助力產(chǎn)業(yè)升級,。
圖7.ZymeEditor™酶改造定制服務流程