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分子診斷加速器,！優(yōu)質(zhì)凍干RT-qPCR試劑原料
近幾年，分子診斷快速興起,，促進(jìn)了國內(nèi)檢驗技術(shù)的發(fā)展,。目前該技術(shù)已廣泛應(yīng)用于疾病檢測、基因檢測,、病毒和病原菌檢測,、食品安全檢測、遺傳檢測,、動物檢測,，環(huán)境檢測等各個領(lǐng)域。
傳統(tǒng)分子診斷試劑存在運(yùn)輸和保存的難題,。為確保試劑內(nèi)有效成分（DNA酶,、反轉(zhuǎn)錄酶等）的生物活性，一般需要在-20℃左右的冷鏈環(huán)境中儲運(yùn),。冷鏈運(yùn)輸?shù)男枰罅康谋蚋杀?，成本較高，而且環(huán)境溫度的變化容易造成檢測試劑反復(fù)凍融,，會直接影響試劑的性能和保質(zhì)期,。
那么，是否有更方便安全的
存儲和運(yùn)輸?shù)姆绞侥兀?/span>
經(jīng)深入研究,，發(fā)現(xiàn)將液體試劑
凍干成固體試劑將能很好解決上述問題
可常溫運(yùn)輸和儲存,，更長的保質(zhì)期
隨來隨測，不同品種同時上機(jī),，不同品類同時檢測
提高效率,，控制成本：常溫、長期穩(wěn)定,；快速配送,、便捷使用
絕大部分的溶液都可以開發(fā)成凍干劑型，但是存在一定的風(fēng)險,，原料及保護(hù)劑,、凍干工藝、凍干設(shè)備性能深度跨越,、相互干擾,，這種領(lǐng)域交叉相互干擾會導(dǎo)致研發(fā)周期失控。由此可見,，凍干絕不是簡單的工藝,，每一步都需要慎重選擇,。
原料廠家的酶和體系，凍干難度有差異,，更加重要的是,，能否提供足夠的技術(shù)支持
在開發(fā)過程需判斷：體系干擾、輔料及保護(hù)劑影響,、工藝和環(huán)境干擾
翌圣生物提供優(yōu)質(zhì)可凍干原料
——讓核酸檢測更加高效,、便捷、經(jīng)濟(jì)
凍干原料的篩選不是單純?nèi)サ舨豢蓛龈晌镔|(zhì),，原料選擇環(huán)節(jié)需要針對每一個組份進(jìn)行篩選或調(diào)試,。切忌盲目尋找可凍干原料；不同原料,，凍干工藝及凍干體系都需要相應(yīng)調(diào)整,。
翌圣生物在此技術(shù)上不斷加大投入，力求推出優(yōu)質(zhì)可凍干原料,，幫助客戶從原料上解決凍干難題,。
圖. qPCR反應(yīng)體系的組成示意圖
可凍干酶選擇誤區(qū)
液體體系中篩選出性能*的無甘油酶，用于凍干一定沒有問題
把已有體系中不可凍干的成分去掉就是可凍干體系了
凍干過程能夠?qū)⒉豢蓛龈傻捏w系變?yōu)榭蓛龈审w系
可凍干酶篩選需注意
液體體系中篩選出的性能*的酶,，不一定凍干后性能還是*,，需要多幾款候選酶
酶的氨基酸序列和修飾差異,，會影響酶的空間結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性和凍干耐受性
酶的儲液直接影響酶的穩(wěn)定性,，可凍干酶需要優(yōu)化儲液以保證酶儲存穩(wěn)定
甘油酶去除甘油之后，穩(wěn)定性,、酶活都可能發(fā)生極大變化,，對應(yīng)體系需要重調(diào)
Buffer中不可含有可揮發(fā)和易氧化成分
需對鹽離子濃度進(jìn)行調(diào)試-過高可能造成凍干形態(tài)差；過低可能影響擴(kuò)增性能
凍干可能造成pH值變化,，影響擴(kuò)增性能
高乘數(shù)的試劑利于凍干
凍干原料體系中的保護(hù)劑含量需明確
凍干對酶有一定損傷,，補(bǔ)酶量需調(diào)試
一種無甘油、即用型的分子診斷試劑,，含有耐熱逆轉(zhuǎn)錄酶,、熱啟動Taq DNA聚合酶、反應(yīng)緩沖液,、dNTPs,、氯化鎂以及凍干保護(hù)劑，同時添加了有效抑制非特異性PCR擴(kuò)增的因子和提升多重qPCR反應(yīng)擴(kuò)增效率的因子,。該產(chǎn)品是開發(fā)常溫穩(wěn)定,、可室溫運(yùn)輸儲存、多重RT-qPCR的理想選擇,。
來源：翌圣生物
凍干后依然保持酶活性完整,，性能和液體試劑一樣
凍干后室溫下保存依然穩(wěn)定,，不需要冷鏈運(yùn)輸和低溫儲存
降低成本和操作復(fù)雜性：提供參考凍干工藝，助力凍干流程,；不需要額外添加凍干保護(hù)劑,，可直接用于凍干
部分?jǐn)?shù)據(jù)展示
| 儀器 | 7500 | 體系 | 25 μL |
| 模板 | 假病毒 | 模板濃度 | 105、104,、103 copies/mL |
| 程序 | 50°C 10 min,；95°C 5 min；45 cycles (95°C 15sec,；60°C 15sec) | ||
圖. 13775液體性能：對假病毒模板分別使用高靈敏度版RT-qPCR試劑13110（紅色）和13775（藍(lán)色）試劑進(jìn)行多重RT-qPCR擴(kuò)增,，左為FAM通道，右為VIC通道,。
圖. 13775液體試劑熱穩(wěn)定性37℃ 5 Days：將13775液體試劑置于37℃（綠色）和-20℃（藍(lán)色）條件下5天,，進(jìn)行多重RT-qPCR擴(kuò)增測試，左為FAM通道,，右為VIC通道,。
圖. 13775產(chǎn)品凍干后性能：對假病毒模板分別使用液體試劑（紅色）和13775凍干粉（紫紅色）進(jìn)行多重RT-qPCR擴(kuò)增，左為FAM通道,，右為VIC通道,。結(jié)果表明，凍干后13775試劑活性完好,，且依然具有高效多重反應(yīng)能力,。
圖. 13775凍干粉熱穩(wěn)定性—37℃ 21 Days：將13775凍干粉置于37℃（綠色）和-20℃（藍(lán)色）條件下21天，進(jìn)行多重RT-qPCR擴(kuò)增測試,，左為FAM通道,，右為VIC通道。結(jié)果表明,，凍干粉在37℃放置21天后,，仍有良好的擴(kuò)增效果。
