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TaqMan探針法qPCR原理及其主要應(yīng)用
PART 01
TaqMan探針法qPCR原理
TaqMan探針法qPCR是使用TaqMan熒光探針進(jìn)行熒光檢測(cè)的方法,。其基本原理是PCR擴(kuò)增時(shí)在加入一對(duì)引物的同時(shí)加入一個(gè)特異性的熒光探針,，該探針兩端分別標(biāo)記一個(gè)報(bào)告熒光基團(tuán)和一個(gè)淬滅熒光基團(tuán)。開始時(shí),，探針完整地結(jié)合在DNA任意一條單鏈上,，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收，檢測(cè)不到熒光信號(hào),；PCR擴(kuò)增時(shí),，Taq酶的5'-3'核酸外切酶活性將探針酶切降解，使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離,，從而發(fā)出熒光，切割的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,，因此,，通過檢測(cè)PCR反應(yīng)體系中的熒光強(qiáng)度可以達(dá)到檢測(cè)PCR產(chǎn)物擴(kuò)增量的目的。
圖. TaqMan水解探針作用機(jī)理圖
PART 02
TaqMan探針法qPCR優(yōu)點(diǎn)
1 特異性高,、定量準(zhǔn)確
2 實(shí)驗(yàn)耗時(shí)短
因探針法qPCR的高特異性，故無需再設(shè)置熔解曲線檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物的特異性如何,，大大縮短了實(shí)驗(yàn)時(shí)間,。
3 兼容多重反應(yīng)
不同波長(zhǎng)的熒光報(bào)告基團(tuán)可以標(biāo)記不同的探針，因此可以在同一個(gè)反應(yīng)體系中利用不同熒光標(biāo)記的探針同時(shí)檢測(cè)多個(gè)靶標(biāo),，達(dá)到節(jié)省實(shí)驗(yàn)成本的目的,。
PART 03
TaqMan探針法qPCR主要應(yīng)用
1 核酸定量分析
Taqman qPCR技術(shù)可對(duì)傳染性疾病進(jìn)行定量定性分析,，包括病原微生物或病毒含量的檢測(cè)，轉(zhuǎn)基因動(dòng)植物轉(zhuǎn)基因拷貝數(shù)的檢測(cè),，RNAi基因失活率的檢測(cè)等,。
2 基因表達(dá)差異分析
3 基因型/等位基因分析
單核苷酸多態(tài)性（SNPs）是由DNA序列中同一個(gè)位置上的堿基對(duì)的常見替換造成的個(gè)體DNA序列差異,。SNP在人類基因組中數(shù)量較多,，發(fā)生頻率較高，檢測(cè)單核苷酸多態(tài)性對(duì)于研究個(gè)體對(duì)不同疾病的易感性或者個(gè)體對(duì)特定藥物的不同反應(yīng)有著重要的意義,。
4 藥物開發(fā)研究
5 無創(chuàng)產(chǎn)前檢查
6 腫瘤基因檢測(cè)
盡管腫瘤發(fā)病的機(jī)理尚未清楚,，但相關(guān)基因發(fā)生突變是致癌性轉(zhuǎn)變的根本原因已被廣泛接受,。癌基因的表達(dá)增加和突變，在許多腫瘤早期就可以出現(xiàn),。
目前用此方法已進(jìn)行過端粒酶hTERT基因、慢性粒細(xì)胞性白血病WT1基因,、腫瘤ER基因,、前列腺癌PSM基因、腫瘤相關(guān)的病毒基因等多種基因的表達(dá)檢測(cè),。
7 病原體檢測(cè)
Taqman qPCR可以對(duì)多種病原體（如人類乳頭瘤病毒,、人類免疫缺陷病毒、肝炎病毒,、流感病毒及非洲豬瘟病毒）進(jìn)行定量測(cè)定,。該技術(shù)對(duì)病原體的檢測(cè)解決了免疫學(xué)檢測(cè)的“窗口期"問題，可判斷疾病是否處于隱性或亞臨床狀態(tài),，適用于傳染病早期的大規(guī)模確診。
PART 04
翌圣生物Taqman qPCR Mix在非洲豬瘟病毒檢測(cè)的應(yīng)用
非洲豬瘟是由非洲豬瘟病毒（ASFV）感染家豬或野豬引起的一種急性,、烈性,、高度接觸性傳染病，其發(fā)病率和死亡率可達(dá)100%,，嚴(yán)重危害著全球養(yǎng)豬業(yè),，造成難以估量的經(jīng)濟(jì)損失。
目前非洲豬瘟沒有疫苗和有效的治療手段,，qPCR法是OIE推薦使用的非洲豬瘟常規(guī)診斷的重要工具,，也是中國在現(xiàn)階段非洲豬瘟流行情況下的檢測(cè)技術(shù)。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
• 優(yōu)異的擴(kuò)增靈敏度： 3 copies/反應(yīng)可穩(wěn)定檢出
• 超強(qiáng)的存儲(chǔ)穩(wěn)定性：4℃、25℃,、37℃放置7天,，反復(fù)凍融50次均性能穩(wěn)定
• 精密度高：CV＜1%
• 多平臺(tái)適用：適用于市售各種熒光定量PCR儀
部分性能展示：
PART 05
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品類型 | 產(chǎn)品描述 | 產(chǎn)品名稱 | 貨號(hào) |
探針法qPCR試劑 | 超高靈敏度 | Hieff Unicon® Universal TaqMan multiplex qPCR master mix | 11211ES |
全預(yù)混穩(wěn)定性優(yōu)化版（含UDG） | Hieff Unicon® C55P1 TaqMan Multiplex qPCR Master Mix (UDG plus) | 13171ES | |
高GC含量擴(kuò)增子擴(kuò)增 | Hieff Unicon® TaqMan multiplex qPCR master mix | 11208ES | |
可凍干試劑盒 | Hieff Unicon Lyo-TaqMan Multiplex qPCR Kit | 13695ES |
