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精品推薦 | 快速,、高產(chǎn)的RNA體外合成方法

2021-7-31  閱讀(415)

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利用RNA體外合成(IVT)技術(shù)制備的mRNA疫苗在傳染病的防治上產(chǎn)生了巨大的影響,,無論是其開發(fā)生產(chǎn)周期以及疫苗的安全,、高效性都明顯優(yōu)于傳統(tǒng)疫苗,因此具有極大的發(fā)展?jié)摿?/span>,。


圖1.疫苗接種圖(攝圖網(wǎng))

mRNA疫苗主要是體外合成RNA,,是以DNA為模板通過體外轉(zhuǎn)錄得到,常用的是以線性化質(zhì)粒DNA或PCR擴(kuò)增產(chǎn)物為模板利用RNA聚合酶在體外轉(zhuǎn)錄合成再進(jìn)行修飾獲得,。是利用含有T7啟動子(TAATACGACTCACTATAGGG)或SP6啟動子(ATTTAGGTGACACTATAG)序列的DNA為模板在含有T7或SP6 RNA聚合酶的條件下,,以NTP為底物合成與模板DNA中一條鏈互補的mRNA,簡單快速獲得大量的mRNA分子,,通過在5’端加上帽子結(jié)構(gòu)和3’端加ployA尾加強mRNA的穩(wěn)定性,。

1627294058459067.jpg

圖2.體外轉(zhuǎn)錄(IVT)mRNA生產(chǎn)和裝配過程[1]


體外合成RNA應(yīng)用方向



RNA結(jié)構(gòu)與功能研究


RNAi研究


探針雜交應(yīng)用


mRNA疫苗、藥物開發(fā)


顯微注射

體外合成RNA常見問題和困惑




01
如何獲得所需的轉(zhuǎn)錄模板,?
02
為什么自己配置反應(yīng)體系無論如何優(yōu)化都無法獲得足夠高的產(chǎn)率,?
03
有沒有一款包含全套反應(yīng)試劑的Kit,讓我不再為體系配置而煩惱,?
04
有沒有一款性價比高T7 Kit,,讓費用問題不再是我科研和生產(chǎn)路上的攔路虎?
05
有沒有一款試劑盒適用于多種類型RNA的合成,?
......

翌圣生物開發(fā)出的高性價比的T7高產(chǎn)量體外合成試劑盒包含一整套的RNA合成所需試劑,,并配有詳細(xì)的教程。本試劑盒可以合成長轉(zhuǎn)錄本以及短轉(zhuǎn)錄本,,以1μg的模板投入量可以產(chǎn)生100-200 μg的RNA,,適用于單鏈 RNA合成和以Cap analog為引物合成Capped mRNA。

T7Kit測試數(shù)據(jù)


高濃度的RNA是后續(xù)開發(fā)RNA相關(guān)高產(chǎn)量產(chǎn)品的關(guān)鍵所在,,因此加入高濃度的RNA才能達(dá)到產(chǎn)品高產(chǎn)的效果,。翌圣開發(fā)出的Hifair® T7 High Yield RNA Synthesis Kit以1μg的模板投入量可以產(chǎn)生100-200 μg的RNA,可以*要求,。

1627294107215649.png
1627294122443490.png
圖3.不同目的片段的轉(zhuǎn)錄后電泳圖

1627294173998140.png

圖4.不同目的片段的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)量

在影響RNA相關(guān)產(chǎn)品的質(zhì)量成敗的關(guān)鍵因素中,,合成的RNA的品質(zhì)也是關(guān)鍵一環(huán)。因為合成的RNA的純度(即品質(zhì))不好,,對產(chǎn)品的產(chǎn)率會產(chǎn)生很大影響,。翌圣Hifair® T7 High Yield RNA Synthesis Kit所合成的RNA經(jīng)過安捷倫2100測定,其純度單一,說明合成后的RNA品質(zhì)純度高,,對產(chǎn)品的產(chǎn)率會有很大提升,。

e.png

<不同長度rna轉(zhuǎn)錄>

f.png

(安捷倫2100)

圖5&圖6.不同長度RNA轉(zhuǎn)錄及品質(zhì)測試

翌圣生物提供您簡便、高品質(zhì),、高性價比的T7合成試劑盒以及相關(guān)對應(yīng)產(chǎn)品,,助力您的科學(xué)研究和藥物及疫苗的開發(fā),共同為人類的未來健康事業(yè)奉獻(xiàn)一份力量,。

產(chǎn)品訂購



產(chǎn)品名稱

貨號

規(guī)格

Hifair®T7 High Yield RNA Synthesis Kit

10623ES50/60

50/100 T




相關(guān)產(chǎn)品


產(chǎn)品名稱

貨號

規(guī)格

UCF.ME®T7 RNA Polymerase GMP-grade(1 KU/μL)

10613ES92/97

10/50 KU

UCF.ME®mRNA Vaccinia Capping Enzyme GMP-grade

10614ES84/92

2000/10000 U

UCF.ME®mRNA Cap 2'-O-Methyltransferase GMP-grade

10612ES84/92

2000/10000 U

UCF.ME®DNase I ,RNase-free,GMP-grade

10611ES76/84

500/2000 U

UCF.ME®Murine RNase inhibitor GMP-grade

10621ES10/20

10/20 KU

UCF.ME®Pyrophosphatase,Inorganic GMP-grade

10620ES10/60

10/100 U

T7 RNA polymerase (1 KU/μL)

10617ES92/97

10/50 KU

T7 RNA polymerase (50 U/μL)

10618ES90/96

5000/25000 U

S-adenosylmethionine (SAM)

10619ES02

0.5 mL

GTP Solution(100mM)    

10132ES03

1 mL

NTP Set Solution(ATP,CTP,UTP,GTP,100 mM each)

10133ES03

1 Set (4 vial)

參考文獻(xiàn)

【1】Sergio Linares-Fernández, Céline Lacroix, ,Tailoring mRNA Vaccine to Balance Innate/Adaptive Immune Response,Trends in Molecular Medicine,Volume 26, Issue 3,2020,Pages 311-323,




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