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漲知識！對于PCR你真的知道么,？
PCR技術作為分子生物學基礎的研究方法之一,。20世紀80年代凱利·穆利斯發(fā)明第—代PCR技術以來，“變性,、退火,、延伸"三部曲從未停歇。歷經三十多年的演變,，PCR技術已衍生出眾多變體,。小翊總結了一代PCR的一些常見類型，助力您的科學研究,。
常規(guī)PCR
常規(guī)PCR一般是由Taq DNA聚合酶介導的PCR反應,，操作較為簡便，產物帶有A尾,。通過瓊脂糖凝膠電泳對終產物進行定性和半定量分析,。兼容樣本范圍廣，但保真性低,，主要應用于常規(guī)重組質粒驗證和基因型鑒定等方面,。
常規(guī)PCR產品
產品名稱：2×Hieff® Robust PCR Master Mix (With Dye)
產品特點：
1）延伸速度快（15-30s/kb），極限速度達5s/kb,。
2）模板適用性更廣泛,，靶基因GC耐受范圍35-70%。
圖1. 以小鼠基因組為模板,，分別擴增1-4kb的片段,。
高保真PCR
高保真PCR一般是由保真性較高的DNA聚合酶介導的PCR反應。第—代高保真DNA聚合酶是從棲熱原始菌Pyrococcus furiosus中獲得的具有校正功能的pfu酶,，與常規(guī)Taq酶相比多了一種3’-5’的核酸外切酶活性（Proofreading活性）,，保真性大大提高且擴增的產物通常為平末端,。目前主要有2類產品：一類是混合型的高保真酶，將帶有Proofreading活性的酶與普通Taq酶混合用于提高擴增效率,；另一類是單一型的高保真酶,，保真性更高。
翊圣Hieff Canace® Gold高保真DNA聚合酶基于Pfu,，經基因工程改造而成,。酶溶液中添加了*的反應增強因子、熱啟動因子和延伸因子,，極大提高了擴增的成功率,，特異性和延伸速度。對于高保真PCR應用而言,，具有高保真性,、高成功率、高特異性的Hieff Canace® Gold高保真DNA聚合酶是理想選擇,。
高保真PCR產品
產品名稱：Hieff Canace® Gold PCR Master Mix
產品特點：
1）保真性高,，是Taq酶的52倍，pfu酶的6倍,。
2）超高特異性,。
3）高靈敏：可擴增低至1 pg模板。
圖2. 5種品牌的高保真DNA聚合酶擴增2 kb,，4 kb的小鼠gDNA,。Y：Hieff Canace® Gold高保真DNA聚合酶；A-E：其他品牌的高保真DNA聚合酶,。
熱啟動PCR
熱啟動PCR,，也稱Hotstart PCR。指通過一定條件將DNA聚合酶與其他PCR反應物隔絕,，使其低溫條件下無活性,，高溫加熱后釋放酶活，進而避免出現非特異性產物,。熱啟動PCR的關鍵是熱啟動型的DNA聚合酶,，一般通過抗體、配體或化學修飾等來封閉酶活性中心,，不同的熱啟動修飾方法原理上有所區(qū)別,，各有優(yōu)劣勢（見下表）。通常應用于復雜模板,、低拷貝基因擴增,，也是IVD試劑的核心原料。
酶活封閉類型 | 化學修飾 | 配體修飾 | 抗體修飾 |
原理 | 低溫下,，化學小分子和DNA聚合酶活性中心結合,，酶無活性,；升溫至變性溫度，兩者脫離,，酶活性中心暴露發(fā)生聚合反應,。 | 核酸適配體通過非共價鍵作用與聚合酶結合，進而抑制聚合酶在非許可溫度下的聚合反應,。 | 高溫變性前，抗Taq抗體與Taq酶結合,，抑制聚合酶活性,。溫度升高至變性溫度，抗Taq抗體變性失活,，聚合酶發(fā)生聚合反應,。 |
優(yōu)點 | 酶活性維持更加穩(wěn)定且無任何外源DNA污染，性價比較高,。 | 酶激活時間短,，保證酶活。 | 酶激活時間短,，保證酶活,，親和力強，靈敏度高,。 |
缺點 | 酶激活時間較長可能會影響酶的活性,，導致PCR產物的產量降低。 | 核酸配體是一種可逆抑制劑,，不如化學修飾法穩(wěn)定,，特異不夠強 | 抗體修飾是一種動態(tài)平衡，不如化學修飾法穩(wěn)定,，價格更貴,。 |
熱啟動PCR產品
產品名稱：Hieff UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase （抗體法熱啟動Taq酶）
產品特點：抗體法修飾，親和力強,，靈敏度高,，特異性好。
直擴PCR
直擴PCR技術,，是以未經基因組純化的微量原始樣本或其裂解產物作為模板進行PCR反應,。廣泛適用于血液樣本、植物和動物等組織,，與常規(guī)PCR相比,，樣本用量少、操作簡單,、實驗成本低,、可高通量化操作,。可應用于基因分型,、轉基因鑒定等實驗,。
翊圣直擴PCR系列產品運用*的裂解體系，快速裂解樣品,，裂解液可直接作為模板,，搭配試劑盒中的具有*抑制物耐受性的Taq DNA聚合酶進行基因的擴增。
圖3.組織直擴系列流程圖
小鼠直擴PCR產品
產品名稱：Mouse Tissue Direct PCR Kit (With Dye) 小鼠組織直接PCR試劑盒（Cat#10185）
產品特點：
1）樣本需要量少：5mg鼠組織或1-5mm鼠尾,。
2）模板制備更方便：無需研磨,，無需精提純化gDNA。
3）優(yōu)化的PCR體系：具有更高的特異性,、更強的 PCR 反應抑制物耐受性,。
圖4.適合不同類型的小鼠粗提組織
多重PCR
多重PCR，也稱復合PCR,。反應原理,、反應過程與常規(guī)PCR無異，需要在同一個PCR反應體系中,，使用多對引物對多個基因同時進行擴增,。理論上只要PCR擴增的條件合適，引物對的數量可以不限,，但實際由于各種條件的限制,，實際能夠擴增的產物有限。多重PCR反應體系的組成和PCR循環(huán)的條件需經過優(yōu)化以確保同時擴增多個片段,。具有性,、系統(tǒng)性、經濟簡便性,，難點是反應體系各組分的平衡,。主要用于多種病原微生物的同時檢測或癌基因的分型。
圖5.多重PCR原理圖
多重PCR產品
產品名稱：Hieff® Multiplex PCR Kit
產品特點：
1）擴增子大?。哼m合50bp-1.5kb的擴增子,。
2）均一性好：靶點偏好性極低。
3）特異性強：///大程度抑制非特異性擴增,；
4）靈敏度高：可擴增低至1ng模板,；
5）擴增重數：可達20-1000重。
圖6. 以人gDNA模板,，進行10重PCR,，可檢測低至1ng的模板
巢式PCR
巢式PCR是指利用兩對引物進行兩輪PCR擴增的反應。首先使用目的片段外圍的引物對模板進行擴增,，然后使用內部的巢式引物同時將第—輪PCR擴增產物作為第二輪擴增的模板,。第二次PCR擴增得到的目的片斷短于第—次擴增,。
翊圣GMyc-PCR 支原體檢測試劑盒基于支原體16S-23S rRNA序列保守區(qū)域利用巢式PCR法原理可檢測到常見的支原體污染。主要應用于病毒檢測,、測序分析,、低表達基因檢測等。
巢式PCR產品
產品名稱：GMyc-PCR Mycoplasma Test Kit GMyc-PCR支原體檢測試劑盒
產品特點：檢測多種支原體類型,，檢測限低至單拷貝,。
圖7. 巢式PCR擴增含不同濃度支原體樣品。
降落PCR
降落PCR,，又稱Touch-down PCR,。通過設置PCR程序中的退火溫度,，一般開始時高于預設的Tm值,，隨著反應的進行，退火溫度逐漸降低到Tm值，并終低于該溫度進行PCR反應,。通過反應程序中退火溫度的設置，極大程度上降低了引物與模板的非特異性結合,。主要用于PCR反應程序的優(yōu)化,，提高產物特異性。
常見的PCR類型介紹就到這里了,。當然,，除了上述介紹的PCR形式，還有錨定PCR,、原位PCR等不同的PCR類型,，如感興趣可自行查閱或留言哦！
相關產品*活動
產品類別 | 產品名稱 | 產品編號 | 規(guī)格 | 價格（元） | *（元） |
常規(guī)PCR | 2×Hieff® Robust PCR Master Mix (With Dye) | 10106ES03 | 1ml | 65 | 買30支送30支 買50支送70支 買100支送200支 買300支送800支 |
高保真PCR | 2×Hieff Canace® Gold PCR Master Mix高保真酶預混液 | 10149ES01 | 1ml/5ml | 553/1453 | 1-3支,，144元/支 4-6支,，128元/支 7-10支，120元/支,；11支以上,，112元/支 |
熱啟動PCR | 2×Hieff™ HotStart PCR Genotyping Master Mix (With Dye) | 10108ES03 | 1ml | 75 | 買30支送30支 買50支送70支 買100支送200支 買300支送800支 |
2×Hieff UNICON® HotStart PCR Master Mix (With Dye) | 10111ES03 | 1ml | 96 | 77 | |
直擴PCR | Mouse Tissue Direct PCR Kit (With Dye) 小鼠組織直接PCR試劑盒 | 10185ES50/70 | 50/200T | 323/983 | 買一送一 |
多重PCR | Hieff Multiplex PCR kit | 13279ES50 | 100T/500T | 875/3165 | 875/3165 |
巢式PCR | GMyc-PCR Mycoplasma Test Kit GMyc-PCR支原體檢測試劑盒 | 40601ES10/20 | 10T/20T | 327/557 | 327/557 |
