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mNGS病原微生物檢測完整解決方案

2020-4-27  閱讀(2626)

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      近年來,造成人類感染的病原微生物日益復雜,種類增多,抗菌藥物濫用致使細菌耐藥,,病原微生物已成為關注的焦點。據(jù)WHO統(tǒng)計,,在中國,,感染性疾病占所有疾病的50%以上,。面對重癥感染患者,,能否快速確認感染病原體,成為后續(xù)對癥治療的關鍵,,基于宏基因組新一代測序技術(metagenomics next-generation sequencing, mNGS)為解決這一問題提供了一個可能的突破方向,。
      mNGS具有不依賴于傳統(tǒng)的微生物培養(yǎng),直接對臨床樣本中的核酸進行高通量測序,,能夠快速,、客觀的檢測臨床樣本中的較多病原微生物的特點。
      mNGS的檢測流程可以大致分為5個步驟:核酸提取,、文庫構建,、上機測序、生信分析與報告解讀,。

圖1: mNGS檢測流程圖(Gu W et al. Annu Rev Pathol-Mech.2019.14(1), 319)


Yeasen為 mNGS濕實驗部分(核酸提取,,文庫構建)提供完整解決方案:


解決方案一:核酸提取系列

      Yeasen MolPure®柱式核酸提取系列試劑盒采用MolPure® DNA/RNA Column和新型的溶液體系,適用于從各種反應體系樣品,、多種動植物樣本,、菌體等復雜樣本中高效提取和純化高純度、高質量的核酸,??芍苯佑糜诟鞣N分子生物學實驗。

產品特點
1)適用樣本廣:用于動物組織,、血漿,、血清、淋巴液、培養(yǎng)上清,、分泌物,、拭子、糞便,、牛奶,、尿液等樣品;
2)合并提?。和瑫r提取樣本的DNA與RNA,;
3)提取純度高:采用硅基質材料的離心吸附柱,可提取純度高的病毒RNA/DNA,,質量穩(wěn)定可靠,;
4)滿足多種下游應用:可適用于各種下游應用實驗,如酶切,、PCR,、反轉錄和RT-PCR、NGS等,。

產品性能

  1. 分別驗證小鼠組織,、細菌和糞便中核酸提取的效率,結果顯示Yeasen核酸提取效率高于競品公司,。

 
圖2:小鼠組織(左)細菌和糞便(右)DNA提取瓊脂糖膠圖,,A表示Yeasen試劑盒,F(xiàn),、T,、O表示競品公司

產品詳情

產品類型產品名稱貨號
核酸提取病毒DNA/RNA提取試劑盒MolPure® Viral DNA/RNA Kit 19321ES
組織DNA提取試劑盒MolPure® Cell/Tissue DNA Kit 18700ES
細菌DNA提取試劑盒MolPure® Bacterial DNA Kit 18806ES
糞便DNA提取試劑盒MolPure® Stool DNA Kit18820ES


解決方案二:DNA文庫構建系列

     Hieff NGS® OnePot II DNA Library Prep Kit酶切法DNA建庫試劑盒,擺脫了繁瑣的超聲流程,,操作簡便化,,片段化/末修加A可在一步操作中完成,針對不同樣本(含F(xiàn)FPE)均可以獲得高質量文庫,,尤其滿足病原樣本快速建庫需求,,亦是自動化平臺建庫的首-選。

產品特點
1)實驗流程更精簡:片段化/末修/加A一步完成,,大大縮減建庫時間,;
2)樣本適用范圍廣:適用于痰液,腹水,,腦脊液,,F(xiàn)FPE等各類樣本;
3)適用場景更廣泛:自動化建庫平臺首-選,;
4)酶切可控時間長:僅需調整酶切時間即可得到目標片段,;
5)耐抑制物能力強:對于復雜樣本中的一些抑制物有更好的耐受能力,。

性能展示

  1. 不同模板的質量不均一,采用不同的酶切時間可獲得優(yōu)質文庫,。


產品詳情

平臺類型方法產品名稱貨號
Illumina平臺DNA酶切法酶切法建庫試劑盒Hieff NGS® OnePot II DNA Library Prep Kit for illumina12204ES
配套接頭單端接頭Hieff NGS® Complete Adapter Kit for Illumina®, Set 1,2,3,412615ES- 12618ES
MGI平臺DNA酶切法酶切法建庫試劑盒Hieff NGS® OnePot II DNA Library Prep Kit for MGI®13321ES
配套試劑環(huán)化試劑盒Hieff NGS® Fast-Pace DNA Cyclization Kit for MGI®13341ES
MGI接頭Hieff NGS® Complete Adapter Kit for MGI®, Set 1,2,313360ES-        13362ES


解決方案二:RNA文庫構建系列

      Hieff NGS® Dual-mode RNA Library Prep Kit是翊圣生物推出針對微量RNA構建試劑盒,,可以銜接市面上mRNA純化試劑盒或rRNA去除試劑盒構。本試劑盒提供的所有試劑都經(jīng)過嚴格的質量控制和功能驗證,,zui大程度上保證了文庫構建的穩(wěn)定性和重復性,。

產品特點
1)操作簡便:二鏈合成,末修加A合并為一步,,操作更加簡便,;
2)適用范圍廣:適用于pg級別的微量樣本建庫;
3)病原微生物檢測:適用于不同來源的病原微生物檢測(痰液,,肺泡灌洗液,,腦脊液等低濃度樣本);
4)產品穩(wěn)定:不同生產批次間穩(wěn)定,。

性能展示
1.選取來源于不同人體的痰液和肺泡灌洗液提取的RNA樣本,,經(jīng)rRNA去除之后進行RNA文庫構建,表明低濃度樣本亦可高效建庫,。

樣本信息痰液肺泡灌洗液
RNAA1A2A3A4A5B1B2B3B4B5
擴增前濃度0.5760.3920.3660.8260.5540.6120.5040.3160.3960.482
文庫2次純化后濃度10.88.269.328.6410.86.707.38.96.05.08
產量(ng)216165.2186.4172.8216134146178120101.6
提取樣本濃度較低,,測不出來濃度,且經(jīng)過rRAN去除


產品詳情

平臺類型方法產品名稱貨號
Illumina平臺RNA建庫法Hieff NGS® Ultima Dual-Mode RNA Library Prep Kit for illumina®12252ES
MGI平臺Hieff NGS® Dual-Mode RNA Library Prep Kit for MGI®13332ES


解決方案三:文庫定量系列

dsDNA Assay Kit for Qubit®是Yeasen開發(fā)的專門用于Qubit®熒光儀或熒光酶標儀的試劑盒,,線性范圍0.2-100 ng,,即使在存在ssDNA、RNA和單體核苷酸的條件下,,也可以選擇性的檢測dsDNA,且耐受較高濃度的蛋白質,、鹽類,、洗滌劑等污染物。

產品特點
1)簡便:實驗操作與原裝品牌一致,,5min之內出結果,;
2)靈敏:準確定量0.2-100ng樣本;
3)準確:包含F(xiàn)FPE,、cfDNA等樣本在內的測試誤差均小于10%,;
4)穩(wěn)定:嚴格批次間穩(wěn)定性指控。

性能展示

  1. 可準確定量dsDNA濃度在0.2-100ng的樣本,,且不論在低濃度區(qū)間(0-1ng)或高濃度區(qū)間都能準確定量,。測量值與實際值誤差:1%-10% ;與原裝Life實際定量誤差:1%-15%,。

圖3:  dsDNA Assay Kit for Qubit®測試準確性,。樣品使用標準品,,每個測試3個平行,CV≤5%,。


產品詳情

產品類型產品名稱貨號
文庫定量Qubit定量試劑盒dsDNA HS Assay Kit for Qubit®12640ES
1×dsDNA HS Assay Kit for Qubit®12642ES
qPCR定量試劑盒Hieff NGS® Library Quantification Kit for Illumina®, qPCR Master Mix12302ES


解決方案四:文庫純化系列

       Hieff NGS® DNA Selection Beads基于SPRI (Solid Phase Reverse Immobilization)原理,,配合精心優(yōu)化過的緩沖體系,可用于二代測序文庫構建過程中的DNA///片段分選,、純化,。操作方式與AMPure XP Beads相同,片段回收效率和文庫大小分布亦與AMPure XP Beads高度吻合,。

產品特點
1)操作簡便:無縫替代XP,,實驗操作、文庫大小和產量與XP*一致,;
2)純化分選效果優(yōu)異:純化回收效率高達90%,,精準分選;
3)適用多種樣本:適用于FFPE,、糞便,、gDNA、微生物,、血液等樣本的純化與分選,;
4)通用性廣:兼容各種品牌建庫試劑盒;
5)品質穩(wěn)定:不同生產批次間無差異,。

性能展示

  1. 相同的分選比例,,Yeasen磁珠與XP磁珠分選效果相當。

圖4: 磁珠分選精度與XP對比示意圖


產品詳情

產品類型產品名稱貨號
磁珠純化DNA磁珠Hieff NGS® DNA Selection Beads 分選磁珠(替代AMPure XP Beads)12601ES
RNA磁珠Hieff NGS® RNA Cleaner12602ES



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類別名稱貨號規(guī)格價格
建庫模塊末端修復/加AHieff NGS® UltimaTM Endprep Mix12605ES24/9624/96 T4233/14333
Hieff NGS® Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Module12608ES24/9624/96 T2066/6166
Hieff NGS® Fast-PaceTM DNA Fragmentation Reagent 12609ES24/9624/96 T1462/5362
連接模塊Hieff NGS® UltimaTM DNA Ligation Module12604ES24/9624/96 T3263/10863
Hieff NGS® Fast-Pace DNA Ligation Module 12607ES24/9624/96 T2053/6841
擴增模塊2×Super Canace® II High-Fidelity Mix for Library Amplification12621ES24/9624/96 T583/1783
2×Super Canace®Ⅱ Uracil High-Fidelity Mix for Library Amplification12620ES24/9624/96 T723/1853
2× Ultima HF Amplification Mix for MGI®13344ES24/9624/96T723/1853
環(huán)化模塊Hieff NGS® Fast-Pace DNA Cyclization Kit for MGI® MGI®13341ES16/9616/96 T1853/9253
接頭完整接頭Hieff NGS® Complete Adapter Kit for Illumina®12615/6/7/8ES04/1612×4/12×16 T1256/4536
Hieff NGS® Complete Adapter Kit for MGI®13360ES02/04/968×2/4/100 T353/643/8643
短接頭Hieff NGS®  96 Single Index Primer Kit for Illumina®12611/2ES0248×2 T1493
Hieff NGS® 384 Dual Index Primer Kit for Illumina® 12613/4ES0296×2 T2753
磁珠DNA分選Hieff NGS® DNA Selection Beads12601ES56/7560/450mL6286/26186
定量QubitdsDNA HS Assay Kit for Qubit®12640ES60/76100/500 T686/2696















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