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qPCR實驗易做，但數(shù)據(jù)分析并非想象中的那么容易,！數(shù)據(jù)分析的好與壞,，極大程度上依賴于qPCR原始結(jié)果的質(zhì)量。
qPCR結(jié)果的評價指標(biāo)
•溶解曲線,，是qPCR結(jié)果判定的第—要素,。它的作用是判定目的基因是否得到擴增。理論上,，當(dāng)反應(yīng)體系中僅是目標(biāo)基因的擴增,，才是有效擴增。
•標(biāo)準(zhǔn)曲線,，是qPCR結(jié)果判定的金標(biāo)準(zhǔn),。（在溶解曲線判定為特異性擴增后）它的作用是測定引物的擴增效率及試劑的檢測上下限。根據(jù)文章發(fā)表對于qPCR數(shù)據(jù)的要求,，擴增效率應(yīng)在90-110%,。
•擴增曲線，是直接生成qPCR定量的數(shù)據(jù),，即Ct值,。從試劑對比角度而言，Ct值大小常被用于判定試劑擴增效率的高低,。
產(chǎn)品描述
Hieff Unicon® Power qPCR SYBR Green Master Mix,，這是一款旨在解決諸多qPCR實驗常見疑難問題的qPCR試劑：
•它減少了大量引物驗證的預(yù)實驗工作，是一款具備強引物兼容性的Mix,，
•它明確了qPCR溶解曲線峰型的標(biāo)準(zhǔn)——“單峰的形狀”,，對于“什么溶解曲線是好的溶解曲線”的解讀具有參考意義，
•它讓時間不再碎片化,，1次體系配制,，24 h時間自由支配
產(chǎn)品特點
□引物兼容性強：針對遵循qPCR引物設(shè)計原則設(shè)計的引物，使用Hieff Unicon® Power 引物使用率可達97%,；
□模板加入量靈活：可檢測10-107個拷貝個數(shù)的基因片段,；
□特異性高：標(biāo)準(zhǔn)溶解曲線峰型，有效避免“胖”峰,、“多”峰的出現(xiàn)；
□穩(wěn)定性強：產(chǎn)品經(jīng)50次反復(fù)凍融驗證,，擴增性能無變化,；
□操作靈活：配制好的qPCR反應(yīng)液4℃保存24 h，擴增性能無變化,；
□擴增時間短：每個擴增循環(huán)中，退火、延伸一步完成,，用時15 sec,。
產(chǎn)品性能展示
1. 超高特異性，簡化了qPCR實驗的引物設(shè)計
圖1. Hieff® Unicon Power預(yù)混液實現(xiàn)了引物的高特異性擴增 以293T細胞cDNA為模板,，利用Prime5軟件設(shè)計200bp擴增長度的片段（GC含量：30%-70%）的引物共1000對,，隨機挑選88對，使用Hieff Unicon® Power預(yù)混液測定引物的擴增特異性,。通過溶解曲線分析,，88個檢測片段中有86個（97.7%）目標(biāo)片段有效擴增，說明Hieff Unicon® Power預(yù)混液引物兼容性強,，具備高特異性擴增,、高檢出率的特點。
2. 超高特異性,，保證了Ct值的真實性
圖2. Hieff® Unicon Power預(yù)混液擴增高度特異,，Ct值結(jié)果可信度高 以1 ng人gDNA為模板，使用不同品牌預(yù)混液按照標(biāo)準(zhǔn)擴增程序,，擴增5個目的基因片段,，經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳分析擴增產(chǎn)物情況。結(jié)果顯示Hieff Unicon® Power預(yù)混液針對不同靶標(biāo)基因均可以高特異性擴增,，得到可信的靶標(biāo)片段Ct值,。
3. 檢測范圍寬廣，模板添加不再糾結(jié)
圖3. Hieff® Unicon Power預(yù)混液可有效檢測6個數(shù)量級范圍的模板量 以質(zhì)粒DNA為模板,，10倍梯度稀釋（107-101 拷貝/μl）,，擴增IL23R基因。結(jié)果顯示Hieff Unicon® Power預(yù)混液擴增特異,，線性相關(guān)性高,，可在寬廣的定量區(qū)域內(nèi)獲得良好的線性關(guān)系。
4. 良好的穩(wěn)定性,，讓體系配制更加靈活：
| 凍融次數(shù) | 0次 | 10次 | 30次 | 50次 |
| Ct均值 | 22.97 | 22.87 | 22.99 | 22.84 |
| △Ct | - | -0.09 | 0.02 | -0.12 |
| 4℃保存時間 | 0 h | 24 h | 48 h | 72 h |
| Ct均值 | 22.83 | 22.89 | 23.05 | 23.16 |
| △Ct | - | 0.06 | 0.22 | 0.33 |
圖4. Hieff® Unicon Power預(yù)混液及其配制體系穩(wěn)定性俱佳 以1 ng 人gDNA為模板,，使用Hieff Unicon® Power預(yù)混液在不同凍融次數(shù)或體系配制后4℃放置不同時間條件下，檢測TFRC基因擴增情況,。結(jié)果顯示Hieff Unicon® Power預(yù)混液經(jīng)50次反復(fù)凍融或體系配制后4℃保存24h,，擴增性能無變化（溶解曲線圖數(shù)據(jù)未做展示）。
5. 兼容快速程序與標(biāo)準(zhǔn)程序：
| 30%GC-1號 | 30%GC-2號 | 50%GC-1號 | 50%GC-2號 | 70%GC-1號 | 70%GC-2號 | |
| 標(biāo)準(zhǔn)程序 | 23.4 | 22.79 | 23.79 | 23.52 | 23.23 | 23.60 |
| 快速程序 | 23.29 | 23.04 | 23.8 | 23.57 | 23.48 | 23.52 |
| △Ct | 0.11 | 0.25 | 0.01 | 0.05 | 0.15 | 0.08 |
標(biāo)準(zhǔn)程序 快速程序
95℃ 5 min 95℃ 30 sec
95℃ 10 sec 95℃ 10 sec
60℃ 30 sec 40 Cycles 60℃ 15 sec 40 Cycles
圖6. Hieff® Unicon Power預(yù)混液讓擴增時間大大縮短 以1 ng人gDNA為模板,，擴增不同GC基因片段（30-70%）,，比較Hieff Unicon® Power預(yù)混液在標(biāo)準(zhǔn)程序和快速程序下的擴增效果。結(jié)果顯示Hieff Unicon® Power預(yù)混液可兼容快速擴增程序和標(biāo)準(zhǔn)擴增程序,，使用快速程序可縮短擴增時間,。
常見問題
Q：如何選擇產(chǎn)品,？
A：
| 產(chǎn)品名稱 | 貨號 | 特異性 | 擴增效率 | 靈敏度 | 性價比 |
| Hieff UNICON® Power qPCR SYBR Green Master Mix | 11195ES | ★★★★★ | ★★★★☆ | ★★★☆☆ | ★★★☆☆ |
| Hieff UNICON® qPCR SYBR Green Master Mix | 11198ES | ★★★★☆ | ★★★★☆ | ★★★★☆ | ★★★★☆ |
| Hieff® qPCR SYBR Green Master Mix | 11201ES | ★★★★☆ | ★★★★★ | ★★★☆☆ | ★★★★★ |
Q：Hieff UNICON® Power qPCR SYBR Green Master Mix產(chǎn)品可應(yīng)用于哪些實驗？
A：可用于對特異性要求比較高或較難實現(xiàn)特異性擴增的基因片段,。這款產(chǎn)品極大程度上避免了引物二聚體,、非特異性擴增的出現(xiàn)，特別適合于引物中有單個堿基不同的擴增,。
Q：建議的模板加入量,？
A：20 μL反應(yīng)體系，未經(jīng)稀釋的cDNA加入量建議不超過2 μL,。
Q：試劑如何儲存及保質(zhì)期,？
A：建議-20℃保存，有效期1年,。
訂購信息
| 產(chǎn)品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 | 價格（元） | *（元） |
| Hieff UNICON® Power qPCR SYBR Green Master Mix (抗體法,，No Rox) | 11195ES08 | 5ml | 1653.00 | 663.00 |
| Hieff UNICON® Power qPCR SYBR Green Master Mix (抗體法，Low Rox) | 11196ES08 | 5ml | 1653.00 | 663.00 |
| Hieff UNICON® Power qPCR SYBR Green Master Mix (抗體法,，High Rox) | 11197ES08 | 5ml | 1653.00 | 663.00 |
相關(guān)產(chǎn)品
| 產(chǎn)品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 | 價格（元） | *（元） |
| Hifair® II 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR(gDNA digester plus) | 11123ES60 | 100T | 955.00 | |
| Hieff® qPCR SYBR Green Master Mix (No Rox ) | 11201ES08 | 5 ml | 740.00 | 498.00 |
| Hieff® qPCR SYBR Green Master Mix (Low Rox Plus) | 11202ES08 | 5 ml | 740.00 | 498.00 |
| Hieff® qPCR SYBR® Green Master Mix (High Rox Plus) | 11203ES08 | 5 ml | 740.00 | 498.00 |
HB190306
