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如果你常做WB實驗，結果不穩(wěn)定，沒有筆直的條帶，背景高,，你的救星來了,！這個美譽度非常高的ECL發(fā)光液，我?了3年,，強?推薦,！別看它只是一瓶小小的試劑,，能量卻特別大,，輕輕一滴,，靜等3分鐘，在印跡膜上你會看到一條筆直的白光緩緩發(fā)出,，太漂亮了,，一天做實驗的疲憊感瞬間就消失了。目前市場上的 ECL顯色液質量參差不齊,，如何去挑選適合自己實驗的ECL就顯得特別重要,，以下幾點建議大家反復閱讀并收藏。
01
靈敏度
反映的是ECL顯色液檢出被檢物質低量的能力，用戶可根據樣本中待檢指標的量選擇合適的檢測試劑,，在做實驗前需要對靶蛋白進行文獻調研,。不能盲目選擇靈敏度過高的產品,，例如,，針對GAPDH,，選擇了靈敏度過高的ECL發(fā)光液,，帶來的結果很可能就是顯影得到棕色條帶,。
▲ 圖：高靈敏度ECL對GADPH顯影的影響
02
信號持久度
指的是加入ECL顯色液后,，穩(wěn)定發(fā)光的持續(xù)時間。穩(wěn)定持久的發(fā)光可實現多次曝光以獲得最佳的圖像。由于每張膠片只能使用一次,，在判斷曝光時長是否合適前必須進行顯影,。為了掌握信號和背景之間的平衡，一般都需要按照不同的時長曝光多次。如果膠片過曝了,，信號可能會被背景掩蓋。
▲ 圖：曝光不同時間對顯影的影響
03
抗體稀釋度
一抗和二抗的稀釋度在說明書中一般都會有建議。稀釋度高的話,，相對來說,，可以減少一抗和二抗的消耗,，節(jié)約更多的抗體，且可以降低雜蛋白的影響,。
▲ 圖：二抗不同稀釋倍數對顯影的影響
04
信噪比
指的是正常目的信號與背景信號的比值,，信噪比越高，ECL顯色的背景越低,，目的條帶越清晰,。
▲ 圖：高信噪比與低信噪比ECL對比
05
兼容性
比如對轉印膜、封閉試劑和各種抗體稀釋液等的兼容性,。例如轉印膜有NC膜和PVDF膜,，有些靈敏度不是特別高的ECL，會建議選擇NC膜,。
06
文獻引用
產品的文獻引用數量和高質量的 SCI 文章的引用是很多用戶都關心的問題,，這是業(yè)界對產品認可的一個非常重要指標,，至少其他的科研工作者已經驗證過了該產品的質量，出問題的概率會極低,，而且對相關用戶的科研有一定的借鑒作用,。小翌家的ECL發(fā)光液收集的SCI文獻已經有60篇，且都是高質量期刊,。
▲ 圖：翌圣ECL化學發(fā)光試劑盒文獻引用
07
蛋白表達豐度
很多新手會忽視的關鍵點,，對目的蛋白一知半解，實驗很容易“翻車",。做實驗前首先要了解目的蛋白的細胞定位,、表達特異性、分子量,、異構體,、抗體等？靶蛋白的表達量是否在ECL發(fā)光液的檢測范圍內,？
很多蛋白的表達是有組織特異性的,，例如，最近的熱門靶蛋白CLDN 18.2,，CLDN 18.2蛋白的表達具有組織特異性,，主要在胃和胃腺癌組織中表達。在正常生理狀態(tài)下,，CLDN 18.2僅在胃粘膜上已分化的上皮細胞中表達,，而在其它的健康組織中均無表達。還有一些蛋白,，例如IL6和TFNA等炎癥因子,，如果樣本未做刺激處理，目的蛋白表達含量很低,，WB實驗結果中的條帶可能會很淺,，這種情況下就需要選擇高靈敏度的ECL發(fā)光液來放大信號,。
08
樣本量
在Western Blot實驗時,，由于樣品蛋白難以提取，樣品量有限,，靶標的量在這種情況下可能很低,，成像時通常會出現條帶微弱或檢測不到目標條帶。這會使研究人員需要重復進行實驗,，這既浪費時間又浪費資源,。除了在樣本提取，抗體濃度,，封閉液等方面需要優(yōu)化外,，發(fā)光液ECL也需要選擇靈敏度,，檢測范圍更廣的發(fā)光液，可以讓研究者選擇更少的樣本體積,，產生相同的強信號的結果,。
09
簡便性
底物在保證高質量數據的情況下，實驗時間越短,，操作越便利,，越容易受到用戶歡迎。這也不妨作為選擇ECL發(fā)光液的一個指標,。
▲ 圖:YeasenECL化學發(fā)光試劑盒操作步驟
10
經濟性
國產試劑因為省去不少物流和報關費用,，與國外進口試劑相比價格上有比較大的優(yōu)惠。有很多客戶因為對品牌的信任度問題,，還是選擇國外進口試劑,。但是國產品中找一個美譽度高的品牌，也是一個非常好的選擇,。通過行業(yè)調查公司以及網絡,，相關宣傳資料等可以找到美譽度高的 ECL化學發(fā)光液供應商，這個反映的不僅是產品質量的問題,，對供應商的售前售后服務也是一個非常嚴格的檢驗,。
▲ 圖:Yeasen ECL超敏型底物Super相對品牌T同級別底物，檢測靈敏度更高
有2種型號特別推薦,，普適性非常強的Super ECL,，它是發(fā)光液中的三好學生，靈敏,、穩(wěn)定,、性價比高。MaxiSignal型ECL,，它像靈敏的過敏原,，一點即發(fā)，可以觸動低飛克級的蛋白,，光源長達8個小時,，一下就消除了你的焦慮。
一般的實驗室或者剛開始做預實驗時,，其實會配備2個不同靈敏度的發(fā)光液,。以下這2個ECL基本上可以滿足實驗者的所有需求了。
選購指南
Yeasen | Enhanced ECL 增強型 | Super ECL 超敏型 | SuperDura 持久型 | MaxiSignal 最高靈敏度型 |
適用樣本 | 靶點豐度較高,，常規(guī)蛋白樣本 | 靶點豐度低,， 樣本有限 | 靶點豐度較低， 樣本有限 | 靶點豐度極低,， 樣品珍貴 |
檢測靈敏度 | 中等皮克級 | 低皮克級 | 中等飛克級 | 低飛克級 |
信號持續(xù)時間 | < 2 h | < 12 h | < 24 h | < 8 h |
適用檢測系統(tǒng) | 所有試劑均適用X射線膠片,，CCD成像儀 | |||
一抗稀釋濃度 | 1:1000-1:4000 | 1:1000-1:10000 | 1:1000-1:50000 | 1:5000-1:100000 |
二抗稀釋濃度 | 1:1000-1:4000 | 1:2000-1:10000 | 1:50,000-1:250,000 | 1:100,000-1:500,000 |
推薦用膜 | NC膜 | NC膜或PVDF膜 | NC膜或PVDF膜 | NC膜或PVDF膜 |
存儲穩(wěn)定性 | 室溫1年 | 室溫1年 | 室溫1年 | 4℃ 1年,，室溫半年 |
優(yōu)勢 | 同一級別靈敏度中信號* | 適用于多數WB實驗 | 最長信號持續(xù)時間，極其適用于多次曝光 | 靈敏度,，極其適用于痕量蛋白檢測 |
