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細(xì)胞污染全攻略（含防、治妙招）
我擦……
細(xì)胞又污染了,！
咋整,，快崩潰了！,！
Who can help me! ?。? 君莫急，小翊來幫您,！
專治各種細(xì)胞疑難雜癥,，
小翊送你完整攻略。
攻略一：了解細(xì)胞污染
古人云：知己知彼方可百戰(zhàn)百勝,，因此了解細(xì)胞污染是非常重要的,。常見的污染類型有細(xì)菌污染、真菌污染,、支原體污染,、原蟲污染、黑膠蟲污染,、病毒污染以及非同種細(xì)胞污染,。
1、細(xì)菌：細(xì)菌在普通倒置顯微鏡高倍鏡下大多可見,，根據(jù)感染細(xì)菌種類不同,，呈現(xiàn)不同的外形。其培養(yǎng)基一般會變渾濁,、變黃較快,，對細(xì)胞生狀態(tài)影響明顯。
圖1：細(xì)胞受到細(xì)菌污染圖
2,、真菌：真菌污染在顯微鏡下可以看到絲狀物,，有些真菌開始很像死細(xì)胞碎片，呈珊瑚狀,，隨時間轉(zhuǎn)移會長出黑色絲狀物,。真菌生長的比較慢，一般培養(yǎng)基清亮,，不變色,，不如細(xì)菌易被發(fā)現(xiàn)，一旦發(fā)現(xiàn)有它的存在,，細(xì)胞污染就比較嚴(yán)重了,，也很難救活。
圖2：細(xì)胞受到真菌污染圖
3,、支原體：細(xì)菌和真菌造成的污染相對容易發(fā)現(xiàn),，然而支原體造成的污染很難察覺，即使生長密度高達(dá) 107-109CFU/ml,，也很難有污染跡象（渾濁,、pH變化等）。支原體污染后導(dǎo)致細(xì)胞生長變慢,，狀態(tài)變差,，不會馬上使細(xì)胞致死,，但會影響細(xì)胞內(nèi)的各種參數(shù)，如改變細(xì)胞新陳代謝,，改變DNA轉(zhuǎn)染效率,。支原體感染細(xì)胞以后，細(xì)胞病變不明顯,，只是慢慢si去,。
圖3：細(xì)胞受到支原體污染圖
4、黑膠蟲*：一般低倍鏡下觀察呈黑色點(diǎn)狀,，高倍鏡下可看見黑色物蠕動,，培養(yǎng)液不易變渾濁，在細(xì)胞增殖旺盛之后會減少或消失,。有時也會出現(xiàn)觀測到的運(yùn)動物明顯增多,，細(xì)胞狀態(tài)變差，終死亡,。（*對于黑膠蟲沒有明確的定論,，通常認(rèn)為黑色物是由于多種原因?qū)е录?xì)胞狀態(tài)變差、死亡細(xì)胞產(chǎn)生的碎片）
圖4：細(xì)胞受到黑膠蟲污染圖
5,、原蟲*：該污染在顯微鏡下易觀察到,，輕微活動，細(xì)胞能生長但繁殖速度明顯減慢,，培養(yǎng)基產(chǎn)生渾濁,，細(xì)胞狀態(tài)差，邊緣不清楚,，細(xì)胞不透亮。其能與細(xì)胞共生并爭奪培養(yǎng)基營養(yǎng),，當(dāng)?shù)竭_(dá)一定的數(shù)量時就會影響到細(xì)胞的生長,，導(dǎo)致細(xì)胞死亡。（*對于原蟲污染傾向于是細(xì)菌類污染）
圖5：細(xì)胞受到原蟲污染圖
6,、病毒：由于病毒過小導(dǎo)致培養(yǎng)過程中難以觀察,。由于在獲得原代細(xì)胞過程中沒有*除去潛在的病毒，導(dǎo)致病毒污染,。盡管病毒污染對細(xì)胞原代培養(yǎng)不會造成太大影響,，但對下游工業(yè)生產(chǎn)如生產(chǎn)疫苗等造成安全隱患，因此需要盡量去除,。
圖6：病毒入侵猴肝臟細(xì)胞層圖像（圖 源自悉尼大學(xué)）
7,、非同種細(xì)胞污染 ：這個主要指不同種類細(xì)胞產(chǎn)生的交叉污染，由于細(xì)胞培養(yǎng)過程中不同種類細(xì)胞株 所需器材和溶液沒有嚴(yán)格分開,，導(dǎo)致細(xì)胞交叉污染,。據(jù)報(bào)道,，世界上已有多種細(xì)胞都被HeLa細(xì)胞所污染，致使許多實(shí)驗(yàn)宣告無效,，因此避免非同種細(xì)胞污染也需要引起實(shí)驗(yàn)者的重視,。
圖7：細(xì)胞受到非同種細(xì)胞污染圖
攻略二：污染的去除
細(xì)胞培養(yǎng)過程中難免會遇到細(xì)胞污染，怎么辦,？,？？
多數(shù)污染是較難*去除,，如果污染的細(xì)胞非珍貴且有備用,，宜舍棄;
找到污染源后并清除掉，可復(fù)蘇凍存細(xì)胞或重新購置細(xì)胞培養(yǎng),；
若污染細(xì)胞很珍貴,，一時難覓新，針對不同污染小翊給您如下建議,。
攻略三：污染的預(yù)防
細(xì)胞污染是比較難處理,，因此預(yù)防就顯的尤為重要。對于預(yù)防可從以下幾方面著手：
1,、 使用抗生素：對細(xì)胞培養(yǎng)基使用雙抗（在細(xì)胞培養(yǎng)基中推薦青霉素的工作濃度為100U/ml,，鏈霉素為0.1mg/ml。）
2,、 支原體預(yù)防：可以使用支原體預(yù)防試劑預(yù)防支原體的污染產(chǎn)生,。
3、培養(yǎng)器材,、用品需消毒滅菌：細(xì)胞培養(yǎng)所用器材要清洗消毒,，各種溶液滅菌處理。
4,、實(shí)驗(yàn)操作者的無菌意識
①洗手消毒,，穿隔離衣。工作開始時要用酒精棉球擦手并對器皿進(jìn)行酒精擦拭,；
②操作需在生物安全柜內(nèi)并佩戴口罩,；
③盡量使用一次性無菌器材操作，對于多次使用的需實(shí)高壓滅菌處理,。實(shí)驗(yàn)完畢用酒精擦拭操作臺面,。
5、細(xì)胞交叉污染的預(yù)防
①一次對多種細(xì)胞培養(yǎng)操作時,，所用器具要嚴(yán)格區(qū)分,；
②在進(jìn)行換液或傳代操作時盡量避免液體濺出污染其他細(xì)胞；
③新購細(xì)胞應(yīng)及時留種凍存,，如遇污染可重新復(fù)蘇,。
6,、無菌室或細(xì)胞房的污染預(yù)防
①使用0.1%新潔爾滅對細(xì)胞房或無菌室進(jìn)行全面*擦洗;
②使用紫外燈長時間（0.5-2h）照射；
③使用甲醛熏蒸法,。
