聯(lián)系電話
翌圣生物科技（上海）股份有限公司
初級會員·13年
- 聯(lián)系人：
- 曹女士
- 電話：
- 400-6111-883
- 手機(jī)：
- 售后：
- 4006-111-883
- 傳真：
- 86-21-34615995
- 地址：
- 上海市浦東新區(qū)天雄路166弄1號3樓
- 網(wǎng)址：
- www.yeasen.com
掃一掃訪問手機(jī)商鋪
產(chǎn)品信息
| 產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號 | 規(guī)格 | 儲存 | 價格 |
| Live & Dead Bacterial Staining Kit活細(xì)菌/死細(xì)菌染色試劑盒 | 40274ES60 | 100 T | 4℃避光保存 | 3683.00 |
產(chǎn)品描述
試劑盒內(nèi)含兩種熒光染料DMAO和EthD-III,，可分別將活細(xì)菌和死細(xì)菌染上綠色和紅色。其中DMAO是一種綠色核酸熒光染料,，可染色活細(xì)菌和死細(xì)菌,。EthD-III是一種紅色核酸熒光染料,，僅染色細(xì)胞膜受損的死細(xì)菌。將DMAO和EthD-III混合使用染色時具有完整細(xì)胞膜的細(xì)菌呈現(xiàn)綠色,，而具有受損細(xì)胞膜的細(xì)菌呈現(xiàn)綠色和紅色。結(jié)果可以通過熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀來分析,，適用于大多數(shù)細(xì)菌類型,。
細(xì)菌活力的常見標(biāo)準(zhǔn)是細(xì)菌在合適的營養(yǎng)培養(yǎng)基中繁殖的能力,，稱為生長測定。該試劑盒通常與在液體或固體培養(yǎng)基中的生長測定結(jié)果有著很好的一致性,。在某些條件下，膜損傷的細(xì)菌可能會在營養(yǎng)培養(yǎng)基中恢復(fù)并繁殖，而這種細(xì)菌在該測定中可能會被認(rèn)為死亡,。相反,，一些具有完整膜的細(xì)菌可能無法在營養(yǎng)培養(yǎng)基中繁殖,，但這些細(xì)菌在該測定中可能被認(rèn)為是活的,。因此，如果發(fā)現(xiàn)該檢測和細(xì)菌生長測定之間有相當(dāng)大的差異,，應(yīng)該考慮上述的可能性,。
光譜特性DMAO：Ex/Em=503/530nm（withNDA）,； EthD-III：Ex/Em=530/620nm（withNDA）
產(chǎn)品組分
| 編號 | 組分名稱 | 產(chǎn)品編號/規(guī)格 |
| 40274ES60（100T） | ||
| 40274-A | DMAO | 2 vials (100 μL each) |
| 40274-B | EthD-III | 2 vials (150 μL each) |
運輸與保存方法
冰袋（wet ice）運輸,。儲存于 4ºC,，至少可以儲存6個月。
注意事項
操作時請采取防護(hù)措施,，穿防護(hù)服,、戴一次性手套等,。
使用方法
活、死細(xì)菌樣品對照制備
1. 在液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)4 mL的細(xì)菌至晚期對數(shù)期,。
2. 在EP管中準(zhǔn)備兩份1mL的細(xì)菌液，并在5,000-10,000g條件下離心10-15 min,。
3. 去除上清液,，在其中一支EP管中加入0.3mL的0.85% NaCl重懸細(xì)菌,，在另一管中加入1 mL的0.85% NaCl重懸細(xì)菌。
4. 在含有0.3 mL的0.85% NaCl的管中加入0.7 mL異丙醇,，充分混合（終濃度為70% 的異丙醇）用以制備死細(xì)菌樣品,。
5. 將兩種樣品在室溫下孵育1 h,，每15 min混合一次。
6. 兩種樣品在5,000-10,000g條件下離心10-15 min,。
7. 去除上清，在兩種樣品中加入1 mL的0.85% NaCl重懸細(xì)菌,，并如步驟6再次離心,。
8. 使用分光光度計測定兩種菌懸液在670 nm處的吸光值（OD670）,。
9. 將兩種菌懸液（活的和死亡的）密度調(diào)整到108個細(xì)菌/ mL（OD670≈0.3），然后用0.85% 的NaCl以1：100稀釋,，使終密度為106個細(xì)菌/ mL,。
10. 如下所示混合兩種菌懸液以獲得所需的活細(xì)胞：死細(xì)胞比率,。
表1. 活、死菌懸液按一定體積混合以達(dá)到所需的活細(xì)胞,、死細(xì)胞比例
熒光顯微鏡的染色方法
1. 將1體積的DMAO和2體積的EthD-III在微量離心管中混合，充分混合后加入8體積的0.85% NaCl溶液以得到100×染料溶液,。
2. 每100 μL菌懸液,，加1 μL的100×染料溶液,。
3. 充分混合，室溫下在黑暗中孵育15 min,。
4. 取5 μL染色后的菌懸液滴在帶有18 mm方形蓋玻片的載玻片上。
5. 在熒光顯微鏡下觀察,?；罴?xì)菌和死細(xì)菌的熒光可以在任何標(biāo)準(zhǔn)的FITC長效過濾器下同時觀察到,。或者,，活的（綠色熒光）和死的（紅色熒光）細(xì)菌可以分別用FITC和Cy3（或TexasRed）通道觀察,。
注意：
1) 在對細(xì)菌染色之前，必須注意除去生長介質(zhì)的殘留,。核酸和其他培養(yǎng)基組分可以以某種方式結(jié)合DMAO和EthD-III染料，導(dǎo)致不可接受的染色變化,。簡單的洗滌步驟通常足以從細(xì)菌懸浮液中除去干擾介質(zhì)組分,。不建議使用磷酸鹽緩沖液，因為它們會降低染色效率,。
2) 在開始正式實驗前應(yīng)調(diào)節(jié)染料濃度來使DMAO標(biāo)記活細(xì)菌、使EthD-III標(biāo)記死細(xì)菌進(jìn)行區(qū)分,。*濃度可能因細(xì)菌菌株的不同而異,。一般使用能夠提供充足信號的低染料濃度,。以下條件針對大腸桿菌活/死細(xì)胞染色進(jìn)行了優(yōu)化。
細(xì)胞流式的染色方法
實驗開始前,，請閱讀熒光顯微鏡染色步驟下的注意事項。
1. 根據(jù)表1,，在EP管中加入11種不同比例的活細(xì)菌和死細(xì)菌,。11種樣品中每種的體積1 mL,。
2. 將12 μL的DMAO儲備溶液與24 μL的EthD-III儲備液在微量離心管中混合。11個樣品中的每個加入3 μL的混合染料,，通過上下吹打幾次*混合,。（注意：需要準(zhǔn)備另外的對照細(xì)菌樣品用于單獨的DMAO和單獨的EthD-III染色）
3. 室溫下在黑暗中孵育15 min,。
4. 使用流式細(xì)胞儀分析每個樣品，使用DMAO陽性細(xì)胞的FITC通道和EthD-III陽性細(xì)胞的PI或PE通道,。
