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制備型超高速離心機的分離方法介紹

閱讀:2513      發(fā)布時間:2018-6-20
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制備型超高速離心機的幾種分離方法: 

A.差速離心:逐次增加離心力,,每次可沉降樣品溶液中的一些組份。 
  差速離心是一種常用的方法,。在這種方法中,,離心管在開始時裝滿了均一的樣品溶液。通過在一定速度下一定時間的離心后,,就可得到兩個部份:沉淀和上清液。 
  通常在次離心時把大部分不需要的大粒子沉降去掉,。這時所需的組份大部分仍留在上清液中,。然后將收集到的上清液以更高速度離心,把所需的粒子沉積下來,。離心的時間要選擇得當,,使大部份不需要的更小的粒子仍留在上清液中。對于得到的沉淀和上清液可以進行進一步的離心,,直到達到所需要的分離純度為止,。 
  差速離心的特點是操作簡單,但分離純度不高,。 

B.密度梯度離心法:可以同時使樣品中幾個或全部組份分離,,具有很好的分辨率。 
1)速率區(qū)帶法(rate zonal): 
  根據(jù)樣品中不同粒子所具有的不同的尺寸大小及沉降速度(S),。大致步驟如下: 
  在離心管中裝入密度梯度溶液,,溶液的密度從離心管頂部至底部逐漸增加(正梯度)。 
  將所需分離的樣品小心地加至密度梯度溶液的頂部,。樣品在梯度溶液表面形成一負梯度,。 
  由于不同大小的粒子在離心力作用下,在梯度中移動的速度不一樣,,所以經(jīng)過離心后會形成幾條分開的樣品區(qū)帶,。 
  注意:樣品粒子的密度必須大于梯度液注中任一點的密度,。離心過程必須在區(qū)帶到達管子底部前停止。 
2)等密度離心法(isopycnic): 
  根據(jù)粒子的不同密度來分離,。離心過程中,,粒子會移至與它本身密度相同的地方形成區(qū)帶。 
  密度樣度的選擇要使梯度的范圍包括所有待分離粒子的密度,。樣品可以在密度梯度液粒上面或均勻分布在密度梯度中,。經(jīng)離心后,樣品粒子達到它們的平衡點,。注意:平衡后粒子的分離由其密度決定,,與時間無關,此時再改變離心轉(zhuǎn)速,,只能改變區(qū)帶的相對位置,。

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