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在生命科學領域,，隨著科研水平和實驗手段不斷的提高,，熒光染色方法以其特異性強,，使用相對于放射性元素更安全，檢測越來越靈敏等特點,，受到越來越多的研究人員的認可,，并且在實驗室中廣泛應用，成為經(jīng)常性的實驗方法,。
檢測熒光方法和手段根據(jù)不同的實驗要求和目的也多種多樣,，使用zui多的還是熒光顯微鏡，熒光酶標儀,，流式細胞儀等,。但是，無論何種儀器,，無論儀器的性能如何,，要得到準確的實驗結果，準確的實驗數(shù)據(jù),，zui基本的條件就是根據(jù)所使用的熒光染料正確設置激發(fā)和發(fā)射波長,。
顯微鏡熒光激發(fā)塊

下面我們以熒光顯微鏡的熒光濾色鏡為例，介紹一下濾色鏡組的構造以及根據(jù)染料,，如何正確選擇濾色片,。
熒光激發(fā)塊是熒光顯微鏡中用來激發(fā)熒光標本和觀察熒光的核心部件，它實際是濾色片的組合,，一般含有3種濾色片:
1. 激發(fā)濾色片（Exciter Filter）：選擇透過某個波段的光,，來激發(fā)熒光染料。
2. 分色鏡 （Dichroic Mirror）：反射激發(fā)光,，透過熒光,，一般激發(fā)光波長短，而發(fā)射光波長較長,。
3. 發(fā)射濾色片(Barrier Filter) ：透過發(fā)射光,，也就是我們看到的“熒光”。同時阻擋各種雜散光和激發(fā)光的反射光,。

根據(jù)熒光觀察的原理—熒光染料吸收特定波長的光（即激發(fā)光）,，躍遷到激發(fā)態(tài)，然后再釋放出特定波長的發(fā)射光（即熒光）,，回到基態(tài),。由此可知熒光染料所需的激發(fā)光和釋放的熒光都是特定波長的，所以需要利用各種濾色片來選擇性的透過某種特定波長的光來實現(xiàn)熒光觀察,。否則,，就會出現(xiàn)激發(fā)不了，激發(fā)了卻看不到或串色的現(xiàn)象,。所以選擇合適的濾色片非常重要,！
下面我們以熒光染料DAPI為例,，闡述該如何選擇熒光激發(fā)塊。

根據(jù)熒光觀察的原理—熒光染料吸收特定波長的光（即激發(fā)光）,，躍遷到激發(fā)態(tài),，然后再釋放出特定波長的發(fā)射光（即熒光），回到基態(tài),。由此可知熒光染料所需的激發(fā)光和釋放的熒光都是特定波長的,，所以需要利用各種濾色片來選擇性的透過某種特定波長的光來實現(xiàn)熒光觀察。否則,，就會出現(xiàn)激發(fā)不了,，激發(fā)了卻看不到或串色的現(xiàn)象。所以選擇合適的濾色片非常重要,！
下面我們以熒光染料DAPI為例,，闡述該如何選擇熒光激發(fā)塊。