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細(xì)胞培育實(shí)驗(yàn)中合適的細(xì)胞培養(yǎng)基和血清怎樣選擇,？
閱讀：1226 發(fā)布時(shí)間：2013-10-10
細(xì)胞培育實(shí)驗(yàn)中合適的細(xì)胞培養(yǎng)基和血清怎樣選擇,？
細(xì)胞培育是試驗(yàn)室里常見和基本的實(shí)驗(yàn),，但是不是簡單的。別以為細(xì)胞培育是一件簡單的事,，這里也蘊(yùn)藏著許多學(xué)問,。有的時(shí)候細(xì)胞狀況不好的話，會(huì)導(dǎo)致轉(zhuǎn)染,、藥篩這些實(shí)驗(yàn)底子沒辦法做,。影響細(xì)胞培育的因素有很多，我們先從培養(yǎng)基和血清開始說,。
經(jīng)典的細(xì)胞培養(yǎng)基有很多種,，例如Invitrogen（GIBCO）、Thermo Fisher（HyClone）,、Sigma等公司都可以提供,。DMEM、RPMI 1640,、MEM,、DMEM/F12都是運(yùn)用廣泛的。其他的例如M199、IMDM,、L15培養(yǎng)基等也用于某些細(xì)胞的培育,。
◆MEM是由Eagle’s基礎(chǔ)培育基（BME）開展而來的，其間添加了成分的規(guī)格及濃度,。
◆Dulbecco改進(jìn)的BEM（DMEM）培養(yǎng)基是專為小鼠成纖維細(xì)胞準(zhǔn)備的,，常用于貼壁細(xì)胞的培育。DMEM中氨基酸濃度是MEM的兩倍,，維生素濃度是MEM的4倍,，選用雙倍的HCO3-和CO2濃度可以起到十分好的緩沖效果。開端的配方中葡萄糖含量為1000 mg/L,，后來為了滿足某些細(xì)胞的成長需求,，將葡萄糖含量調(diào)整為4500 mg/L，這就是我們常說的低糖和高糖了,。
◆aMEM含有附加的氨基酸,、維生素以及核苷和脂肪酸，它可以廣泛用于各種細(xì)胞類型,，包括對(duì)營養(yǎng)成分需求嚴(yán)苛的細(xì)胞。
◆Ham’s F12是為在低血清濃度下克隆CHO細(xì)胞而規(guī)劃的,，如今也廣泛運(yùn)用于克隆構(gòu)成率的剖析及原代培育,。F12還能夠與DMEM等體積混合運(yùn)用，得到一種高濃度與成分多元化相的產(chǎn)品,，這種培養(yǎng)基已運(yùn)用于許多原代培育及更難養(yǎng)的細(xì)胞系的培育,。
◆RPMI 1640培養(yǎng)基是用于淋巴細(xì)胞培育的，如今已廣泛用于懸浮細(xì)胞的培育,。
曾經(jīng)常常聽到有人問,，這種細(xì)胞該用哪一種培養(yǎng)基呢?其實(shí)這個(gè)疑問的答案可以很簡單，也可以很復(fù)雜,。若是這種細(xì)胞是購自ATCC或其他的細(xì)胞庫,，那很簡單，問供貨商就行了,?；?/span>參考有關(guān)的文獻(xiàn)。Invitrogen上有一個(gè)Cell Line Database的東西,，也很好用,。挑選你感興趣的細(xì)胞類型，它就會(huì)顯示相應(yīng)的培養(yǎng)基,、血清和轉(zhuǎn)染試劑等,，有時(shí)還有優(yōu)化好的轉(zhuǎn)染進(jìn)程，很方便,。Sigma上也有一個(gè)Media Expert,，包括培養(yǎng)基一切成分的功用描繪,、運(yùn)用推介和參閱文獻(xiàn)等，它仍是一個(gè)解決問題的能手,，關(guān)于細(xì)胞培育中的常見疑問,，如細(xì)胞貼壁欠好、培養(yǎng)基變色等,，它都會(huì)列出相應(yīng)的緣由,，并提供解決的辦法。
如果你是準(zhǔn)備樹立一種全新細(xì)胞的培育體系,，并且找不到任何參閱,，那你就得花時(shí)間自己實(shí)驗(yàn)了。在MEM中培育的細(xì)胞,，很能夠在DMEM或M199中成長,。總之,，MEM做貼壁細(xì)胞培育,、RPMI 1640做懸浮細(xì)胞培育是一個(gè)好的開始。你也可以購買多種培養(yǎng)基,，然后花大概兩周的時(shí)間先做一個(gè)比較簡單的細(xì)胞成長試驗(yàn),，然后從中挑選合適的。
以前大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室都是用干粉培養(yǎng)基,，但是制作的過程比較麻煩,，需要溶解、調(diào)節(jié)pH值,，過濾,，在此過程中還會(huì)發(fā)生濃度誤差，而且有些實(shí)驗(yàn)室的水質(zhì)并不抱負(fù),，所以培育的效果會(huì)有差別,。如果使用液體培養(yǎng)基，這種人為的誤差會(huì)降低,。可能你會(huì)覺得液體培養(yǎng)基比較貴,，以前是這樣，但是現(xiàn)在不一樣了,。HyClone和Invitrogen都在國內(nèi)建立了液體培養(yǎng)基的生產(chǎn)基地,，生產(chǎn)和運(yùn)輸的成本大大下降，所以如今的價(jià)格也比較便宜,，比干粉培育基貴不了多少,，而且還幫你省了過濾器和時(shí)間。
血清富含成長因子，可以推進(jìn)細(xì)胞的繁衍,，富含的附著因子可推進(jìn)細(xì)胞的貼壁,，一起還具有抗胰酶活性。血清也是礦物質(zhì),、脂類及激素的重要來源,。常用的血清有小牛血清、重生牛血清,、胎牛血清和馬血清等,。牛血清是按照采血時(shí)間的早晚來分類的。采血時(shí)間越早,，營養(yǎng)物質(zhì)越豐富,，所含抗體也越少，因而胎牛血清適合需求高的細(xì)胞系和克隆化培育,。由于瘋牛病的原因,，到目前為止，中國政府依然制止從北美洲,、歐洲和日本等地區(qū)進(jìn)口牛血清,，因此國內(nèi)市面上的牛血清大多來自澳洲、南美洲,，或是國產(chǎn)的,。
細(xì)胞培育實(shí)驗(yàn)中合適的細(xì)胞培養(yǎng)基和血清怎樣選擇？