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細胞分離試劑盒的選擇方法及工作原理
閱讀：1010 發(fā)布時間：2013-8-16怎樣選擇合適的細胞分離試劑盒
從樣品中別離提純同種細胞,，是許多下游應用的要害重要的一步,，分離得到的細胞能夠用于基因判定、細胞計數(shù),、生化剖析,、蛋白別離、宿主-病原體互作以及細胞間相互作用等研究,。一款適宜的細胞分離試劑盒能夠說是試驗成功的保證,，因為只要取得正確的細胞，下游的分析成果才能夠更,。當前,，市面上有多種多樣的分離試劑盒可供挑選，它們的首要差異在于分離辦法和篩選標志,。那么,，怎么挑選合適自己的細胞分離試劑盒呢？期望這篇文章能為你供給一些幫助,。
正向選擇VS負向選擇
細胞分離試劑盒的工作原理
細胞分離試劑盒的工作原理主要有兩種,，正向選擇和負向選擇。正向選擇的試劑盒,，使用與目標細胞直接結合的抗體來進行捕獲,。這種抗體通常與磁珠相連，能夠利用磁鐵將懸液中的抗體-磁珠-細胞復合物提取出來,，再經(jīng)過二抗將磁珠與目標細胞分開,。負向選擇的試劑盒也選用相似的抗體包被磁珠，不過這種試劑盒是經(jīng)過去掉樣品中的非目標細胞，來直接捕獲目標細胞,。
這兩種細胞分離試劑盒怎么取舍,，首先取決于目標細胞的外表是不是具有特異性強的篩選標志。這樣的篩選標志能夠完成特異性的捕獲,，防止所取得的細胞被非目標細胞污染,。若是你的目標細胞剛好具有這樣的篩選標志，那么正向選擇的細胞分離試劑盒即是佳挑選,。但如果目標細胞并不具有特異性強的篩選標準,，那咱們還是選用負向選擇的細胞分離試劑盒。
篩選標志的斷定
經(jīng)過PubMed等數(shù)據(jù)庫中的文獻,，我們通常能夠斷定在目標細胞上表達的篩選標志,。若是文獻中找不到合適自己的表面標志，我們還能夠用目標細胞的DNA序列進行BLAST查找,。BLAST查找結果會顯示,，目標細胞上能夠表達的表面標志，在此基礎上能夠選擇用于捕獲的細胞外表蛋白,。舉例來說,，對一個T細胞進行BLAST查找，結果會顯示該細胞是不是表達CD4或CD8,。在得知目標細胞表達CD4之后,，我們能夠先對樣品進行一個免疫試驗（如ELISA），以查驗BLAST查找的成果,。一旦證明目標細胞確實表達CD4,，我們就能夠用相應試劑盒來挑選CD4陽性的T細胞。
一般流程
關于一個旨在別離CD4陽性T細胞的試劑盒來說,，操作流程首要有以下幾步,。首先,，將樣品與anti-CD4抗體包被的磁珠一同孵育,，使抗體與CD4+ T細胞結合。然后洗去不需要的非目標細胞（即不表達CD4的細胞）,，留下磁珠-抗體-細胞復合物,。將上述復合物與能結合anti-CD4抗體的二抗一同孵育，二抗就會代替CD4+T細胞,，形成磁珠-抗體-二抗復合物,。我們能可以磁鐵去除這種磁珠-抗體-二抗復合物，而所有的CD4+細胞留在上清中,。后,，只需要將上清轉移就能可以進行現(xiàn)有研究了。