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ELISA試劑盒是一種十分常用的定性定量檢測方法,，人體和動物、體外細胞培養(yǎng)中80％以上蛋白定量都使用其作為檢測的方法,。ELISA試劑盒價格一般非常昂貴,，但各家試劑公司的試劑盒質(zhì)量卻魚龍混雜。ELISA試劑盒既有用于科研的,，也有用于臨床診斷的,。應用于臨床診斷的試劑盒必須通過衛(wèi)生部門的許可，國家對用于臨床診斷的試劑盒有相當嚴格的規(guī)定和要求,，并制定出了相關的規(guī)則來管理試劑盒的質(zhì)量,。

 

1. 試劑盒的名稱：ELISA試劑盒名稱一般由“（物種）＋（測定指標）＋酶聯(lián)免疫試劑盒（ELISA）”,，物種和測定指標不能混淆，否則買錯了就是你的事情,；另外有的試劑盒說明書試劑盒名稱明顯與寫在試劑盒上的名稱不符,，這要引起你的警惕。

2. 用途：應用于科研還是臨床診斷,，用于臨床診斷的要有衛(wèi)生部的批準文號,。

3. 測定原理：現(xiàn)在ELISA試劑盒除了是測定抗體的以外，一般使用的是雙抗體夾心法,，這種方法大多數(shù)用的是增強的雙抗體夾心法,，即使用生物素-親和素系統(tǒng)，還有少數(shù)的指標可能使用競爭法,，這類方法適用于半抗原的測定,。具有復雜結構的多表位蛋白抗原，其雙抗體夾心法中的一個抗體必須用單抗,。當然如果兩個都是單抗（這兩個單抗針對不同表位）,，那么測定的線性范圍就較寬，試劑盒性能就較好,；一個用單抗,，一個用多抗，測定的靈敏度會更高,。某些簡單的化合物用ELISA測定時,，因為沒有兩個或以上的表位，一般只能作為半抗原,，只能用競爭法測定,。如果發(fā)現(xiàn)有測定簡單化合物（如雌激素、NO,、地高辛等）用雙抗體夾心法作測定原理時,，這個試劑盒你就要懷疑了,。另外還要說明一步雙抗體夾心法與兩步雙抗體夾心法的區(qū)別。一步雙抗體夾心法的吸光度-劑量曲線呈鐘形,，隨著待則標本中抗原濃度的增加而升高至一定程度后,，測定吸光度即隨抗原濃度的增加而開始下降直至不顯色，即所謂的“鉤狀效應”（hook eHect）,，也就是我們在免疫沉淀試驗中所稱的“帶現(xiàn)象”（zone phenomenon）,。所以當使用一步雙抗體夾心法時，樣品濃度太高,，有時會出現(xiàn)測不出來的現(xiàn)象，此時要作適當?shù)南♂尣拍軠蚀_測定,。

4. 試劑盒的組成：用雙抗體夾心法作為測定的方法時,，試劑盒的組成一般包括：已包被單抗的酶標板：一塊，有96孔的,，也有48孔的,，可拆缷，外面有鋁箔袋密封,，打開后有干燥劑,，實驗時暫未使用的酶標條要連帶干燥劑密封好，放在4℃冰箱中妥善保存,。而應用于科研的試劑盒,，國家則沒有出臺相關的質(zhì)量管理規(guī)定，因此試劑盒質(zhì)量也就無法保障,。在這種情況下,，許多劣質(zhì)的試劑盒在市面泛濫，不少同行為此浪費了大量的時間和金錢,，卻沒有得到一個良好的實驗結果,。下面給戰(zhàn)友們介紹一下如何判斷試劑盒的質(zhì)量，選購好的試劑盒,。

 

ELISA質(zhì)量保證是一個復雜的過程,，許多重要的環(huán)節(jié)都影響到檢測的質(zhì)量：
一、操作因素對ELISA結果的影響
ELISA操作步驟復雜,，操作不當會產(chǎn)生較大的誤差,。
產(chǎn)生較大誤差的影響因素有：
1.加樣
2.溫育
3.洗滌
4.顯色
5.比色

二、灰區(qū)的設置通常情況下,，ELISA定性實驗以“陽性”和“陰性”來衡量結果,，兩者間有一條分界線被稱為“陽性判斷值”（cut-off value，CO值）,，這是定性免疫測定結果報告的依據(jù),。

三,、標本復查ELISA手工檢測過程復雜，影響因素較多,，即使室內(nèi)質(zhì)控在控,，也可能因孔間差異而造成結果的差異，因此加大復查力度是保證結果準確性的可靠方法,，比如對HBsAg,、HBeAg、HCV-Ab,、HIV-Ab,、TP-Ab等項目的可疑、弱陽性標本及少見模式的檢測結果進行復查,。

四,、結果判斷和報告常用下列幾種方法表示結果：
1.定性測定
2.半定量測定 結果一般以滴度表示。
3.定量測定 即用已知量的標準品作一系列稀釋后進行ELISA測定,，繪制標準曲線,，結果以量或單位表示。在ELISA定量檢測中每一塊反應板都必須繪制相應的標準曲線,。
4.結果報告