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小鼠免疫球蛋白A酶聯(lián)免疫分析 試劑盒使用說明書
閱讀：1140 發(fā)布時間：2016-12-1| 提 供 商 | 上海哈靈生物科技有限公司 | 資料大小 | 33.8KB |
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小鼠免疫球蛋白A(IgA)酶聯(lián)免疫分析（ELISA）
試劑盒使用說明書
本試劑僅供研究使用目的：本試劑盒用于測定小鼠血清,，血漿及相
關液體樣本中免疫球蛋白A(IgA)含量,。
實驗原理：
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中小鼠免疫球蛋白A(IgA)水平。用純化的抗-IgA
抗體包被微孔板,，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入小鼠免疫球蛋白A(IgA)，
再與HRP 標記的羊抗小鼠抗體結合,，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,，經過*洗滌后加
底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉化成藍色,，并在酸的作用下轉化成終的黃色,。
顏色的深淺和樣品中的免疫球蛋白A 呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD
值）,，通過標準曲線計算樣品中小鼠免疫球蛋白A(IgA)濃度,。
試劑盒組成：
試劑盒組成48 孔配置96 孔配置保存
說明書1 份1 份
封板膜2 片（48） 2 片（96）
密封袋1 個1 個
酶標包被板1×48 1×96 2-8℃保存
標準品：720ng/ml 0.5ml×1 瓶0.5ml×1 瓶2-8℃保存
標準品稀釋液1.5ml×1 瓶1.5ml×1 瓶2-8℃保存
酶標試劑3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存
樣品稀釋液3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存
顯色劑A 液3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存
顯色劑B 液3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存
終止液3ml×1 瓶6ml×1 瓶2-8℃保存
濃縮洗滌液（20ml×20 倍）×1 瓶（20ml×30 倍）×1 瓶2-8℃保存
樣本處理及要求：
1.血清：室溫血液自然凝固10-20 分鐘，離心20 分鐘左右（2000-3000 轉/分）,。仔細收集上
清,，保存過程中如出現沉淀，應再次離心,。
2.血漿：應根據標本的要求選擇EDTA,、者檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20 分鐘后,，
離心20 分鐘左右（2000-3000 轉/分）,。仔細收集上清,，保存過程中如有沉淀形成，應該再
次離心,。
3.尿液：用無菌管收集,，離心20 分鐘左右（2000-3000 轉/分）。仔細收集上清,，保存過程中
如有沉淀形成,，應再次離心。胸腹水,、腦脊液參照實行,。
4.細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集,。離心20 分鐘左右（2000-3000 轉/
分）,。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時,，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液,，細胞濃
度達到100 萬/ml 左右。通過反復凍融,，以使細胞破壞并放出細胞內成份,。離心20 分鐘
左右（2000-3000 轉/分）。仔細收集上清,。保存過程中如有沉淀形成,，應再次離心。
5.組織標本：切割標本后,，稱取重量,。加入一定量的PBS，PH7.4,。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)?br />用,。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4）,，用手工或勻漿器將
標本勻漿充分。離心20 分鐘左右（2000-3000 轉/分）,。仔細收集上清,。分裝后一份待檢測，
其余冷凍備用,。
6. 標本采集后盡早進行提取,，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗,。若不能馬上
進行試驗,，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融.
7. 不能檢測含NaN3 的樣品，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。
操作步驟
1. 標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔10 孔,，在*、第二孔中分別加標
準品100μl,，然后在*,、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻,；然后從*孔,、第二
孔中各取100μl 分別加到第三孔和第四孔，再在第三,、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,，
混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl 棄掉,，再各取50μl 分別加到第五,、第六孔
中，再在第五,、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,，混勻；混勻后從第五,、第六孔中各
取50μl 分別加到第七,、第八孔中，再在第七,、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,，混
勻后從第七、第八孔中分別取50μl 加到第九,、第十孔中,，再在第九第十孔分別加標準
品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl 棄掉,。（稀釋后各孔加樣量都為50μl,，
濃度分別為480ng/ ml，320ng/ ml ,，160ng/ ml,，80ng/ ml， 40ng/ ml）,。
2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑,，其余各步操作相同）、待測樣
品孔,。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測樣品10μl（樣
品終稀釋度為5 倍）,。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混
勻,。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。
4. 配液：將30（48T 的20 倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T 的20 倍）倍稀釋后備用,。
5. 洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體，甩干,，每孔加滿洗滌液,，靜置30 秒后棄去，如此
重復5 次,，拍干,。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外,。
7. 溫育：操作同3,。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl,，終止反應（此時藍色立轉黃色）,。
11. 測定：以空白空調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）,。測定應在加終止
液后15 分鐘以內進行,。
注意事項：
1． 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未
用完,，板條應裝入密封袋中保存,。
2． 濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶,，洗滌時不影響結果,。
3． 各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性,，以避免試驗誤差,。一次加樣時間
控制在5 分鐘內，如標本數量多,，推薦使用排槍加樣。
4． 請每次測定的同時做標準曲線,，做復孔,。如標本中待測物質含量過高（樣本OD 值
大于標準品孔*孔的OD 值）,，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n 倍）后再測定，計
算時請后乘以總稀釋倍數（×n×5）,。
5． 封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染。
6． 底物請避光保存,。
7． 嚴格按照說明書的操作進行,，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
8． 所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理,。
9． 本試劑不同批號組分不得混用,。
10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準,。
計算：
以標準物的濃度為橫坐標,，OD 值為縱坐標，
在坐標紙上繪出標準曲線,，根據樣品的OD
值由標準曲線查出相應的濃度,；再乘以稀釋
倍數；或用標準物的濃度與OD 值計算出標
準曲線的直線回歸方程式,，將樣品的OD 值
代入方程式,，計算出樣品濃度，再乘以稀釋
倍數,，即為樣品的實際濃度,。
（此圖僅供參考）
試劑盒性能：
1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數R 值為0.92 以上。
2.批內與批見應分別小于9%和15%
檢測范圍：
25ng/ ml -500ng/ ml
保存條件及有效期：
1.試劑盒保存：,；2-8℃,。
2．有效期：6 個月