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組織乙酰輔酶A羧化酶活性光度法定量 檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說明書
閱讀：1757 發(fā)布時(shí)間：2015-8-25| 提 供 商 | 上海哈靈生物科技有限公司 | 資料大小 | 42.8KB |
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| 資料類型 | WORD 文檔 | 瀏覽次數(shù) | 1757次 |
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主要用途
組織乙酰輔酶A羧化酶（ACETYL-COA CARBOXYLASE）活性光度法定量檢測(cè)試劑是一種旨在通過底物乙酰輔酶A和碳酸氫鹽受到乙酰輔酶A羧化酶的催化反應(yīng)后,，進(jìn)而由丙酮酸激酶和乳酸脫氫酶連續(xù)循環(huán)法反應(yīng)系統(tǒng),，測(cè)定產(chǎn)生ADP過程中，伴隨的還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）的氧化反應(yīng),， 即采用光度法測(cè)定其氧化后峰值的變化,，以分析組織裂解樣品中乙酰輔酶A羧化酶活性的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的,。其適用于各種組織裂解萃取液樣品（動(dòng)物,、人體）、部分或*純化酶樣品中乙酰輔酶A羧化酶活性的定量檢測(cè),，以及抑制劑和激活劑的篩選,。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌，即到即用,，操作簡(jiǎn)捷,，性能穩(wěn)定，高度敏感,。
技術(shù)背景
乙酰輔酶A羧化酶（Acetyl CoA Carboxylase；ACC,；EC6.4.1.2）,，又稱為乙酰輔酶A碳酸氫鹽連接酶（Acetyl CoA：bicarbonate ligase-ATP），是ATP依賴性含生物素酶,，參與脂肪酸生物合成,。哺乳動(dòng)物乙酰輔酶A羧化酶單體分子量為225－250Kd，含有許多磷酸化位點(diǎn),，以及1個(gè)生物素輔基位點(diǎn),、2個(gè)催化位點(diǎn)和1個(gè)異構(gòu)（allosteric）位點(diǎn)。乙酰輔酶A羧化酶催化生物素輔基（prosthetic group）的羧基化反應(yīng),，然后將生物素上的羧基轉(zhuǎn)移到輔酶A上,，產(chǎn)生丙二酰輔酶A（malonyl CoA），成為長(zhǎng)鏈脂肪酸合成前的關(guān)鍵步驟,。AMP活化蛋白激酶（AMP-Activated Kinase,；AMPK）調(diào)節(jié)該酶的活性，而十四烷基氧糠酸（5-(tetradecyloxy)-2-furoic acid,；TOFA）抑制該酶的活性,。基于底物乙酰輔酶A（acetyl CoA）和碳酸氫鹽，在ATP的存在下,，受到乙酰輔酶A羧化酶的催化,，獲得產(chǎn)物丙二酰輔酶A和ADP，進(jìn)而通過丙酮酸激酶（pyruvate kinase,；PK）和乳酸脫氫酶（lactate dehydrogenase,；LDH）反應(yīng)系統(tǒng)中，還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（reduced nicotinamide adenine dinucleotide,；NADH）轉(zhuǎn)化為氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（oxidized nicotinamide adenine dinucleotide,；NAD），其吸光峰值的變化（340nm），來定量分析乙酰輔酶A羧化酶的活性,。其反應(yīng)方式為：
Acetyl CoA Carboxylase
Acetyl Co-A + ATP + HCO3 → Malonyl CoA + ADP + Pi
pyruvate kinase
Phosphoenolpyruvate + ADP → pyruvate + ATP
lactate dehydrogenase
pyruvate + NADH → lactate + NAD+
（高吸收峰） （低吸收峰）
產(chǎn)品內(nèi)容
清理液（Reagent A） 60毫升
裂解液（Reagent B） 10毫升
緩沖液（Reagent C） 20毫升
酶促液（Reagent D） 2毫升
反應(yīng)液（Reagent E） 2毫升
底物液（Reagent F） 2毫升
陰性液（Reagent G） 500微升
產(chǎn)品說明書 1份
保存方式
保存 清理液（Reagent A）在4℃冰箱里,；其余的保存在－20℃冰箱里，避免反復(fù)凍融,；有效保證6月
用戶自備
1.5毫升離心管：用于樣品保存的容器
15毫升錐形離心管：用于樣品處理的容器
DOUNCE勻漿器：用于裂解組織
（微型）臺(tái)式離心機(jī)：用于樣品預(yù)處理
1厘米光徑比色皿或96孔板：用于光度分析操作的容器
分光光度儀或酶標(biāo)儀：用于樣品光度分析