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細(xì)胞沉默調(diào)節(jié)蛋白1 （SIRT1）活性比色法定量檢測(cè)
閱讀：1261 發(fā)布時(shí)間：2015-4-7| 提 供 商 | 上海哈靈生物科技有限公司 | 資料大小 | 45.4KB |
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主要用途
細(xì)胞沉默調(diào)節(jié)蛋白1 （SIRT1）活性比色法定量檢測(cè)試劑是一種旨在通過比色探針對(duì)硝基苯胺標(biāo)記人工合成的乙酰化p53多肽底物,，經(jīng)過SIRT1脫乙?；?，被位點(diǎn)特異性氨基肽酶水解,，釋放黃色對(duì)硝基苯胺，即采用比色法來測(cè)定細(xì)胞裂解萃取樣品中酶活性的而經(jīng)典的技術(shù)方法,。該技術(shù)經(jīng)過精心研制,、成功實(shí)驗(yàn)證明的,。其適用于各種細(xì)胞裂解萃取液樣品（動(dòng)物、人體）,、核蛋白樣品,、部分或*純化酶樣品中SIRT1的活性定量檢測(cè)，以及抑制劑和激活劑的篩選,。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌,，即到即用，操作簡捷,，性能穩(wěn)定。
技術(shù)背景
人體組蛋白脫乙?；?/span>（histone deacetylase,；HDAC）家屬分成三類共20多個(gè)蛋白：種類I（class I）與酵母Rpd3蛋白同源，包括HDAC1,、2,、3、8,，存在于細(xì)胞核中,；種類II（class II）與酵母Hda1蛋白同源，包括HDAC4,、5,、6、7,、9a,、9b、10和HDRP/MITR,，存在于細(xì)胞核和細(xì)胞漿里,；上述兩大種類的蛋白分子催化結(jié)構(gòu)域含有鋅，且曲古菌素A（trichostatin A,；TSA）敏感,。種類III（class III）為NAD+輔助因子必需，又稱為sirtuins,，與酵母Sir2（Silent Information Regulator 2）同源,，包括SIRT1至7等，為曲古菌素A（trichostatin A,；TSA）不敏感型賴氨酸脫乙?；福?/span>lysyl-deacetylase）。催化賴氨酸脫乙?；?/span>反應(yīng),，以及由NAD+和乙酰（acetyl）基團(tuán)轉(zhuǎn)化產(chǎn)生的煙酰胺（nicotinamide）和O-乙酰ADP核糖（O-acetyl-ADP-ribose）,。SIRT1位于細(xì)胞核內(nèi)，與酵母Sir2同源性高,。其功能在于調(diào)節(jié)p53活性和抑制細(xì)胞凋亡,。基于人工合成的乙?；痯53（379至382氨基酸位點(diǎn)）多肽底物Ac-Arg-His-Lys-Lys（Ac）具有抗氨基肽酶切離的功能,，首先使用比色染料對(duì)硝基苯胺（p-Nitroaniline；p-NA）來標(biāo)記乙?；痯53多肽底物,，其次進(jìn)行脫乙酰化,，后底物進(jìn)一步在氨基肽酶的催化酶解,，釋放出具有強(qiáng)烈吸光值的黃色對(duì)硝基苯胺（波長405nm），由此來定量測(cè)定沉默調(diào)節(jié)蛋白1的活性,。其反應(yīng)系統(tǒng)為：