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檢測(cè)范圍：80μg/ L2400μg/ L 96determinations的

目的

此套件可用于測(cè)定CRP濃度Ratserum,，cellculture物上清或其它相關(guān)生物液體

 

檢測(cè)原理

該試劑盒檢測(cè)樣本中RatCRP水平,，用純化RatCRP抗體涂層微孔，使固相抗體,，然后addCRP的井,，CombinedCRP抗體，HRP標(biāo)記,，成為抗體 - 抗原 - 酶標(biāo)抗體復(fù)合物,，經(jīng)過(guò)*洗滌后添加TMB底物溶液，在HRP酶催化TMB底物變成藍(lán)色,，反應(yīng)終止通過(guò)加入的硫酸溶液和顏色的變化是用分光光度法在450nm波長(zhǎng)下測(cè)量的,。大鼠CRP的濃度的樣品中，然后由比較OD值樣品的標(biāo)準(zhǔn)曲線,。

試劑盒提供的材料

1

洗的解決方案

20ML×1瓶

7

STOPP解決方案

6毫升×1瓶

2

酶標(biāo)試劑

6毫升×1瓶

8

標(biāo)準(zhǔn)（4800μg/ L）

0.5毫升×1瓶

3

Microelisa stripplate

12well×8strips

9

標(biāo)準(zhǔn)稀釋劑

1.5毫升×1瓶

4

樣品稀釋液

6毫升×1瓶

10

指令

1

5

顯色溶液A

6毫升×1瓶

11

封板膜

2

6

顯色液B

6毫升×1瓶

12

密封袋

1

標(biāo)本要求

1,。 ，盡快標(biāo)本采集后,，根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn),，應(yīng)該是extractas實(shí)驗(yàn)后盡快提取。如果它不能,，標(biāo)本可以保存在-20℃保存,，避免反復(fù)凍融。

2,。無(wú)法檢測(cè)的樣品含NaN3,，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。

分析過(guò)程

1,。稀釋和添加樣品：稀釋原始密度標(biāo)準(zhǔn)如下表所示：

2400μg/ L的

5標(biāo)準(zhǔn)

150μL原始密度標(biāo)準(zhǔn)+150微升標(biāo)準(zhǔn)稀釋劑

1200μg/ L的

4標(biāo)準(zhǔn)

150μL5標(biāo)準(zhǔn)150μL標(biāo)準(zhǔn)稀釋劑

600μg/ L的

3標(biāo)準(zhǔn)

150μL4標(biāo)準(zhǔn)150μL標(biāo)準(zhǔn)稀釋劑

300μg/ L的

2標(biāo)準(zhǔn)

150μL+150微升3標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)稀釋劑

150微克/ L

1標(biāo)準(zhǔn)

150μL+150微升2標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)稀釋劑

2,。加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）,。測(cè)試樣本,。加樣品稀釋液40μl的測(cè)試樣品，然后加入待測(cè)樣品10μl（樣品終稀釋度為5倍）,，加樣井,，不觸及孔壁盡可能輕輕地混合。

3,。溫育：閉板后封板膜,，在37℃孵育30分鐘。

配液：將30倍（或20倍）洗滌溶液稀釋30倍（或20倍）,，用蒸餾水和預(yù)定,。

5.washing：揭掉封板膜，干discardLiquid,，擺動(dòng),，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后排出,，重復(fù)5次,，拍干。

加酶,，每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,，空白孔除外。

溫育：操作3,。

洗滌：操作5,。

9。顏色：,，每孔加入顯色溶液A的50ul的顯色溶液B,，避光保存15分鐘，在37℃

反應(yīng)10.Stop的：加入終止液,，每孔,，停止反應(yīng)（黃色的藍(lán)色的顏色變化）。

11.assay：以空白零,，讀加終止液后15分鐘內(nèi),，在450nm處的吸光度,。

步驟說(shuō)明

標(biāo)準(zhǔn)，樣品稀釋液

 

AddStandard,，樣品稀釋液,，37℃孵育30分鐘。

 

洗5次,，共軛AddHRP的試劑,，在37℃孵育30分鐘。

 

洗5次,，加入顯色解決方案A和B,，孵育在37℃30分鐘。

 

AddStopp解決方案

 

15分鐘內(nèi),，在450nm處的吸光度

 

計(jì)算

計(jì)算

以水平的標(biāo)準(zhǔn)密度,，OD值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線在坐標(biāo)紙上,，找出相應(yīng)的密度,，根據(jù)樣品的OD值由采樣曲線，再乘以稀釋倍數(shù),，或計(jì)算直線標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程,，與標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值，將樣品的OD值代入方程式,，計(jì)算出樣品的密度,，乘以稀釋倍數(shù)，其結(jié)果是樣品的實(shí)際密度,。

重要注意事項(xiàng)

1,。該試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘，ELISA板涂如果還沒(méi)有使用后打開,，板應(yīng)裝入密封袋中保存,。

2。洗滌緩沖液可能會(huì)有結(jié)晶析出,，可被加熱的水,，可以在稀的情況下溶解。洗滌時(shí)不影響結(jié)果,。

3,。加樣品采樣的每一步，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,，以避免試驗(yàn)誤差,。在5分鐘內(nèi)添加樣品，如果樣品的數(shù)量多，推薦使用排,。

4,。如果待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高（樣本OD是大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*），請(qǐng)稀釋樣品（n倍）,，請(qǐng)乘以稀釋倍數(shù)diluenteand,。（×N×5）,。

5,。封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染,。

6,。基板避光保存,。

7,。請(qǐng)嚴(yán)格按照說(shuō)明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀作為標(biāo)準(zhǔn),。

8,。所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。

9,。不要混用試劑與從其他地段。

 

儲(chǔ)存與有效期

不要將2-8℃,。

2.validity：半年