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兔心脂肪酸結(jié)合蛋白（H-FABP）ELISA試劑盒說明書
閱讀：1326 發(fā)布時間：2013-7-25| 提 供 商 | 上海哈靈生物科技有限公司 | 資料大小 | 10KB |
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兔心脂肪酸結(jié)合蛋白（H-FABP）ELISA試劑盒
（用于血清,、血漿,、細胞培養(yǎng)上清液和尿液生物體液內(nèi)）
原理
本實驗采用雙抗體夾心 ABC-ELISA法,。用抗兔 H-FABP 單抗包被于酶標板上,，標準品和樣品中的 H-FABP與單抗結(jié)合,，加入生物素化的抗兔H-FABP，形成免疫復(fù)合物連接在板上,，辣根過氧化物酶標記的Streptavidin與生物素結(jié)合，加入底物工作液顯藍色,，后加終止液硫酸,，在450nm處測OD值，H-FABP濃度與OD值成正比,，可通過繪制標準曲線求出標本中H-FABP濃度,。
試劑盒組成（2-8℃保存）
酶標板（Coated Wells）:96孔
酶標抗體工作液（Enzyme Conjugate）:12ml
10×標本稀釋液（Sample Buffer）:12ml
20×濃縮洗滌液（Wash Buffer）:50ml
標準品（Standards）：40ng/瓶（2瓶）
底物工作液（TMB Solution）:12ml
*抗體工作液（Biotinylated Antibody）:12ml
終止液（Stop Solution）:12ml
準備試劑與收集血樣
1.收集標本：血清、血漿（EDTA,、檸檬酸鹽,、肝素抗凝）、細胞培養(yǎng)上清液,、組織勻漿,、尿液等盡早檢測，2-8℃保存48小時,；更長時間須冷凍（-20℃或-70℃）保存,，避免反復(fù)凍融。所有標本測定前用標本稀釋液作1：10稀釋（取20ul,，加標本稀釋液180ul,稀釋10倍）,。
2.標準品液配制：使用前加入2ml蒸餾水混勻，配成20ng/ml的溶液。設(shè)標準管8管,，*管加標本稀釋液900ul,，第二至第八管加入標本稀釋液500ul。在*管中加入20ng/ml的標準品溶液100ul混勻后用加樣器吸出500ul,，移至第二管,。如此反復(fù)作對倍稀釋，從第七管中吸出500ul棄去,。第八管為空白對照,。
3.10×標本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋（示例：1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水）。
4.洗滌液：用重蒸水1:20稀釋（示例：1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水）
檢測程序
1.加樣：每孔各加入標準品或待測樣品100ul,，將反應(yīng)板充分混勻后置37℃120分鐘,。
2.洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次，向濾紙上印干,。
3.每孔中加入*抗體工作液100ul,。將反應(yīng)板充分混勻后置37℃60分鐘。
4.洗板：同前,。
5.每孔加酶標抗體工作液100ul,。將反應(yīng)板置37℃30分鐘。
6.洗板：同前,。
7.每孔加入底物工作液100ul,，置37℃暗處反應(yīng)15分鐘。
8.每孔加入100ul終止液混勻,。
9.30分鐘內(nèi)用酶標儀在450nm處測吸光值,。
結(jié)果計算與判斷
1.所有OD值都應(yīng)減除空白值后再行計算。
2.以標準品2000,、1000,、500、250,、125,、62.5、31.2,、0 pg/ml為橫坐標,，OD值為縱坐標，在坐標紙上作圖,，畫出標準曲線,。
3.根據(jù)樣品OD值在該曲線圖上查出相應(yīng)H-FABP含量，再乘上稀釋倍數(shù)10即可,。
試劑盒性能
1.靈敏度：小的H-FABP 檢測濃度小于15pg/ml,。
2.特異性：可同時檢測重組或天然的兔H-FABP,。不與兔其它細胞因子有交叉反應(yīng)。
3.重復(fù)性：板內(nèi),、板見變異系數(shù)均小于10.6％,。
注意事項
1.以上標準孔及待測樣品均建議做復(fù)孔，每次測定應(yīng)同時做標準曲線,。
2.洗滌過程很關(guān)鍵,。洗滌不充分將導(dǎo)致度誤差及OD值錯誤地升高。
3.板條開封后剩余板條要再封好,，保持板條干燥,。
4.本試劑盒宜置4oC冰箱保存。
5.本試劑盒僅用于科研,，不能用于臨床診斷,！
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