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保存方式

 

保存染色液（Reagent B）在－20℃冰箱里,，避免光照,；其余的保存在4℃冰箱里,；有效保證6月

 

用戶自備

 

1.5毫升離心管：用于染色工作液配制和組織細(xì)胞染色的容器

培養(yǎng)箱：用于染色孵育

（共聚焦）熒光顯微鏡：用于組織細(xì)胞熒光分析

 

 

實(shí)驗步驟

 

實(shí)驗開始前,，將－20℃冰箱里的試劑盒中的染色液（Reagent B）置入冰槽里融化，中和液（Reagent C）放進(jìn)37℃恒溫水槽里預(yù)熱,。然后移出xx微升染色液（Reagent B）到新的1.5毫升離心管,，加入xx微升中和液（Reagent C），混勻后,，標(biāo)記為染色工作液,，置入暗室里。然后進(jìn)行下列操作,。

  

• 準(zhǔn)備5片待測的厚為10微米的未經(jīng)固著處理的冰凍切片
• 置于室溫下,，小心加上xx微升預(yù)冷的清理液（Reagent A），鋪滿整個切片表面
• 小心移去切片上的清理液（Reagent A）
• 小心加上xx微升室溫預(yù)熱的染色工作液,，鋪滿整個切片表面
• 在37℃濕潤培養(yǎng)箱里,，孵育30至60分鐘（注意：避免液體蒸發(fā)）
• 小心移去切片上的染色工作液，避免光照
• 小心加上xx微升清理液（Reagent A）,，鋪滿整個切片表面
• 小心移去切片上的清理液（Reagent A）
• 重復(fù)實(shí)驗步驟7和8一次
• 放上蓋玻片或封片
• 即刻在（共聚焦）熒光顯微鏡下觀察（定性檢測）：激發(fā)波長488nm,，散發(fā)波長505nm――綠色熒光減弱，表明膜通道孔活性（MPTP）增強(qiáng)

注意事項

 

• 本產(chǎn)品為50次操作
• 操作時,，避免污染母液
• 操作時,，須戴手套
• 建議使用新鮮組織（手術(shù)切除后1小時內(nèi)）制成的冰凍切片
• 染色前，所有試劑溶液,，除染色液（Reagent B）外,，需37℃預(yù)熱
• 建議組織染色完成后，即刻進(jìn)行熒光檢測分析 
• 孵育時,，必須避免光照
• 本產(chǎn)品友好使用于雙重染色或重疊染色
• 如果不具備505nm散發(fā)波長的濾波器,，可以使用505nm至530nm中的任一波長
• 本公司提供膜通道孔抑制劑： 0.2毫摩爾環(huán)胞素A（cyclosporine A）－12226，維護(hù)熒光完整
• 本公司提供系列線粒體分析試劑產(chǎn)品