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哈靈生物實(shí)驗(yàn)室——血清常見問題及解決
閱讀：1081 發(fā)布時(shí)間：2015-5-21哈靈生物實(shí)驗(yàn)室——血清常見問題及解決
血清是細(xì)胞培養(yǎng)中重要的元素之一,。因此,，我整理了一些相關(guān)資料,，也是實(shí)驗(yàn)室里常會(huì)遇到的問題,，僅供大家參考：
1,、保存血清的方法？
我們建議血清應(yīng)保存在-5C至-2OC,。然而,，若存放于4C時(shí)，請勿超過一個(gè)月,。若您一次無法用完一瓶,，建議您無菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi)，再放回冷凍,。
2,、如何解凍血清才不會(huì)使產(chǎn)品質(zhì)量受損?
我們建議您將血清從冷凍箱取出后，先置于2-8C冰箱使之溶解,，然后在室溫下使之全溶,。但必須注意的是，溶解過程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻,。
3,、血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn)，該如何處理?
血清中沉淀物的出現(xiàn)有許多種原因,，但普的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成,，而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血渭解凍后，也會(huì)存在于血清中，亦是造成沉淀物的主要原因之一,。但這些絮狀沉淀物,，并不影響血清本身的質(zhì)量。
若您欲去除這些絮狀沉淀物,，可以將血清分裝至無菌離心管內(nèi),，以400g稍微離心,上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾。我們不建議您以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物,，因?yàn)樗赡軙?huì)阻塞您的過濾膜,。
4.何謂熱滅活?
一般是以56C，30分鐘來處理已解凍的血清,，因?yàn)榇思訜岵襟E,，可以使補(bǔ)體去活化，而補(bǔ)體所參與的反應(yīng)有:溶細(xì)胞活性,，平滑肌的收縮,，肥大細(xì)胞和血小板組胺的釋放，增強(qiáng)吞噬作用,，淋巴細(xì)胞,、巨噬細(xì)胞的趨化和激活。
5,、有必要做熱滅活嗎?
實(shí)驗(yàn)顯示,，經(jīng)過正確處理的熱滅活血清,，對大多數(shù)的細(xì)胞而言是不需要的,。經(jīng)此處理過的血清對細(xì)胞的生長只有微小的促進(jìn)，或*沒有任何作用,，甚至通常因?yàn)楦邷靥幚碛绊懥搜宓馁|(zhì)量,，而造成細(xì)胞生長速率的降低。而經(jīng)過熱處理的血清,，沉淀物的形成會(huì)顯著的增多,，這些沉淀物在倒立顯微鏡下觀察，像是 "小黑點(diǎn)",，常常會(huì)讓研究者誤以為是血清遭受污染,，而把血清放在37C環(huán)境中，又會(huì)使此沉淀物更增多,，使研究者誤認(rèn)為是微生物的分裂擴(kuò)增,。
因此我們建議您，若非必須,，您可以不需要做熱處理這一步,。如此一來，不但節(jié)省您寶貴的時(shí)間，更確保您血清的質(zhì)量!另外,，購買已滅活成品也不失一個(gè)捷徑,，請?jiān)谫徺I的時(shí)候注意詢問廠家是否是已滅活血清。
6,、如何避免沉淀物的產(chǎn)生?
我們建議您在使用血清的時(shí)候,，注意下列的操作:
*解凍血清時(shí)，請按照所建議的逐步解凍法(-2O,。C至4,。C至室溫)，若血清解凍時(shí)改變的溫度太大(如-20,。C至37,。C)，實(shí)驗(yàn)顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物,。
*解凍血清時(shí),，請隨時(shí)將之搖晃均勻，使溫度及成分均一,，減少沉淀的發(fā)生
*請勿將血清置于37,。C太久。若在37,。C放置太久,，血清會(huì)變得混濁，同時(shí)血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會(huì)因此受到損害,，而影響血清的質(zhì)量,。
*血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要,，可以無須做此步驟,。
*若必須做血清的熱滅活，請遵守56,。C,，30分鐘的原則，并且隨時(shí)搖晃均勻,。溫度過高,，時(shí)間過久或搖晃不均勻，都會(huì)造成沉淀物的增多,。