技術文章
哈靈生物 —— Elisa實驗中血清的采集及注意事項
閱讀:1191 發(fā)布時間:2015-5-20哈靈生物 —— Elisa實驗中血清的采集及注意事項
ELISA試劑盒實驗中,,對于采集血清經(jīng)常碰到很多問題:
1,、標本采集后什么時候開始離心,,有說采集半小時后離心的,,還有說采集全血后在4℃guoye,,再離 心,,如果采集后7-8小時再離心可以嗎?
2,、離心時多少轉,、離心幾分鐘比較合適
血清標本可按常規(guī)方法采集,應注意避免溶血,,紅細胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質(zhì),,以HRP 為標記的ELISA 測定中,溶血標本可能會增加非特異性顯色,。血清標本宜在新鮮時檢測,。如有細菌污染,,菌體中可能含有內(nèi)源性HRP,也會產(chǎn)生假陽性反應,。一般說來,,在5 天內(nèi)測定的血清標本可放置于4℃,標本在冰箱中保存時間過長導致血清IgG 聚合,,使間接法的試劑本底加深,。超過一周測定的需-20℃保存。凍結血清融解后,,蛋白質(zhì)局部濃縮,,分布不均,應充分混勻并避免產(chǎn)生氣泡,?;鞚峄蛴谐恋淼难?/a>標本應先離心或過濾,澄清后再檢測,。反復凍融會使抗體效價跌落,,所以測抗體的血清標本如需保存作多次檢測,,宜少量分裝冰存,。保存血清自采集時就應注意無菌操作,也可加入適當防腐劑,。
實驗中,,標本離心越早越好,但多數(shù)標本要30分鐘后才凝集完畢,,離心時間在2小時內(nèi)完成,,(尤其生化)時間太長血液中的細胞成分會分解血漿中有機成分,離子也會發(fā)生轉移造成誤差,;4度冷藏雖能降低紅細胞活性但細胞還會進行緩慢無氧酵解,,血糖會明顯減低,冷藏時需分離血清儲存,;對于酶免試驗影響較小,,但時間太長也會引起偏差如蛋白質(zhì)變性,水分蒸發(fā)造成誤差離心速度一般要求1500~3000轉之間(25000轉),,離心速度低會離心不*,,速度過快容易溶血,一般離心5~15分鐘即可(約10分鐘),。